新农抗万隆霉素产生菌的鉴定与分类

新农抗万隆霉素产生菌是从来自马来西亚的土壤样品中分离筛选出来的一株放线菌菌株（保存于中国典型培养物保藏中心,编号为GAAS2507）,根据菌株GAAS2507孢子堆的颜色,其可以归入到烬灰类群．又通过对其形态、生理生化特性的比较发现,其与灰色变异链霉菌Streptomyces griseovariabilis非常相似,但是又有一定的差异,故将其命名为灰色变异链霉菌万隆亚种Streptomyces griseovariabilis subsp．bandungensis subsp．nov．．     

万隆霉素抗菌活性成分的分离鉴定

【目的】分离、纯化和鉴定万隆霉素抗菌作用的主要活性成分。【方法】以体外抗枯草芽孢杆菌为活性跟踪指标,通过硅胶柱层析和高效液相色谱等方法,从万隆霉素产生菌GAAS 2507发酵物中分离得到抗菌主要活性成分,采用电喷雾质谱（ESI-MS）、核磁共振谱（1HNMR、13CNMR、DEPT、DQFCOSY、HSQC、HMBC、NOESY）波谱法对其进行结构解析。【结果】波谱结构解析表明抗菌活性成分为Quinomycin C,其对细菌性条斑病菌（MIC值为1.563μg•ml-１）、黄瓜疫病菌（EC50值为1.256μg•ml-1）和节瓜枯萎病菌（EC50值为20.570μg•ml-1）具有明显的抗菌活性。【结论】Quinomycin C是万隆霉素主要活性成分之一。     

农抗万隆霉素的急性毒性研究

农用抗生素万隆霉素是广东省农科院植物保护研究所分离筛选出来的新结构农用抗生素,其急性毒性试验结果表明,急性经口LD50雌鼠为2 610 mg/kg、雄鼠1 780 mg/kg;皮肤刺激强度平均分值为2.5、急性眼刺激积分指数(I.A.O.I)最高值为43,眼刺激的平均指数(M.I.O.I)7天后为13.5,对SD大鼠的急性经皮LD50＞2 050 mg/kg.按国家标准GB15670-1995分级,17.5%农用抗生素万隆霉素乳油急性毒性为低毒农药,完全符合低毒农药登记的毒性标准,可以作为低毒农药进行临时登记.     

农抗万隆霉素产生菌发酵培养的碳源和氮源研究

农抗万隆霉素的产生菌为新链霉菌菌株。选用可溶性淀粉、玉米淀粉、糊精、大米粉、玉米粉、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等8种碳源作为万隆霉素产生菌发酵培养的碳源进行研究,结果表明,比较适合于农抗万隆霉素生长的碳源为葡萄糖、可溶性淀粉、麦芽糖、大米粉等,而比较适合于生产活性物质的碳源为大米粉和糊精。选用玉米浆、花生饼粉、蛋白胨、酵母膏、牛肉膏等动植物和微生物来源的氮源作为研究氮源的对象,试验结果表明,较适合于农抗万隆霉素产生菌生产和生长的氮源为玉米浆和酵母膏。     

农抗万隆霉素对马铃薯晚疫病菌的抑制作用

为了寻找防治马铃薯晚疫病的新型生物农药,测定了农抗万隆霉素对马铃薯晚疫病菌菌丝生长、游动孢子释放和萌发的抑制作用。结果表明,其对马铃薯晚疫病菌菌丝生长,游动孢子释放和萌发的抑制中浓度分别为39.22μg/mL、335.63μg/mL和22.13μg/mL。离体叶片测试发现,浓度高于1.25mg/mL时,对马铃薯晚疫病菌致病性的抑制效果达60%以上。农抗万隆霉素对马铃薯晚疫病菌有明显的抗生作用,具有一定的开发潜力。     

农抗万隆霉素的生物自显影检测技术研究

通过建立以硅胶板层析法为基础,以枯草杆菌作为指示菌的生物自显影法作为农抗万隆霉素活性组成的常规定性检测方法：用50mg／mL农抗万隆霉素粗提物点样0．5mL,用三元溶剂乙酸乙脂：异丙醇：正己烷=71．5：16．8：ll,7展开,贴板10min,37℃培养10h即可得到清晰的抑菌斑色谱图。应用该方法可将万隆霉素粗提取物分离得到10个活性组分。     

农抗万隆霉素对黄瓜疫病菌孢子形成和萌发的影响研究

采用农抗万隆霉素对黄瓜疫病菌游动孢子囊和游动孢子的形成、萌发进行了研究。结果表明,万隆霉素对黄瓜疫病菌游动孢子囊的形成、游动孢子产生、休眠孢子的萌发均有抑制作用;万隆霉素处理的菌丝产生的膨大菌丝体、游动孢子囊产生的数量均相对较少,游动孢子囊多数破裂,形状不规则。万隆霉素对黄瓜疫病菌孢子形成量抑制的EC50为2.5955μg/mL,对孢子萌发抑制的EC50为1.5624μg/mL。     

