光照周期对褪黑激素受体在母兔下丘脑-垂体-卵巢轴中分布与表达的影响

旨在观察不同光照周期对新西兰白色母兔褪黑激素受体在"下丘脑-垂体-性腺轴"中的分布和表达模式,从而进一步分析褪黑激素在不同光照周期下调控母兔发情的机制。选用5月龄未经产新西兰母兔48只,随机分成3组,每组16只,前10 d各试验组采用"12 h光照：12 h黑暗"的光照制度,后6 d分别采用长光照（16 h光照：8 h黑暗）、短光照（8 h光照：16 h黑暗）和正常光照（12 h光照：12 h黑暗,对照组）的光照制度,光照强度80 lx,试验期为16 d。试验结束后剖杀动物,取下丘脑、垂体和卵巢,用qPCR、免疫印迹、免疫组织化学方法,研究不同光照周期对母兔的下丘脑、垂体、卵巢中褪黑激素受体亚型分布与表达的影响。结果表明：在下丘脑,短光照组的MT1 mRNA表达量较长光照组高88.8%（P<0.05）,较对照组高54.9%（P<0.05）,长光照组与对照组间无显著差异;MT2 mRNA表达量在不同光周期组间差异不显著（P>0.05）。免疫组织化学染色结果显示,长光照组下丘脑室周核的MT1阳性细胞数明显较短光照组少69.4%（P<0.05）,较对照组少37.3%（P<0.05）,短光照组比对照组显著多104.8%（P<0.05）;同样,长光照组室旁核的MT1阳性细胞数明显较短光照组少52.9%（P<0.05）,对照组明显较短光照组少55.8%（P<0.05）,而长光照组与对照组间差异不显著（P>0.05）。在垂体,短光照组的MT1 mRNA表达量比长光照组显著高164%（P<0.05）,比对照组显著高49.5%（P<0.05）,而长光照组比对照组显著低43.5%（P<0.05）;但不同光周期下MT2 mRNA表达量差异不显著（P>0.05）;长光照组的卵巢MT1 mRNA表达量较对照组低33.3%（P<0.05）,较短光照组低53.6%（P<0.05）,短光照组与对照组间差异不显著（P>0.05）;卵巢中短光照组MT2的mRNA相对表达量比对照组显著高90.0%（P<0.05）,比长光照组显著高100%（P<0.05）,长光照组与对照组差异不显著（P>0.05）。短光照周期显著提高了下丘脑、垂体和卵巢中褪黑激素受体亚型MT1表达,而不是MT2受体亚型。光照周期调控母兔发情的作用机制可能是褪黑激素通过MT1受体途径实现的。     

不同光照周期对雌兔卵泡发育和下丘脑-垂体-卵巢轴的影响

本研究旨在观察不同光照周期对母兔的发情率、同期发情和性腺轴的影响并探讨其机制。选用5月龄未经产新西兰母兔48只,随机分成3组,每组16只,前10 d各试验组采用"12 h光照∶12 h黑暗"的光照制度,后6 d分别采用长光照(16 h光照∶8 h黑暗)、短光照(8 h光照∶16 h黑暗)和正常光照(12 h光照∶12 h黑暗,对照组)的光照制度,光照强度80 lx。试验结束后统计发情率,并采集血清、下丘脑、垂体和卵巢,用ELISA、HE染色、RT-PCR的方法,研究不同光照周期下对雌兔卵泡发育和激素的影响。结果表明:长光照组血清褪黑激素水平比对照组显著低34.8%(P0.05)、比短光照组显著低47.8%(P0.05),而短光照组比对照组高25%(P0.05)。长光照组母兔下丘脑分泌GnRH mRNA表达显著增强,其mRNA表达量比短光照组显著升高453%(P0.05),比对照组显著升高250%(P0.05);而短光照组的比对照组降低36.7%(P0.05)。同样,长光照组母兔垂体的GnRH mRNA表达量较短光照组、对照组分别高70%和41.7%,差异显著(P0.05);短光照组则比对照组降低16.7%(P0.05)。长光照组的血清卵泡刺激素水平分别比短光照组、对照组高33.7%和25.1%,差异显著(P0.05)。长光照组血清促黄体生成素含量比短光照组显著高54.2%(P0.05)。长光照组血清雌二醇水平较对照组显著高34.8%(P0.05),较短光照组显著高47.8%(P0.05);短光照组比对照组低17.6%(P0.05)。长光照组的单位面积初级卵泡数显著多于短光照组120%(P0.05)和对照组68.3%(P0.05),短光照组与对照组相比差异不显著(P0.05)。3个试验组卵巢单位面积窦状卵泡数没有显著差异(P0.05)。长光照组的发情率为81.25%,而短光照组的仅为12.5%,对照组的发情率为31.25%。由本试验可知,长光周期组可抑制褪黑激素分泌、促进下丘脑分泌GnRH活性增强、提高垂体细胞GnRH受体表达、促进垂体分泌LH、FSH、提高了血清中LH、FSH的水平、促使雌二醇分泌、卵泡发育、成熟和排卵,诱导母兔同期发情。     

