西洋参内生真菌分离鉴定及生防特性

为促进西洋参病害的生物防治研究,通过采用纯培养方法分离纯化西洋参内生真菌,获得58株内生真菌,通过形态学鉴定和显微观察初步确立了16株菌,提取纯化出其中13株真菌DNA,选用真菌通用引物ITS1和ITS4对DNA进行ITS特异性扩增,提交测序分析,构建系统发育树。确定其分属于:镰孢属(Fusarium)、毛束霉属(Trichurus)、葡萄孢属(Cinerea)、亚黑团孢属(Periconiella)、棘壳孢属(Pyrenochaeta)、链格孢属(Ilternarsa)。同时对菌株的生防作用进行研究,其中14株针对立枯病、根腐、茎腐、液斑水浸木4种病原菌表现出不同程度的拮抗性,占分离菌株的87.5%。试验表明西洋参内生真菌多样性丰富。     

一株生防真菌TRCC27001的鉴定及其抑菌特性

通过平皿对峙法测定了菌株TRCC27001对12种常见植物病原真菌生长的拮抗作用,以及不同胁迫条件对菌株TRCC27001发酵液抑菌活性的影响;同时,通过形态学观察与分子生物学手段结合的方式,鉴定了菌株TRCC27001的种类.结果表明,菌株TRCC27001对12种病原真菌都有一定的拮抗作用,其中对黑腐皮壳菌和金黄壳囊孢菌落生长的抑制效果较强,对峙培养96 h后相对抑菌率分别达到6.39±1.22和2.29±0.19.以金黄壳囊孢为指示菌,筛选出TRCC27001的最佳发酵培养基为麸皮培养基,其无菌发酵液的抑菌率达79.40%,且其无菌发酵液的抑菌活性在不同胁迫条件(温度5～105℃,pH 2～12,紫外辐射时间0.5～2.0 h)下具有良好的稳定性.结合形态学特征、ITS序列及Tef1-α序列,将菌株TRCC27001鉴定为绿木霉(Trichoderma virens),是一株具有较高生防潜力的广谱性真菌.     

一株生防内生真菌D202对立枯丝核菌的抑制作用及生理学特性研究

[目的]为评价内生真菌D202的生防价值以及生理学特性.[方法]通过对峙培养和非挥发性代谢产物抑菌实验,测定生防内生真菌D202对立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）的抑制作用,并且对其生理学学特性进行了研究.[结果]拮抗试验中D202对丝核菌的抑制率为67.25％,相对抑制效果为3.54,其非挥发性代谢产物对丝核菌的抑制率为72.35％,菌株D202及其代谢产物可有效抑制立枯丝核菌的生长;内生菌株D202生长最适碳源为葡萄糖,氮源为蛋白胨,在温度为25℃、培养基pH为7时菌落生长最好.[结论]筛选得到的生防内生菌D202具有开发生物源杀菌剂的潜力.     

一株虫生真菌的分离鉴定及生防潜力研究

为挖掘虫生真菌资源,获得高效生防菌,本文利用大蜡螟诱集法从东北地区不同类型土样中筛选虫生真菌,其中选取了一株虫生真菌FLNXY5菌株,经形态学及18s rDNA ITS序列分析鉴定为球孢白僵菌Beauveria bassiana(KY419577)。本研究对FLNXY5菌株生物学特性、对小菜蛾Plutella xylostella 2龄幼虫的致病性及对7种植物病原菌抑菌活性进行测定,结果表明,FLNXY5菌株菌丝生长最适温度为25℃,产孢量在28℃极显著高于其他处理。30与25℃处理下,24 h萌发率最高达91%,无显著差异。浓度为1.0×10~9孢子·mL~(-1)的菌悬液处理小菜蛾2龄幼虫,5 d后的校正累计侵染率为89.2%。球孢白僵菌FLNXY5的拮抗机理研究中,菌株FLNXY5对水稻稻瘟病菌Pyricularia grisea菌丝抑制率最高达40.63%,对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea菌丝抑制率最低为29.14%。本次研究得到的菌株发酵滤液对试验选取的7株植物病原菌菌丝没有抑制作用。     

