不同土壤微生物DNA提取方法比较

用4种土壤微生物DNA提取方法提取了3种类型土壤的微生物总DNA,利用分光光度法测定4种DNA的OD260、OD280,并计算和分析DNA提取物的产率和纯度.研究发现：方法4即改良的DNA提取方法,无论是提取DNA的产率,还是提取DNA的纯度,都较其他3种方法高,说明改良的DNA提取方法能够准确有效地提取3种类型土壤的微生物DNA.     

一种简单高效稳定的高质量第X期鸡胚盘DNA提取方法的建立

为了建立快速高效稳定的高质量鸡胚盘DNA提取方法,试验通过收集第X期鸡胚胎,应用酚氯仿抽提法、微量组织DNA提取试剂盒法和优化的硅胶膜吸附法分别提取鸡胚DNA,所提DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳初步检测,并经PCR进一步分析检验,对不同方法提取DNA的稳定性和质量进行评价。结果表明:微量组织DNA提取试剂盒法提取的基因组DNA比用酚氯仿抽提法提取DNA的方法具有更高的稳定性和更好的质量,而微量组织DNA提取试剂盒法与本试验建立的优化的硅胶膜吸附法提取的基因组DNA稳定性和质量相近,但本试验建立优化的硅胶膜吸附法,无需蛋白酶K消化胚盘组织,因而优化了步骤降低了成本。试验建立了一个简单高效稳定的高质量低成本的第X期鸡胚盘DNA提取方法,为后续的相关研究建立了一个有效的鸡受精蛋胚盘DNA提取方法。     

一种快速提取甘薯基因组DNA方案的建立

建立了一种小量快速提取甘薯基因组DNA的方法。用该法以甘薯幼叶为实验材料,用小量快速法提取甘薯基因组DNA。提取的DNA经酶切、琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明DNA质量较好,所提取的DNA可用于RAPD、AFLP等技术。此方法具有提取速度快、利于规模化提取、DNA质量好和经济实用等优点,为甘薯及其它相关植物基因组DNA的提取提供了一种快速、简便的途径。     

苹果轮纹病菌DNA提取方法的比较

采用尿素提取法、氯化苄提取法以及SDS-CTAB提取法对苹果轮纹病菌的基因组DNA进行了提取和比较.结果表明,3种方法均能提取到苹果轮纹病菌的基因组DNA.其中,SDS-CTAB法效率最高,提取的DNA质量最好,但是耗时较长;尿素提取法操作简单快速,但是提取的DNA质量较低;氯化苄提取法提取的DNA纯度最低,蛋白质污染严重.将所提取的DNA经ITS试验检测与电泳检测,证明3种方法提取的DNA扩增效果良好,均可满足该真菌rDNAITS分析的要求.     

柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较

【目的】筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础。【方法】选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒（快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、快速DNA提取扩增套装）及CTAB法提取柑橘叶脉基因组DNA,并用柑橘黄龙病亚洲种的16SrDNA特异引物fD1／fD2和01I／012c进行PCR扩增,DNA提取产物及PCR扩增产物在1％琼脂糖凝胶电泳上检测。【结果】快捷型基因组DNA提取系统获得的DNA质量最好,植物基因组DNA提取试剂盒和CTAB法提取DNA方法提取得到的DNA质量较好,新型植物基因组DNA提取试剂盒所获得的DNA质量较差,快速DNA提取扩增套装所获得的DNA质量最差。除陕速DNA提取扩增套装外,其余4种DNA提取方法均扩增出黄龙病亚洲种病原。【结论】快捷型植物基因组DNA提取系统试剂盒操作简单快捷,耗时短,提取的DNA效果较好,能够满足黄龙病病原PCR检测的要求。     

黄鳝体表粘液中基因组DNA的提取与分析

黄鳝基因组DNA一直采用抽血或剪取肌肉来提取,但是采血或剪取肌肉后黄鳝成活率很低。为了保留亲本,尝试从黄鳝体表粘液中提取DNA,并采用紫外分光光度计对提取到的DNA的纯度和浓度进行了检测。结果表明,用蛋白酶K消化,酚仿抽提后从粘液中得到的DNA的纯度与从肌肉中提取到的相差不大,但是提取到的量较少。为了验证提取的DNA是不是黄鳝基因组DNA,用黄鳝actin引物和18S r RNA基因引物扩增之后检测到了粘液中的较亮的DNA片段。为了进一步确认检测到的是黄鳝的DNA,我们又对得到的DNA进行了扩增,并得到的产物进行了克隆和测序。结果表明,粘液中提取到的DNA是黄鳝的基因组DNA。随后又选择了60尾黄鳝,提取其粘液之后对其成活率进行统计,养殖1个月后黄鳝的成活率都在95%以上。此黄鳝体表粘液提取DNA方法能提取高质量的DNA,可用于用于PCR鉴定。     