哺乳动物下丘脑-垂体-卵巢轴的研究进展

哺乳动物的下丘脑、垂体和卵巢分泌的激素在功能上相互作用,构成一个完整的神经内分泌生殖调节体系,即下丘脑垂体卵巢轴,它在生殖活动中起着主要的调节作用。下丘脑中分布的GnRH神经元可以分泌GnRH,GnRH调节垂体中促性腺激素细胞分泌促性腺激素FSH和LH,促性腺激素作用于卵巢受体,引起雌激素和孕酮分泌并影响生殖活动。从组织学角度上研究,下丘脑垂体卵巢轴中的结构,如GnRH神经元、促性腺激素细胞、卵泡随周期性变化而呈现出不同的形态结构和分泌特点。因此,对以上各种细胞的研究是探讨其所分泌激素的基础,而下丘脑垂体卵巢轴中的各种激素的研究则是了解和控制动物繁殖机能的关键。     

一氧化氮对下丘脑-垂体-卵巢轴的生理调控

一氧化氮(NO)是一种重要的多功能因子,能够介导许多生理功能,其中包括不同的生殖过程,如调节卵泡的发育、排卵、卵母细胞减数分裂的成熟等。虽然近年来科学家对NO在卵巢生理功能方面的影响有了初步的认识,但是NO作用的准确机理尚需深入探讨。今后的研究目标是要证实卵巢机能不良是否与NO合成相关,以及是否能通过NO治疗克服这些缺陷。文章着重介绍了NO对下丘脑垂体水平的影响,以及对卵巢生理功能(类固醇激素合成,卵泡生长,排卵,黄体的功能和衰退等)调控的研究进展。     

发情周期中奶山羊下丘脑-垂体-卵巢轴催产素的免疫组化定位

用免疫组化ABC法,对发情周期中奶山羊下丘脑-垂体-卵巢轴催产素(OT)分布进行了观察研究.结果表明,下丘脑中分泌OT的神经元主要分布在室旁核和视上核,在穹窿周核、腹内侧核、腹外侧核、交叉上核、背内侧核、乳头体、下丘脑外侧区、下丘脑前核等核团也有一定数量的阳性神经元;阳性神经纤维仅见于室旁核、下丘脑前核、视上核等少数核团,在正中隆起和第3脑室室周可见到一定数量的阳性神经纤维.在垂体前叶未见到OT免疫反应阳性产物,自垂体柄和正中隆起的一侧可见到平行排列的OT阳性神经纤维断续地延伸至神经部.卵巢的卵泡及间质未见OT免疫阳性反应,,在黄体组织中存在数量较多的免疫反应阳性细胞,阳性细胞主要呈圆形、卵圆形,小梁两侧及黄体中央近腔区域的阳性细胞呈长梭形,有相当数量的阳性细胞具有突起.连续切片HE染色对照观察显示,黄体中OT主要由大黄体细胞产生,但小黄体细胞也存在OT免疫阳性反应.     

脂联素及其受体在动物下丘脑-垂体-性腺轴中的表达与作用

下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴在动物生殖调控中扮演重要角色,研究HPG轴功能的调控因子及机制已成为生殖内分泌学领域的热点。近年来的研究发现,脂肪组织能合成和分泌多种细胞因子,其中脂联素及其受体在调控动物生殖及胚胎生长发育方面起到重要作用,本文就脂联素及其受体在动物HPG轴的表达与作用进行综述。     

