青枯假单胞杆菌产生细菌素的研究

测定来自全国不同寄主和地区的211个青枯病细菌(Pseudomonassolanacearum)菌株产生细菌素的能力,结果表明,有80％分属于不同小种和生物型的8个指示菌能产生细菌素,其中能产生细菌素的桑菌株占其总数的94.2％。 用7个拮抗作用强而稳定的菌株测定对211个供试菌株的拮抗作用,结果表明,不同菌株产生细菌素的能力和拮抗范围有差异。其中油橄榄菌株(OE-104)和桑菌株(MA-1、MA-701)拮抗能力最强,拮抗范围最广。不同小种、生物型及寄主来源的菌株间的桔抗作用大于来源相同菌株间的拮抗作用。此外,试验证明培养温度、培养基成分和培养时间对菌株产生抑制圈的大小有影响。这些结果对筛选青枯病细菌的产细菌素拮抗菌有参考价值。     

假单胞杆菌PsJN DNA芯片的制备及检测

提取假单胞杆菌PsJN总DNA经酶切后,与载体质粒Puc18链接,并转化E. coli DH 5α,从而构成假单胞杆菌PsJN的基因文库.用PCR方法扩增基因文库,所得PCR产物点于芯片上,从而制备PsJN DNA芯片.分别提取不同C源培养的PsJN的总RNA,把不同C源培养的PsJN的总RNA反转录为DNA,用Cy3,CY5分别标记反转录的DNA.通过杂交检测芯片,并获得杂交图像.     

一株拮抗姜瘟根际青枯假单胞杆菌的沙雷氏菌的分离与鉴定

从生姜连作地土壤中分离到1株对生姜青枯假单胞杆菌(Pseudomonos solanacarum Smith)有强拮抗作用的沙雷氏菌株R11,对该菌株进行了形态特征、培养特征、生理生化和16S rDNA序列分析的系统鉴定,发现R11为革兰氏阴性菌,端生一根鞭毛.以16S rDNA序列为基础构建了包括11株相关种属细菌在内的系统发育树,R11与沙雷氏菌(Serratia sp.)十分接近,序列相似性值达99％.     

假单胞杆菌BS1培养条件的研究

为了明确假单胞杆菌BS1的适宜培养条件,采用单因素筛选方案对其最适碳源、接种量、温度、pH值、盐浓度和培养基装液量进行研究,发现假单胞杆菌BS1生长的最佳碳源为液体石蜡,生长最适接种量为3%,温度30℃,pH 7.0,NaCl浓度0%,250 mL三角瓶中培养基装量为130 mL。在此优化的培养条件下,假单胞杆菌BS1生长曲线是0~48 h为菌体生长延滞期,48~156 h为菌体快速生长繁殖期,156~240 h为菌体生长稳定期,240 h后为菌体衰亡期。通过对假单胞杆菌BS1的最佳培养条件研究,将为工业化生产提供技术参数。     

安徽省姜青枯假单胞菌生物型鉴定初报

根据海沃德制订鉴定青枯假单胞菌生物型的方法,对舒城、铜陵、桐城、临泉、阜阳、全椒、巢县、屯溪和休宁等9县市分得的32个菌株进行鉴定。其中4个菌株SC78、SC710、SC81和SC93能利用乳糖、麦芽糖和纤维二糖,不能利用甘露醇、山梨醇和甜醇,属生物型Ⅲ;其它28个菌株则相反,属生物型Ⅳ。生物型Ⅲ的4个菌株是由前作番茄、辣椒和茄子田中的姜瘟病株上分得的;它对姜株致病力较生物型Ⅳ弱。     

蘑菇线虫与假单胞杆菌对食用菌的致病性研究

蘑菇滑刃线虫(Aphelenchoides composticola)不直接危害平菇,能危害蘑菇、香菇、黑木耳,与蘑菇假单胞杆菌(Pseudomonas spp.)混合接种后危害加重.杆形线虫Rhabditida spp.不危害蘑菇、香菇、黑木耳、平菇,与蘑菇假单胞杆菌混合接种后,蘑菇、香菇、黑木耳表现严重受害症状,平菇则不受其危害.蘑菇假单胞杆菌不危害平菇,只危害蘑菇、香菇和黑木耳.A.composticola,R.spp.P.spp.均对镰刀菌Fusarium osysporum 有破坏作用.A.composticola 在pH 6～7内经48h 死亡率为25%～35%,pH9～12死亡率达80%～100%.R.spp.在pH5以下的范围内均不能生存,在pH8～12死亡率均较低.P.spp.在pH3～12范围均能生长.     