柑橘黄龙病病原DNA提取方法比较

【目的】筛选出一种快速高效获取柑橘黄龙病病原DNA的提取方法,为黄龙病亚洲种病原的检测奠定基础。【方法】选取5份疑似黄龙病症状柑橘叶片样品,分别采用4种试剂盒（快捷型基因组DNA提取系统、新型植物基因组DNA提取试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、快速DNA提取扩增套装）及CTAB法提取柑橘叶脉基因组DNA,并用柑橘黄龙病亚洲种的16S rDNA特异引物fD1/fD2和OI1/OI2c进行PCR扩增,DNA提取产物及PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳上检测。【结果】快捷型基因组DNA提取系统获得的DNA质量最好,植物基因组DNA提取试剂盒和CTAB法提取DNA方法提取得到的DNA质量较好,新型植物基因组DNA提取试剂盒所获得的DNA质量较差,快速DNA提取扩增套装所获得的DNA质量最差。除快速DNA提取扩增套装外,其余4种DNA提取方法均扩增出黄龙病亚洲种病原。【结论】快捷型植物基因组DNA提取系统试剂盒操作简单快捷,耗时短,提取的DNA效果较好,能够满足黄龙病病原PCR检测的要求。     

植物总DNA提取方法的改进

[目的]改进植物总DNA的提取方法.[方法]采用2种研磨方式进行植物DNA提取效果的比较.[结果]2种研磨方式所得DNA质量都较高,可用于后续分子生物学研究;采用研磨缓冲液提取的DNA得率高于液氮研磨.[结论]该方法降低了DNA的提取成本,是一种经济实用的DNA提取方法.     

玉米基因组DNA不同提取方法及提取部位的比较研究

分别探讨CTAB法和SDS法对玉米不同部位基因组DNA的提取效果。综合比较了2种方法提取的DNA浓度、纯度及完整性,结果表明SDS法是比较适合玉米基因组DNA提取的方法;同时比较了以玉米叶片、幼根和成熟胚为材料提取的DNA质量,发现以新鲜叶片为材料提取的DNA浓度和纯度较高,更适合用于玉米基因组DNA的提取。     

育珠蚌不同组织基因组DNA提取质量比较

利用饱和酚-氯仿法分别提取了三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）6个组织斧足、鳃、闭壳肌、性腺、肝脏、心脏中的基因组DNA,并采用紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增法分析了三角帆蚌不同组织基因组DNA的提取效果。结果表明：三角帆蚌6个组织均能成功地提取基因组DNA,但6个组织提取的DNA质量存在差异,斧足中提取的DNA纯度、浓度最高,PCR扩增条带最亮,因而是三角帆蚌提取DNA的最佳组织,其次为斧足和闭壳肌、心脏和性腺提取的DNA较差。     

5种提取方法对甘蔗汁中DNA提取的效果

[目的]研究5种提取方法对甘蔗汁中DNA提取的效果。[方法]以甘蔗种茎中获得的蔗汁为材料,采用2种植物基因组提取试剂盒柱式法和磁珠法、SDS法、CTAB法及简化提取法5种方法提取DNA,对比所提取的DNA浓度、纯度及后续PCR扩增的影响。[结果]以SDS法提取获得的蔗汁DNA浓度最高,平均可达377.50 ng/m L。而柱式法的试剂盒,提取的DNA浓度最低,PCR检测没有能够获得特异的目标条带,不适合用于蔗汁DNA的直接提取。虽然简化法提取的DNA浓度较低,但是能够满足PCR扩增的要求,由于不涉及氯仿等有害物质,操作简单,适用于对DNA质量要求不高时的快速提取。[结论]SDS法最适合用于蔗汁中DNA的提取。     

不同pH值对DNA提取率的影响

[目的]探索pH值与DNA提取率的关系。[方法]以新鲜猪肝为研究材料,在常规DNA提取方法的基础上设置5个不同的pH值,分析不同pH值对DNA提取率的影响。[结果]OD值与pH值有一定的关系。pH值为7.4时,OD值最大,DNA提取率最高。pH值偏离此值越远,则DNA提取率越低。pH值对DNA提取率有一定的影响。用pH=7.4的缓冲液作提取液时,DNA提取率分别为pH值为7.2、7.6、7.8和8.0时的1.09、1.03、1.06和1.11倍。DNA提取的最适pH值为7.4。[结论]该研究对于提高DNA提取率具有一定的应用价值。     