ESR1与PGR基因在不同繁殖力小尾寒羊下丘脑-垂体-卵巢轴的表达研究

本试验旨在揭示ESR1和PGR基因在小尾寒羊多羔性状中的作用,深入研究绵羊多羔性状的机理。采用半定量反转录-聚合酶链式反应结合实时荧光定量PCR技术检测ESR1和PGR基因在不同繁殖力小尾寒羊群体12个组织(小脑、下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏)中的表达差异。结果表明:ESR1和PGR基因在不同繁殖力小尾寒羊群体的12个组织中均有表达;ESR1和PGR基因分别在小尾寒羊子宫和输卵管中高表达;多羔小尾寒羊子宫、输卵管、卵巢和下丘脑组织中ESR1基因的表达量与单羔小尾寒羊无显著差异(P0.05);多羔小尾寒羊输卵管、子宫、卵巢和下丘脑组织中PGR基因的表达量极显著高于单羔小尾寒羊群体(P0.01)。结果提示,PGR基因可能参与小尾寒羊多羔性状的调控。     

GnRH在妊娠期黄牛下丘脑—垂体—卵巢轴中的表达

旨在研究促性腺激素释放激素(GnRH)在妊娠期黄牛下丘脑—垂体—卵巢轴中的表达,探索其与妊娠的关系。运用免疫组化ABC法和图像分析软件Image-ProPlus6.0对妊娠期黄牛下丘脑、垂体和卵巢组织中GnRH的表达情况进行研究。结果表明:(1)在下丘脑中,GnRH阳性神经元主要分布于下丘脑前核(AH)、乳头体内侧核(MMN)、腹内侧核(VMN)、弓状核(ARC)及室旁核(PVN),其中AH和MMN阳性产物分布面积(S)和累计光密度(IOD)值均较大(SAHSMMNSVMNSARCSPVN和IODAHIODMMNIODVMNIODARCIODPVN;P0.001);(2)在腺垂体中,存在大量GnRH阳性细胞,而神经垂体中仅有GnRH阳性纤维;(3)在卵巢中,GnRH阳性产物分布在妊娠黄体、卵泡颗粒细胞及间质中。结果提示,在下丘脑各核团中,AH和MMN的GnRH可能对维持黄牛妊娠起主导作用,而垂体和卵巢中GnRH可能是通过自分泌和旁分泌方式与相关激素协同作用来维持妊娠黄牛的激素平衡及内环境稳态等。     

鹅下丘脑-垂体-卵巢轴上ghrelin的免疫组化定位

生长激素促分泌素受体的配体(ghrelin)是Ko-jima等人于1999年发现的,目前为止第1个天然的内源性的生长激素促分泌素受体(GHS-R)的配体[1].哺乳动物ghrelin为28个氨基酸残基的多肽,禽类的ghrelin则由26个氨基酸残基组成[2].     

冷应激对雏鸡下丘脑-垂体-甲状腺轴的影响

越来越多的证据表明,应激能够激活下丘脑-垂体-甲状腺轴,进而影响促甲状腺激素释放激素(TRH)、促甲状腺激素(TSH)及甲状腺激素的合成与分泌。为了探明冷应激对雏鸡下丘脑-垂体-甲状腺轴的影响,以公雏鸡为实验动物,进行急性(0.25、1、3、6、12h与24h)与慢性(5、10d与20d)冷应激处理(12±1)℃,检测了雏鸡下丘脑TRH mRNA的表达水平,血清TSH、FT(3T3的游离形式)及FT(4T4的游离形式)的含量。结果表明:急性应激时,TRH mRNA的表达水平在各应激时间点均显著升高,TSH变化不明显,FT3开始无变化,在6h时突然降低,而后又显著升高,FT4开始变化不大,6h后显著升高;慢性应激时,TRH mRNA的表达水平与相应的对照组相比显著降低,TSH变化仍不明显,FT3呈上升趋势,而FT4呈下降趋势。这说明冷暴露可以使雏鸡下丘脑-垂体-甲状腺轴的激素分泌发生改变,而且不同程度的冷应激对同一激素也会产生不同的影响。     

脂多糖刺激对断奶仔猪下丘脑-垂体-肾上腺轴PPARγ表达的影响

研究脂多糖(LPS)对断奶仔猪下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)表达的影响。对照组注射生理盐水,试验组注射LPS。注射后1.5 h和3 h采血,3 h采血后屠宰。结果表明:LPS刺激后1.5 h,中性粒细胞含量及其比例显著下降(P<0.05);LPS刺激后3 h,白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞含量显著下降(P<0.05)。LPS刺激后1.5 h,血浆肿瘤坏死因子(TNF)-α、皮质醇和促肾上腺皮质激素释放素激素(CRH)含量显著上升(P<0.05);LPS刺激后3 h,血浆TNF-α、皮质醇和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量显著上升(P<0.05);LPS刺激导致下丘脑、腺垂体、肾上腺皮质和髓质中PPARγ阳性细胞百分率显著升高(P<0.05)。这表明LPS导致免疫应激,激活HPA轴,诱导HPA轴PPARγ的表达。     