两株东北红豆杉内生真菌的生理特性

采用接种法，对两株东北红豆杉内生真菌散囊菌（Eurotium sp.,1001)和曲霉（Aspergillus sp.,1003)在不同温度、pH、碳源、氮源、培养基及糖质量浓度下进行了生理实验研究。结果表明：温度对两种菌株的生长和孢子的产生具有明显的影响；pH6－7时菌株生长良好，且可以保持较高的菌液质量浓度；两种菌株均以蔗糖为主要碳源，菌丝干质量与培养基质量浓度呈正向关系。     

一株生防木霉菌的农药降解特性

从实验室保存的9株生防木霉菌中筛选出一株具有农药降解作用的木霉菌株Q3,该菌能够以100 mg/L高效氯氰菊酯、毒死蜱和吡虫啉为唯一碳源生长,7天的降解率分别达到90.43%、86.71%和78.81%;采用蔬菜大棚田间试验方法并利用气相色谱仪检测了高效氯氰菊酯和毒死蜱在油菜中的残留动态。结果表明,木霉菌Q3能够显著降低油菜中的农药残留,17天后高效氯氰菊酯和毒死蜱的降解率分别达到45.54%和72.58%。     

一株猫爪草内生真菌红色素稳定性研究

植物内生真菌是产生天然活性物质的丰富的资源宝库,也是获得天然色素的一种重要途径。本研究主要从光照、温度、金属离子、pH值、氧化还原剂及常见食品添加剂等方面,探讨了分离自猫爪草根中一株内生真菌镰刀菌S4所产红色素的稳定性。结果表明,该菌所产红色素在515nm波长处有最大吸收峰。红色素具有较好的光热稳定性;碱性条件具有增色护色效应,对酸敏感;金属离子Ca~(2+)、Fe~(2+)、Na~+、Mn~(2+)、K~+有增色护色效果,对Mg~(2+)、Zn~(2+)、Cu~(2+)较敏感;还原剂Vc及氧化剂H_2O_2对色素有一定的破坏力;葡萄糖、蔗糖及乳糖能较好地保持红色素稳定。     

黄瓜内生真菌对根结线虫生防活性测定

为了明确黄瓜根结内生真菌对根结线虫(Meloidogyne incognita)的防效,采用菌株发酵液对根结线虫进行离体活性和盆栽防效测定,结果表明,菌株经形态和18S r DNA鉴定为Plectosphaerella sp.,其发酵液对根结线虫处理48 h的致死活性为93.73%;盆栽试验表明,Plectosphaerella sp.对根结线虫的防效为56.1%。发酵液处理的黄瓜根系卵块数量少于对照,土壤中根结线虫2龄幼虫数量也少于对照。总体来看,Plectosphaerella sp.对根结线虫具有较高的生防活性,能为黄瓜根结线虫生物防治奠定基础。     

一株楸树内生真菌的鉴定及其发酵产物抗肿瘤特性研究

利用传统分类学方法、ITS序列测定和系统发育分析方法对一株分离自楸树抗肿瘤活性内生真菌FSNQ0023进行分类鉴定,并对其产物抗肿瘤活性及其细胞毒性进行了初步研究。结果表明,各种指标鉴定其为木霉属真菌(Trichoderma sp.)中的一种,该菌株经发酵培养120h,抗肿瘤活性最强;其对肝癌细胞HepG2的IC50约为正常肝细胞HL-7702的1/2;60℃处理2h后活性稳定。这些特性为活性产物的分离纯化提供了重要数据,也为抗肿瘤新药开发提供了依据。     