植物青枯菌的血清分型研究

以代表不同生化型的４个青枯假单胞菌的膜蛋白为免疫原制备了４个相应的抗血清，对我国植物青枯菌的血清分型进行了研究。琼脂双扩散试验结果表明：秋自我国６个省的１９种寄主植物的２１２个青枯菌株可分为８个血清型，其中血清型Ⅰ为优势类群，包括了主要茄科植物等１３种寄主的１４７个菌株，占全部供试菌株６９％。     

青枯假单胞菌细菌素的研究

对青枯菌产生颉颃作用的无致病力青枯菌菌株ｎＯＥ－１０４产生的细菌素效价为１２８ＡＵ／ｍｌ；丝裂霉素Ｃ可将其效价提高至５１２ＡＵ／ｍｌ；ＵＶ照射无诱导效应。ＣＰＧ培养液中产生的ｎＯＥ－１０４细菌素粗提液，经硫酸铵沉淀，沉淀物于磷酸钠缓冲液中透析后，通过ＤＥ－５２离子交换柱分离纯化。纯化的ｎＯＥ－１０４细菌素具有生物活性，分子量为１９１００；电镜下观察不到其粒体；对热不稳定，５０℃处理１０ｍｉｎ即失活     

嗜铁假单胞杆菌C-12产嗜铁素的影响因素

为进一步开发利用假单胞菌C-12,试验采用光谱吸收法,对来自土壤中的1株假单胞菌C-12产生嗜铁素的条件进行研究.结果表明:在416 nm处有1个嗜铁素特异吸收峰,当铁离子浓度为1 μmol/L时,最适合其产嗜铁素.不同培养条件对嗜铁菌假单胞菌分泌嗜铁素有明显影响.适合C-12分泌嗜铁素的最佳条件为培养基为MSA培养基,最适培养温度为32℃,以脯氨酸为氮源、蔗糖为碳源,C/N为3∶1,pH6.0.     

黑龙港流域东部旱地冬小麦种植中荧光假单胞杆菌应用技术研究[1]

为了探讨沧州地区旱地冬小麦种植中荧光假单胞杆菌拌种技术应用的可行性。以“沧麦6005”为试验材料,通过田间比较试验,探究荧光假单胞杆菌拌种对旱地冬小麦生长、产量与经济效益的影响。结果表明,荧光假单胞杆菌拌种可显著促进旱地冬小麦冬期前根系发育;有效防治小麦纹枯病和茎基辅病等土传病害为害;菌液用量在3000 ml/hm2-6000 ml/hm2时小麦产量较对照处理显著增加31.67%-33.76%,增产效果优于噻虫·咪鲜胺拌种剂;菌液用量在3000 ml/hm2-6000 ml/hm2时投入产出比最高,经济效益最大。荧光假单胞杆菌拌种可显著提高旱地冬小麦的产量与经济效益,建议在沧州生态类型区为代表的黑龙港东部旱地冬小麦种植中进行推广应用。     

青枯菌的运动性野生型菌株的发现和鉴定

运用ＳＭＭ半固体平板法和悬滴法，检测了不同来源的青枯菌野生型菌株１０７株，发现３０株有明显运动性的青枯菌野生型菌株，这与在科学界沿用至今已有２０多年的青枯菌野生型菌株没在运动性＾「１１」的观点不相符。青枯菌的运动性分为爬行运动和游泳２种方式，具有爬行运动能力的青枯菌还表现游泳运动性。同时笔者对数个有运动性的野生型菌株进行了检测，鉴定，结果显示，被检测菌株的检测性状与前人测定的结果相符＾「１－４」。     

