灰霉菌抗药性研究进展

就灰霉菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）对３类重要杀菌剂──苯并咪唑类，二甲酰亚胺类和Ｎ－苯基氨基甲酸醋类的抗性特点作一综合评述；并简单介绍了抗性菌的抗药机理及相关的生物学特性的研究进展。     

灰霉菌培养及其对拟南芥的侵染

灰葡萄孢菌Botrytis cinerea简称灰霉菌在以下条件生长发育最快：马铃薯＋葡萄糖培养基。偏酸性pH5-6、18-26℃温度，每天给予8h的光照。Botrytis cinerea与拟南芥Columbia生态型有亲和反应。显微镜下观察到病原菌在拟南芥的Columbia生态型上感染后1d可以在表皮细胞壁处层积、萌发和产生萌发管。第二天产生附着胞和侵入锥。第三天叶肉细胞间菌丝形成，叶肉细胞有损伤。第四天可观察到大量的菌丝，此时拟南芥的叶片产生可见病症。6-7d分生孢子梗和分生孢子产生。对可见和显微症状的观察说明寄主与病原菌之间发生亲和反应。     

番茄灰霉菌的多重抗药性研究

从山东3个用药情况不同的保护地番茄上，采集番茄灰霉菌进行了番茄灰霉菌（B.cinerea）对3种不同类型杀菌剂的抗性监测，在用药历史长、水平高的寿光丰城，灰霉病对多菌灵、腐霉利、乙霉威产生多重抗性的菌株出现频率为53．7％，对多菌灵、速克灵产生双抗的菌株出现频率为100％；在泰安良庄，上述菌株出现的频率分别为6．8％和72．7％；在新建棚区新泰龙廷均为敏感菌株。所有的多菌灵抗性菌株均属高抗菌株（EC50＞100mg/L），速克灵抗性菌株均属低抗菌株（1mg/L＜EC50＜10mg/L），乙霉威抗性菌株均属低抗菌株（O．9mg/L＜EC50＜4mg/L）。在无药PDA培养基上连续培养8代后，对多菌灵、腐霉利、乙霉威的抗性程度并未降低。分别在PDA培养基和黄瓜子叶上进行了高体适合度和致病力的测定。     

蔬菜灰霉菌抗药性、杀菌剂残留检测及治理技术研究

山东省保护地栽培面积４０×１０４ｈａ,约占全国４０％。近年来,灰霉病已成为影响保护地蔬菜产量和品质的重要因素。灰霉菌易对杀菌剂产生抗性,田间滥用药造成一定程度的残留污染,成为生产上亟待解决的一大难题。笔者１９９５～１９９８年承担省“八五”重点科研项目“蔬菜灰霉菌抗药性、杀菌剂残留检测及治理技术研究”,进行了灰霉菌抗药性研究,杀菌剂残留检测,研制了新的克抗药剂,改进了用药技术,提出了克服抗性、治理污染的技术措施,解决了保护地蔬菜灰霉菌因杀菌剂抗性造成防效下降和速克灵在番茄上残留超标污染问题。１．灰…     

木霉菌和灰霉菌相互作用关系的初步研究

对灰霉菌(Botrytis cinerea)和木霉菌BTW41(Trichoderma atroviride)之间相互关系作了初步研究。研究发现木霉菌具有较强的营养竞争能力,BTW41与灰霉菌的对峙菌落接触处,可见灰霉菌菌丝被木霉菌菌丝大量寄生,受到严重破坏,并且灰霉菌菌丝有消解现象。不同木霉菌株对番茄灰霉病的防效不同,BTW41的防效能够达到60.99%。施入叶片上的生防木霉菌孢子应达到一定浓度才会有效地定殖,进而起生防作用,灰霉菌对木霉菌在番茄叶片上定殖有影响。从以往所做的试验来看,木霉菌孢子浓度在108个孢子/mL以上时,对灰霉病的防效较好。     