一株来自红树内生拮抗真菌的鉴定

红树内生真菌在病害的生物防治方面有重要作用。本研究从秋茄的叶片和茎部共分离获得15株内生真菌,经对峙培养试验,有61.54%的菌株对目标病原菌蓖麻枯萎病菌有拮抗作用,其中从叶片组织中分离的内生真菌菌株MKA-5作用最明显。经形态学研究显示,该菌株菌落浅灰色至深灰黑色。分生孢子暗褐色,倒棒形或椭圆形,多数无喙,有纵横隔膜,分隔处溢缩,壁光滑,大小为7.0-18.5×3.0-8.8 μm,形态特征与链格孢 (Alternaria alternata)一致。进一步对该菌株的分子生物学研究,结果表明该菌株的ITS系列与链格孢模式菌株的同源性为100%。综合分析,拮抗菌株MKA-5鉴定为链格孢(A. alternata)。该菌株的鉴定对蓖麻枯萎病的生物防治有重要作用。     

枸杞内生真菌的筛选、鉴定及其生防作用

为筛选对枸杞根腐病主要致病菌Fusarium solani具有明显抑制效果的生防菌株,通过组织分离法从健康枸杞植株中分离内生真菌,用平板对峙法筛选拮抗菌株,结合形态特征和分子生物学鉴定明确其分类地位;分别采用菌丝生长速率法和悬滴法比较不同培养液处理的内生真菌对F.solani菌丝生长和孢子萌发的影响,通过盆栽试验验证其生防效果。结果表明,在分离得到的106株内生真菌中,筛选获得1株对F.Solani具有明显抑制效果的拮抗菌株,编号YBG8,经鉴定其为链格孢菌(Alternaria alternata);YBG8原液体积分数为20%时,对F.solani菌丝生长抑制率最强,达70.49%,且具有浓度依赖性;YBG8滤液体积分数50%时,对F.solani孢子萌发抑制率最大,达82.4%;盆栽试验结果显示,先接种A.alternata再接种F.solani,可有效降低枸杞根腐病的发病率,其相对防效可达50%。研究结果可以为有效利用内生真菌防治枸杞根腐病提供理论依据。     

一株苦参内生真菌的抑菌特性及活性成分的结构鉴定

 【目的】分离药用植物苦参内生真菌,明确其抑菌特性,确定内生真菌BS001发酵产生抗菌物质的种类及结构。【方法】采用常规的组织分离法对内生真菌进行分离,平板菌块法测定抑菌特性,捷克八层析试验确定其极性,柱层析及冷冻干燥的方法对其分离纯化,并利用TLC生物自显影进行跟踪,采用高效液相色谱法（HPLC）测定其纯度,1H-NMR、13C-NMR以及液相色谱-质谱（LC-MS）等方法对其进行结构鉴定。【结果】从苦参种子中分离出1株内生真菌菌株,编号为BS001。该菌株对辣椒疫霉病菌、番茄炭疽病菌、油菜菌核病菌、苹果斑点落叶病菌等病原菌具有抑制效果,其中对番茄炭疽病菌的抑菌直径达2.734 cm。其发酵液经进一步分离纯化后,用波谱学技术对其抑菌活性成分进行鉴定,结果表明其结构为6,7-(2′E)dibutenyl-5,8-dihydroxy-(Z)-cyclooct- 2-ene-1,4-dione。【结论】苦参中存在1株对多种病原菌具有抑制作用的内生真菌,经鉴定为土曲霉（Aspergillus terreu）。在该菌株发酵液中得到一种新抗菌活性物质,可用于生物药物及生物农药的开发。     

一株韭菜内生高效氯氰菊酯降解生防细菌的分离与鉴定

从新鲜韭菜的根中分离到一株对多种蔬菜病原真菌有抑制作用的优势内生细菌W7,对其拮抗机制的初步研究结果表明,胞外代谢物对病原真菌无抑制作用,而菌体经超声波破碎及有机溶剂沉淀得到的多糖粗提液可明显抑制病原菌菌丝生长。该菌还能以100 mg/L高效氯氰菊酯为唯一碳源生长,7 d的降解率为51.3%,表明该菌是一株兼具农药降解特性的生防内生细菌。通过对其形态特征、生理生化及16S rDNA同源性序列分析,初步鉴定该菌为类芽孢杆菌(Paenibacillus spp.)。     