荧光假单胞杆菌拌种在旱地小麦种植中的应用效果研究

为探讨沧州地区旱地冬小麦种植中荧光假单胞杆菌拌种技术应用的可行性,以沧麦6005为试验材料开展田间比较试验,探究荧光假单胞杆菌拌种对旱地冬小麦生长、产量与经济效益的影响。结果表明,荧光假单胞杆菌拌种可促进旱地冬小麦冬期前根系发育,有效防治小麦纹枯病和茎基腐病等。用3 000～6 000 mL/hm²荧光假单胞杆菌拌种300 kg/hm²,小麦产量较清水拌种(300 kg/hm²)增加31.68%～33.76%,增产效果优于4 500 mL/hm²噻虫·咪鲜胺拌种300 kg/hm²,投入产出比较高,经济效益较大。荧光假单胞杆菌拌种可提高旱地冬小麦的产量与经济效益,建议在以沧州生态类型区为代表的黑龙港东部旱地冬小麦种植中推广应用。     

黄鳝肠道假单胞杆菌铁蛋白基因的克隆及融合表达

细菌铁蛋白(bacterioferritin,Bfr)在细菌铁代谢过程中具重要作用。为分析黄鳝肠道假单胞杆菌铁蛋白基因Bfr的功能,以该菌基因组DNA为模板,PCR扩增Bfr基因后将其克隆到pGEX-4T-1表达载体中。序列测定后转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导、GST-resin纯化柱分离纯化获得Bfr蛋白。用SDS-PAGE电泳及Western blot检测融合蛋白;用比色法检测融合蛋白的铁离子螯合能力,用液体培养法分析重组蛋白对假单胞杆菌生长的影响。实验结果表明:成功获得黄鳝肠道假单胞杆菌Bfr基因,并实现了Bfr基因的融合表达;带有融合标签的GST-Bfr蛋白与Fe³⁺和Fe²⁺均不能结合,而Bfr蛋白则可以结合Fe³⁺但不能结合Fe²⁺;在外源添加Fe³⁺情况下,重组Bfr蛋白可促进假单胞杆菌的营养生长。该研究为进一步深入了解假单胞杆菌铁蛋白基因的功能提供了参考资料。     

节杆菌与施氏假单胞菌对甲基对硫磷的共降解研究

为实现对有机磷农药甲基对硫磷的彻底降解,研究利用有机磷农药降解菌施氏假单胞菌YC-YH1与对硝基苯酚降解菌CN2对甲基对硫磷进行共降解试验,同时克隆了参与降解过程的相关基因,并对2株菌株在对甲基对硫磷污染土壤的原位修复中的效果进行研究。结果表明,与YC-YH1单独降解相比,YC-YH1和CN2共降解在处理前32 h无较大差异;但之后,甲基对硫磷和对硝基苯酚的降解速度明显加快,处理48 h后甲基对硫磷即被完全降解,比单独用YC-H1降解时提前了16 h,处理64 h时对硝基苯酚就被完全降解。而土壤修复的研究结果表明,菌株YC-YH1与CN2能够高效降解甲基对硫磷,72 h对土壤中100 mg/kg甲基对硫磷的降解率接近100%,尤以未灭菌土壤中降解效果更好。     