7种杀真菌剂对蒜薹灰霉菌抑制效果研究

研究了7种常用杀真菌剂对蒜薹采后灰霉菌的抑制效果,结果表明,在PDA培养基上,保鲜克和施美清的4个浓度处理都能完全抑制蒜薹灰霉菌的生长,抑菌率均达到100%;施美特、山推007、盖克、醚菌酯、霜疫力克的抑菌率都高于95%,但灰霉菌对它们的反应灵敏度均不高,且对醚菌酯产生抗药性。     

红麻灰霉菌生物学特性及其交叉感染

测定温度、光照、营养、pH对红麻灰霉菌孢子萌发、菌丝生长、产孢,以及湿度对孢子萌发的影响.结果表明,该菌孢子萌发、菌丝生长和产孢的适宜温度为20-22℃;孢子宜在水滴和水膜中萌发,孢子悬浮在红麻叶汁液中能显著提高萌发率;持续强光照可抑制菌丝生长和产孢,黑暗利于孢子萌发和菌丝生长.该菌在6种培养基上以PSA生长和产孢最佳.孢子萌发、菌丝生长和产孢以pH5-7为宜.从孢子侵入寄主的影响因素和菌核特性试验可以看出,该病在孢子含量为103-107个·mL-1范围时,其潜育期随孢子含量的提高而缩短;在相对湿度为100%下,用孢子叶汁悬液对叶片伤口喷雾接种能明显缩短潜育期.菌核埋入土层愈深萌发率愈低,夹在麻杆中的菌核皆能萌发.不同寄主灰霉菌交叉接种测定显示,红麻灰霉菌对莴苣、黄瓜、韭菜和蕹菜的健株不致病,反之,莴苣、蕹菜灰霉菌对红麻尤其是受伤的植株能致病.     

果蔬中灰霉菌的快速检测

介绍了灰霉菌侵染葡萄的方式、果实采后的防治方法以及灰霉菌的传统检测法、快速检测法,并将以ELISA法为主的快速检测法与传统检测法进行了比较。结果表明,ELISA法灵敏度高、干扰小、安全性高、污染少,而且操作简便、快捷。     

灰霉菌与其分泌毒素对拟南芥致病性比较

[目的]比较灰霉菌孢子悬浮液和灰霉菌分泌毒素对拟南芥的致病性差异。[方法]分别用灰霉菌孢子悬浮液和灰霉菌分泌毒素接种拟南芥叶片,然后观察二者对拟南芥叶片的发病情况。[结果]灰霉菌毒素对拟南芥有一定的致病力,且与孢子侵染有相似之处。灰霉菌在对拟南芥侵染的过程中分泌大量毒素,毒素能降解细胞壁,有利于菌丝的扩大生长。菌丝的扩大生长能分泌更多的毒素,因此两者相互配合杀死植物细胞。[结论]为灰霉菌毒素的分离、提纯、鉴定等研究奠定了基础。     

灰霉菌液体深层培养条件研究

研究了在摇瓶液体培养条件下,不同碳源、氮源和无机盐对灰霉菌液体深层培养的影响。应用正交实验,确定了最佳培养基组成为葡萄糖3％、土豆汁4％、硝酸钾0．1％、磷酸二氢钾0．1％、硫酸镁0．05％;最佳培养条件为温度26℃、装液量100L／250L、pH值5．5、摇床转速120r／min。     

灰霉病菌(Botrytis cinerea)生物防治研究进展

综述了国内外利用相关拮抗微生物防治作物灰霉病菌的研究历史与现状，介绍了国内外用于防治灰霉病菌的几类主要微生物；阐述了灰霉病生物防治的主要机理；讨论了目前生物防治中存在的主要问题，并就应用前景作了评述，认为生物防治在未来作物灰霉病的防治和人类安全问题中将发挥重要的作用。     

番茄灰霉病菌生物学特性研究

试验表明,番茄灰霉病菌菌丝在５～３０℃均可生长,孢子在８～３２℃均可萌发,孢子萌发和菌丝生长的最适温度２０～２４℃,孢子萌发要求较高的湿度,相对湿度小于８０％,不能萌发,菌丝生长和孢子萌发喜爱偏酸的环境,最适ｐＨ值分别为ｐＨ５和ｐＨ６．２４。抑菌测定表明,灰克、福美双、速克灵、扑海因和多菌灵对灰霉病菌的抑菌效果好。     

4种生物制剂对番茄灰霉病菌和早疫病菌的毒力测定

以番茄灰霉病菌、早疫病菌为供试对象,测试了-施壮、甲壳丰、施特灵、低聚糖素等4种生物制剂的抑菌效果.结果表明:4种生物制剂中.施特灵和低聚糖素对灰葡萄孢的抑制效果较好,施特灵和低聚糖素EC∞分别为104.70 mg·L-1和112.01 mg·L-1.施特灵和低聚糖素对早疫病菌的抑制效果也较好,EC50分别为137.56 mg·L-1和144.75 mg·L-1.     