不同光周期对肉鸡免疫器官褪黑激素受体表达的影响

为研究不同光周期对肉鸡胸腺和脾脏褪黑激素受体(Mel1a、Mel1b、Mel1c)表达的影响，阐明光周期影响肉鸡免疫功能的可能途径，本试验选用0日龄雄性817肉鸡45只，按照光照∶黑暗为8 h∶16 h、12 h∶12 h、16 h∶8 h三种不同的光周期随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。饲养2周后取肉鸡胸腺和脾脏组织，测定其器官指数，采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测其褪黑激素受体Mel1a、Mel1b和Mel1c基因的相对表达水平。结果显示，与Ⅱ组和Ⅲ组相比，Ⅰ组胸腺指数分别提高了16.13%(P<0.05)和22.03%(P<0.05),脾脏指数分别提高了19.40%(P>0.05)和21.21%(P<0.05),胸腺Mel1a基因相对表达水平分别升高了27.25%(P<0.05)和88.56%(P<0.05),脾脏Mel1a基因相对表达水平分别升高了11.53%(P<0.05)和19.08%(P<0.05),胸腺Mel1b基因相对表达水平分别升高了15.59%(P>0.05)和30.65%(P<0.05),脾脏Mel...     

梅山与长大母猪下丘脑-垂体-卵巢轴Kiss1和GPR54基因的表达差异

研究早熟与晚熟品种母猪下丘脑-垂体-卵巢轴Kiss1和GPR54基因的表达差异。选用8头梅山母猪与12头长大(LY)母猪为研究对象,梅山母猪于70 d和100 d屠宰,LY母猪于70、100 d和199 d屠宰,收集血清及下丘脑、垂体、卵巢组织样品。ELISA检测血清瘦素(Leptin)和雌二醇(E2)水平,PCR克隆梅山与LY母猪Kiss1基因编码序列,实时荧光定量PCR检测母猪下丘脑、垂体、卵巢组织Kiss1和GPR54基因表达水平。结果表明:梅山与LY母猪Kiss1基因编码序列相似性为100%;梅山与LY母猪初情期下丘脑Kiss1基因表达量极显著高于垂体与卵巢(P<0.01),卵巢GPR54基因表达水平显著高于下丘脑与垂体(P<0.05)。梅山母猪下丘脑-垂体-卵巢轴Kiss1基因表达水平都显著高于相同日龄和初情期LY母猪(P<0.05),梅山母猪血清Leptin水平极显著高于相同日龄LY母猪(P<0.01)。而E2水平显著高于100 d与初情期LY母猪(P<0.01)。Leptin与下丘脑Kiss1和GPR54基因表达呈显著正相关(P<0.05),而E2仅与下丘脑Kiss1基因表达有极显著正相关关系(P<0.01);梅山与LY母猪Kiss1基因编码区序列相似性为100%,梅山母猪下丘脑-垂体-卵巢轴上kiss1基因表达量较LY母猪高,主要原因可能是初情日龄早,下丘脑Kiss1基因表达水平的高低与血清Leptin和E2浓度密切相关。     

褪黑激素受体1a基因在内蒙古绒山羊垂体中的表达

本试验从内蒙古绒山羊脑垂体中提取总RNA,根据已发表的相近物种褪黑激素受体1a(melatonin receptor 1 a,MTNR1a)基因序列设计引物,利用实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(real-time quantitative,RT-PCR)技术、组织原位杂交技术检测MTNR1a基因在内蒙古绒山羊垂体中的表达。结果显示,通过RT-PCR方法检测到MTNR1a基因在内蒙古绒山羊垂体中表达,利用原位杂交技术进一步确定MTNR1a基因在垂体中表达分布。结果提示,垂体是褪黑激素作用的靶器官,褪黑激素对绒山羊季节性繁殖的影响有可能是与垂体分泌的某些激素相互作用而发挥作用的。     