甘薯薯块DNA提取方法研究

甘薯薯块富含淀粉、酚类等物质,不利于DNA提取。为了研究甘薯薯块DNA提取的最佳方法,采用经典CTAB法、改良CTAB法一、改良CTAB法二和SDS提取法,对甘薯薯块总DNA提取效果进行比较,以试剂盒法提取结果作对照。结果表明:采用经典CTAB提取法和SDS提取法获得的薯块DNA含有较多杂质,且降解严重,样品质量低;CTAB改良法一能降低DNA样品中多糖等物质的含量,但DNA存在一定程度降解,且耗时较长;CTAB改良法二提取效果最佳,杂质含量低且DNA降解少,与试剂盒提取效果最接近,是一种较为理想的甘薯薯块DNA提取方法。     

一种广泛适用于植物基因组DNA提取的方法

[目的]研究植物基因组DNA提取方法,为从植物组织中快速提取基因组DNA提供指导。[方法]在已发表的植物基因组DNA提取方法基础上,对SDS提取法的操作步骤、试剂用量及作用时间进行了优化。[结果]初步建立了一种广泛适用于各类植物及植物多种组织器官的基因组DNA提取方法。所提取的基因组DNA质量较好,满足下一步操作的要求。[结论]该研究结果为植物基因组DNA的快速提取提供了指导方法。     

大片段DNA提取和纯化的优化方案

[目的]研究大片段DNA提取和纯化的优化方案研究。[方法]在传统SDS提取法的基础上,对大片段DNA的提取和纯化过程进行了改进。[结果]建立了一种优化的DNA提取和纯化的方案,通过该方案能够得到片段大、纯度高的DNA。[结论]为今后大片段DNA的提取和纯化提供了参考。     

快速提取玉米DNA方法的研究

[目的]为了探索一种快速、简便,能够用于SSR分析的玉米DNA提取法。[方法]采用改进的常规DNA提取法和DNA快速提取法提取玉米种子胚和黄化苗叶片中的DNA,进行SSR分析,通过琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳对SSR产物进行检测。[结果]用常规法提取时,用氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提1次就可获得质量好和浓度高的DNA;无须抽提,直接吸取上清液,可得到高浓度的DNA,也能满足SSR分析的需要;同样的提取法,SDS的提取效果比CTAB好。对快速提取法进行分析表明,相同的提取液和提取方法,采用种子胚提取的DNA浓度和质量明显高于叶片DNA。[结论]该研究为SSR在玉米种质及纯度鉴定上的应用提供了技术上的保证,有利于该项技术的普及和推广。     

草菇培养料中微生物总DNA的高效提取

比较了化学裂解与酶裂解相结合法、氯化苄法、CTAB法、改良CTAB法、MP土壤试剂盒法和植物试剂盒法6种提取草菇培养料总DNA的方法.结果表明:不同方法的A260/A280比值有较大差异,其中化学裂解与酶裂解相结合法提取DNA的产量最高,而新型植物基因组DNA提取试剂盒提取培养料DNA的产量最低,分别为(2372.72...     

扁豆DNA提取方法的研究

以白花扁豆、眉豆和紫边扁豆3个品种为试材,对影响扁豆DNA提取质量的主要因子进行研究,以期建立适宜扁豆DNA提取的优化反应体系。结果表明,扁豆不同品种DNA提取中,紫边扁豆DNA质量较好;不同CTAB浓度的对比中,2%CTAB提取缓冲液提取DNA的效果较好;叶片和果实DNA提取中,扁豆叶片提取的DNA质量优于扁豆果实;CTAB和SDS两种提取方法对比,CTAB法提取出的DNA较纯,污染少。DNA提取优化后的结果为2%CTAB法提取的紫边扁豆叶片的DNA质量好,纯度高。     

噬菌体基因组DNA快速提取方法

针对传统噬菌体基因组DNA的提取方法缺乏广泛适用性,并且提取中用到酚/氯仿抽提,操作步骤繁琐,会对操作人员身体造成一定程度的损伤等不足,笔者建立了1种噬菌体基因组DNA快速提取方法。其提取的主要步骤包括宿主核酸降解、噬菌体粒子沉淀、噬菌体DNA释放、杂质去除、DNA吸附、DNA清洗和DNA洗脱等。结果表明,通过此法能快速提取以溶藻弧菌、大肠杆菌和阴沟肠杆菌为宿主菌的多种噬菌体基因组DNA,最快可以在2 h内完成,而且提取的产量和纯度均较高,DNA浓度超过100 ng·μL~(-1),OD_(260/280)达到1.8以上,提取产物不受宿主菌基因组DNA污染,可用于下游的实验分析。