蒜薹灰霉病菌的生物学特性研究

对已分离的蒜薹灰霉菌的生物学特性进行测定,结果表明:蒜薹灰霉菌对碳源的利用以果糖、葡萄糖为最佳;生长的温度范围为5~30℃,最适为25℃;光暗交替对菌落生长有促进作用;生长的适宜pH值为2.5~12.5,最适为6。该菌在葡萄糖中最宜产孢;产孢的适宜温度是10~28℃,最适为20℃;光暗交替对灰霉菌产孢有促进作用;产孢初始适宜pH值为3.5~12.5,最适为6。     

灰葡萄孢诱变菌株毒素的除草活性研究

 对灰葡萄孢BC4菌株进行紫外线诱变得到了15个诱变菌株, 经测定筛选出BC4-1、BC4-2和BC4-15等3个诱变菌株中以BC4-1菌株效果最好。试验发现，用于毒素产生的PD培养基的pH 值对产毒能力影响很大，以pH 4.0最优。用三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯萃取培养滤液制备BC-粗毒素，生物测定结果表明，以乙酸乙酯萃取所得粗毒素对杂草种子萌发及生长抑制作用最强。通过柱层析法和HPLC法分离和纯化除草活性组分,得到1个在271 nm有最大UV吸收的化合物,该组分在100 mg·L-1浓度下对马唐的生长具有强烈的抑制作用，在50 mg·L-1浓度下可完全抑制马唐和反枝苋种子的萌发。     

灰葡萄孢产孢和孢子萌发条件

以灰葡萄孢(Botrytis cinerea)菌株B05.10为试验材料,研究了培养基、温度、pH值以及某些营养因子对菌丝生长、产孢量和孢子萌发率的影响.结果表明,B05.10菌株在PSA培养基、pH 6.0,22℃培养7 d时产孢量最多达到1500×104 cfu/皿;在1水琼脂、pH 5.0,22℃条件下4 h时灰葡萄孢孢子开始出现萌发管,12 h时萌发管转变形成分枝的菌丝,添加木糖、果糖和可溶性淀粉等营养因子对提高孢子萌发率也有明显促进作用.     

丙烷脒防治番茄灰霉病效果初报

采用室内毒力测定和田间药效试验方法,对丙烷脒防治番茄灰霉病(Botrytiscirerea)进行了研究。丙烷脒对灰霉病茵茵丝生长和孢子萌发的EC50分别为2．1599mg/L和2．7510mg/L;在组织法测定中,丙烷脒对灰霉病表现出较高的保护和治疗作用;田间药效试验表明,丙烷脒在施用剂量为(a．i．)90-180g／hm2施药4次、间隔7d的条件下对番茄、黄瓜、草莓等作物的灰霉病有良好的防治效果．防效优于对照药剂嘧霉胺和腐霉利,与菌核净的防效相当。     

丁香酚对灰霉病菌的抑制活性及对菌丝形态的影响

在室内离体条件下研究了丁香酚对灰霉病菌菌丝生长和菌丝形态的影响,当其使用浓度为200μg/mL时,菌丝干重仅为对照菌丝的11.56%。丁香酚的抑菌效果不受pH值（5-9）的影响。当丁香酚浓度为500-2000μg/mL时,其保护作用防效为81.63%-100%,治疗作用防效为28.45%-59.41%。光镜和电镜观察发现丁香酚处理导致菌丝发生一系列变化：菌丝内部出现空泡化,菌丝表面沉积大量外渗物,菌丝呈不规则缢缩,菌丝内部各细胞器结构紊乱。