乙草胺胁迫对土壤真菌拮抗功能和假单胞菌以及芽胞杆菌群落结构的影响

真菌拮抗功能是自然健康土壤对病原真菌所具有的免疫能力,这种能力与土壤中许多可分泌拮抗物质的细菌有关,而假单胞菌和芽胞杆菌是目前研究最多的具拮抗功能的种群.乙草胺是北方使用量最大的除草剂,目前它的施用对土壤真菌拮抗能力的影响还未见报道.本文通过室内模拟培养,考察不同浓度乙草胺(0、50、150、250 rag·kg-1土)对土壤真菌拮抗能力的影响,并运用PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)方法研究真菌拮抗功能逐渐下降的土壤样品中假单胞菌和芽胞杆菌群落结构变化情况.结果表明,在实验室微宇宙条件下,乙草胺的施用会降低土壤真菌拮抗能力,在处理第12 d时可以得到土壤真菌拮抗功能差异显著的土壤样品.土壤芽胞杆菌多样性随乙草胺浓度的升高而下降,而假单胞菌多样性变化不大.乙草胺胁迫下芽胞杆菌和假单胞菌群落结构都发生明显改变,尤其是芽胞杆菌(处理土壤样品与对照的群落结构相似性为0.60),且施加浓度越高,群落结构组成偏离自然土壤越远.真菌拮抗能力的降低与假单胞菌和芽胞杆菌多样性和结构的改变相关.     

木霉生防菌尖孢镰刀菌和青枯假单胞菌在辣椒根际的互作

辣椒青枯假单胞菌在PDA上能影响木霉生防菌和尖孢镰刀菌的菌丝生长和木霉菌产孢，并在洋菜膜上影响辣椒根际和根外木霉菌分生孢子的萌发和芽管伸长及辣椒根际和根外土中尖孢镰刀菌的厚垣孢子萌发。当在土壤中接种一定量的木霉菌、尖孢镰刀菌和青枯假单胞菌时，盆栽8d后，随着根际木霉生防菌量的增加根际尖孢镰刀菌的种群数量明显降低，青枯假单胞菌的种群数量变化不大；当根际尖孢镰刀菌种群数量增加时，根际木霉菌的种群数量略有上升，青枯假单胞菌的种群数量略微下降；根际青枯假单胞菌的数量增加时，对根际木霉的种群数量的影响不明显，但尖孢镰刀菌的种群数量略为下降。木霉菌在粘壤土、菜园土和潮沙泥中根际竞争定殖较黄壤中好，土壤含水量的变化对根际木霉菌种群数量的影响较尖孢镰刀菌和青枯假单胞菌的影响小。     

一株耐镉假单胞杆菌的分离鉴定及其对镉的吸附研究

从污染水域筛选获得了1株可在含有100 mg/L Cd2+的培养基上生长的耐镉菌株Cd-t1。通过形态观察、16S r DNA扩增及系统发育分析,将其初步鉴定为嗜碱性假单胞菌(Pseudomonas alcaliphila)。不同Cd2+浓度处理下菌株的生长曲线显示,各浓度Cd2+处理延缓了该菌株的生长时期。进一步利用扫描电镜、能谱分析与质粒消除试验发现,该菌株的Cd2+耐受性与其形态适应性变化和C、N、O、P、Na、K、Ca等元素含量的改变相关,并决定于质粒上的镉耐受基因。     

假单胞菌趋化性研究概述

趋化是生物体朝向或远离化学物质的一种运动形式。假单胞菌可感受周围化学物质浓度变化,通过极性鞭毛、菌毛驱动表现其群体趋化行为。已知假单胞菌趋化主要是由鞭毛介导和假定菌毛介导两种,本文主要阐述这两种趋化信号转导途径,总结了研究趋化行为的各种定性和定量的常规方法及新方法,以期为假单胞菌趋化性研究提供参考。     

抗福美双假单胞菌株的NTG化学诱变及分子探针鉴定

利用微生物的抗药性筛选抗福美双的假单胞菌株Ｔ４６，然后通过亚硝基胍（ＮＴＧ）化学诱变获得了对福美双敏感的三株突变株Ｔ４６Ｎ１０、Ｔ４６Ｎ７和Ｔ４６Ｎ１７。利用这三个突变株作受体，通过基因克隆的方法筛选到了可使三个突变株恢复抗性的克隆，抗性基因分别被定位在７ｋｂ、２．５ｋｂ和２０ｋｂ的ＥｃｏＲＩ片段上。将这三个克隆分别用＾３２Ｐ标记后制成分子探针，然后分别与三个突变菌株的总ＤＮＡ进行ＤＮＡ－ＤＮＡ分