ER免疫反应产物在幼龄公山羊下丘脑-垂体-性腺轴的表达

应用免疫组化SP法时雌激素受体(ER)免疫反应产物在幼龄公山羊下丘脑、垂体、性腺中的分布特点进行了研究。结果显示，下丘脑中ER免疫反应阳性神经元主要分布在视上核、室旁核、室周核等9个核团，在视前区、下丘脑外侧区等核团也有一定数量的阳性神经元；阳性细胞呈圆形、卵圆形、三角形不等，阳性物质大多位于细胞质和胞核，阳性纤维散布于各阳性核团中；在正中隆起和第三脑室室管膜可见大量小而密集排列的深染的阳性神经元。神经垂体中可见大小不等、排列较均匀且染色较深的纤维，腺垂体中腺细胞呈强阳性着色。睾丸曲细精管中的初级精母细胞和支持细胞以及睾丸间质细胞中的ER阳性产物均为微弱表达。由此表明，幼龄公山羊雌激素除作用于性腺外，还主要作用于中枢神经系统的广泛区域，推测其参与了脑中生殖、内分泌、认知等多种功能的调控。     

下丘脑-垂体-性腺轴在动物生殖中的作用

下丘脑－垂体－性腺轴在动物生殖中的作用王根林（南京农业大学动物科技学院２１００１５）动物生殖是一个十分复杂的生理过程。广义而论，生殖过程的开始应从早期胚胎性分化为起点。虽然此时胚胎并没有一般意义上的性腺及性器官的明显发育，但却伴随着一系列生殖生理及形...     

NKB及其受体NK3R基因在发情周期不同阶段小鼠下丘脑-垂体-卵巢中的表达研究

为了揭示NKB/NK3R调控雌性哺乳动物生殖激素分泌的作用机制,试验将40只6～8周龄雌性小鼠按照发情周期不同阶段分类,处死后采集丘脑、垂体和卵巢组织,提取RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测发情周期各阶段小鼠下丘脑、垂体和卵巢中NKB、NK3R基因的相对表达量并进行比较分析。结果表明：在发情前期和发情期,小鼠NKB基因的相对表达量均为垂体最高,卵巢居中,下丘脑最低;在发情后期,小鼠NKB基因的相对表达量为下丘脑最高,垂体居中和卵巢最低;在发情间期,小鼠NKB基因的相对表达量为下丘脑最高,卵巢居中,垂体最低。NK3R基因的相对表达量在发情前期、发情期、发情后期和发情间期的趋势一致,均为下丘脑最高,垂体居中,卵巢最低。各组织中,NK3基因的相对表达量均为发情前期最高,发情期居中,发情后期和发情间期较低。在下丘脑中,发情周期不同阶段NK3R基因的相对表达量差异不大;在垂体和卵巢中,NK3R基因的相对表达量均为发情后期最高,发情间期居中,发情前期和发情期较低。提示NKB/NK3R可能参与了雌性哺乳动物发情周期各阶段生殖激素的合成与分泌。     

初情期前后GPR54 mRNA在猪下丘脑-垂体-卵巢轴内的定位

研究应用原位杂交技术检测GPR54 mRNA在苏姜猪下丘脑-垂体-卵巢轴中的分布定位.在60日龄和初情期(160日龄)2个不同发育阶段的下丘脑-垂体-卵巢轴中均检测到GPR54 mRNA阳性杂交信号,结果表明:苏姜猪2个不同发育阶段的3种组织中均有GPR54 mRNA表达.其中下丘脑以弓状核、腹内侧核的阳性杂交信号最强,尤其是在初情期更明显;各级卵泡中以初情期时成熟卵泡的阳性杂交信号最强.     

发情周期中奶山羊下丘脑—垂体—卵巢轴催产素的免疫组化定位

用免疫组化ABC法，对发情周期中奶山羊下丘脑—全体—卵巢轴催产素(OT)分布进行了观察研究。结果表明，下丘脑中分泌OT的神经元主要分布在室旁核和视上核，在穿窿周核、腹内侧核、腹外侧核、交叉上核、背内侧核、乳头体、下丘脑外侧区、下丘脑前核等核团也有一定数量的阳性神经元；阳性神经纤维仅见于室旁核、下丘脑前核、视上核等少数核团，在正中隆起和第3脑室室周可见到一定数量的阳性神经纤维。在全体前叶未见到OT免疫反应阳性产物，自垂体柄和正中隆起的一例可见到平行排列的OT阳性神经纤维断续地延伸至神经部。卵巢的卵泡及间质未见OT免疫阳性反应，在黄体组织中存在数量较多的免疫反应阳性细胞，阳性细胞主要呈圆形、卵圆形，小梁两侧及黄体中央近腔区域的阳性细胞呈长梭形，有相当数量的阳性细胞具有突起。连续切片HE染色对照观察显示，黄体中OT主要由大黄体细胞产生，但小黄体细胞也存在OT免疫阳性反应。