一株产红色素内生真菌色素的稳定性研究

以艾草根块分离得到的内生真菌WS-221为研究对象,以色素提取液吸光度为重要指标,对该菌所产的色素进行了稳定性研究。结果表明:该菌所产色素提取液在490nm处出现最大吸收峰。紫外光对色素稳定性影响较小,色素溶液中添加适量Na~+、K~+、Al~(3+)具有一定的增色作用,并且食盐浓度在0.2g/mL时增色效果明显。综合评价,该菌所产色素稳定性良好,具有广泛的工业价值。     

北五味子褐斑病内生生防真菌筛选及防治效果研究

为筛选对北五味子褐斑病病原菌[Phoma glomerate(corad)Wollena ex Hoehapf]生防效果较好的优良内生真菌,采用植物病理学常规培养法对北五味子褐斑病病原菌进行培养并对菌落特征及微观形态进行观察,同时利用平板对峙法对内生真菌进行筛选,通过测定褐斑病病原菌的细胞膜透性和可溶性蛋白、麦角甾醇、...     

厚朴内生真菌HPFJ3对小麦全蚀病的生防作用

为了研究厚朴内生真菌HPFJ3对小麦全蚀病的生防作用,以厚朴内生真菌HPFJ3为试验菌株,小麦全蚀病菌为指示菌,通过离体平板对峙培养检测、光学显微镜观察,分析厚朴内生真菌HPFJ3与小麦全蚀病菌之间的相互作用;利用盆栽接种试验,研究厚朴内生真菌HPFJ3对小麦全蚀病的防治效果以及对不同生育期的小麦植株根部多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的影响。结果表明,厚朴内生真菌HPFJ3能抑制小麦全蚀病菌的生长,造成小麦全蚀病菌菌丝节间缩短、变粗等畸形现象;接种至小麦根际土壤中的厚朴内生真菌HPFJ3能增强小麦对全蚀病的抗性,其苗期小麦全蚀病的发病率为15.95%,显著低于未经厚朴内生真菌HPFJ3处理的小麦全蚀病的发病率(88.07%);且经HPFJ3单独接种处理的小麦植株根部PPO、POD和PAL 3种防御酶活性在小麦5个生长时期均有所提高。     

一株苦荞种子内生真菌红色素稳定性初报

研究苦荞种子内生真菌TBSBEF-9的胞外红色素的生产特性及其色素的稳定性,结果表明,TBSBEF-9红色素为胞外色素,在发酵的第3d红色素开始产生,第6d达到最高水平;红色素最大吸收波长在510 nm;易溶于水、乙醇等极性溶剂,在酸性条件下呈现浅红色,碱性条件下为橘黄色;色素较耐热(＜100℃);Ca2+、Ba2+、K+、A13+、Mg2+金属离子对该色素无明显影响;KMnO4、H2O2、FeCl3使色素色泽变化不明显,Vc对色素有较强的褪色作用;食盐、蔗糖对色素无明显影响而柠檬酸对其有褪色作用.可见,该红色素的理化性质比较稳定,是较理想的天然色素添加剂.     

两株颉颃内生放线菌的分离及生防活性检测

报道了从银杏中分离获得内生放线菌,并对其中颉颃活性较强的两个菌株进行了皿内及盆栽生防活性检测,结果M和EAF-1均显示出良好的生防效果:抑菌谱广、持效期长。盆栽试验显示接种EAF-1后对番茄灰霉病有明显的预防作用,该菌具有潜在的应用价值。     

一株耐盐植物内生真菌的筛选与鉴定

[目的]研究盐田原生态系统中的耐盐植物内生真菌。[方法]对38株从海南省莺歌海盐场和东方盐场分离的菌株进行耐盐生长测试。[结果]发现了1株在8%Na Cl浓度下生长较好的真菌,并根据其形态特征,ITS扩增序列聚类进化树分析,显示其分类地位为黑酵母菌(Hortaea werneckii)。经过高效液相色谱分析其代谢产物,发现该真菌在0、2%、4%、8%Na Cl浓度下的发酵产物均有所不同。[结论]盐田生境中存在特殊的植物内生真菌区系,其中黑酵母菌Hortaea werneckii具有一定代表性,有深入研究的价值。