阿扎霉素B(azalomycin B)发酵条件的研究

吸水链霉菌NND 5 2 A13菌株经发酵产生阿扎霉素B (azalomycinB)。培养及产素最佳条件 :培养基组成 (g/L)为淀粉 2 0 ,葡萄糖 10 ,黄豆粉 2 0 ,蛋白胨 3 ,酵母膏 2 ,NaCl5 ,MgSO4 ·7H2 O 0 5 ,CaCO33 ,pH 7 5 ;最适生长温度 2 8℃ ;在 10L发酵罐中装液量 70 % ,接种量 5 % ,转速 2 30r/min ,通气量 8L/min ,发酵周期 80h ,阿扎霉素B产量达132 0mg/L。     

灰色链霉菌LD1810产胰蛋白酶发酵条件的优化

胰蛋白酶(Trypsin)作用于碱性氨基酸精氨酸及赖氨酸羧基所组成的肽键,被广泛用于食品、医药和皮革等工业领域。该文研究高产诱变灰色链霉菌LD1810产胰蛋白酶(SGT)的最优发酵培养基,探讨SGT的最佳发酵条件,为SGT的商业化生产提供技术参考。通过单因素试验和L_9(3~4)正交试验确定发酵培养基的最佳组分:葡萄糖20 g/L,大豆粉40 g/L,KH_2PO_4 2.5 g/L,CaCl_2 1 g/L。最适发酵条件为发酵温度28℃,初始pH 8.0,300 mL三角瓶的装液量100 mL,摇床转速240 r/min。     

万隆霉素抑制细菌的作用机理初探

以革兰氏阳性细菌枯草芽孢杆菌MIGI.22(Bacillus subtilis)和革兰氏阴性细菌水稻白叶枯病菌(Xanthomonas ovyzaepy)为研究对象,对万隆霉素的抑菌机理进行了初步研究。结果表明,万隆霉素可显著抑制这2种细菌的氧呼吸作用,随着反应体系中万隆霉素终浓度由0逐渐增加到50μg/mL,枯草芽孢杆菌氧呼吸作用持续的时间由对照的28 min减小到10 min,白叶枯病菌则由18 min减小到8 min,两者的相对耗氧量分别由对照的86.9%和62.9%逐渐下降到0;此外,对这2种细菌NADH氧化酶活力进行的研究表明,万隆霉素可显著抑制细菌各个生长阶段酶的活力的提高,这与万隆霉素抑制其氧呼吸作用密切相关。     

农用抗生素产生菌TS67诱变育种研究

以海洋真菌（Penicillum sp）TS67为出发菌株,分别采用紫外线、微波、亚硝酸、硫酸二乙酯对其孢子悬液进行诱变处理,经紫外诱变获得一株高产菌株Z10,通过微波诱变获得一株高产菌株W8。抑茵试验表明,二者的抑菌活性比原始菌株分别提高了41．9％和45．6％。经传代试验,Z10和W8连续传代10次,遗传性状稳定性较好。     

农业有机废弃物生物发酵产生CO2的条件研究

采用L18(37)正交设计法对农业有机废弃物生物发酵产生CO2的适宜控制条件进行了研究.结果表明,以农业有机废弃物猪粪或鸡粪等畜禽粪便作为氮源,在温度50℃、含水量45%左右,中性pH值(6.5～7.5)、C/N比为25:1的组合条件下最有利于生物发酵产生CO2.     

海洋杀虫细菌JAAS01发酵条件优化及诱变选育研究

在JAAS01单因子试验基础上,用正交试验L9(3^4)对其发酵培养基进行优化。优化培养基组成为：可溶性淀粉3．5％、蛋白胨2．5％、碳酸钙0．2％、陈海水75％、蒸馏水25％,pH值7．5。28℃、200r／min摇床震荡培养3d,发酵液对棉铃虫初孵幼虫的杀虫活性为67．33％。采用硫酸二乙酯(DES)和^60Coγ射线两种不同的处理方式,对初发菌株JAAS01细胞进行诱变,经棉铃虫活体筛选获得突变株JAAS01D,该突变株发酵液杀虫活性达77．78％。传代试验表明,该突变株遗传性能较稳定。     

增加无机盐和表面活性剂对B-3543摇瓶发酵的影响

对抗生素B-3543产生菌F2-1310的摇瓶发酵培养基及其发酵条件进行了研究,结果表明在培养基中KH2PO4由0.05%增至0.15%和0.20%,发酵效价提高15.33%和31.01%,加入（NH4）6Mo7O2450mg/L发酵效价提高38.45%,加入ZnSO4 100mg/L发酵效价提高28.00%,加入MnSO4 200mg/L发酵效价提高10.30%,加入Twen-20 100mg/L以及Twen-80 50mg/L发酵效价分别提高22.49%和26.67%。     

一株抗生素产生菌No.24菌株发酵液抗菌谱及稳定性测定研究

从12个省采集的200份土壤中分离得到一株放线菌No.24菌株,其产生菌经初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)。以17种病原真菌、8种病原细菌和酵母菌为供试菌,分别采用抑制菌丝生长速率法和管碟法测定了No.24菌株发酵液对病菌的抗菌活性。抑制菌丝生长速率法生测结果表明,No.24菌株发酵液对17种供试真菌的菌丝生长抑制率达80％以上的占76.5％;管碟法生测结果表明,No. 24菌株发酵液对8种供试细菌和酵母菌的4种抑菌圈直径在15 mm以上。对No.24菌株发酵液的稳定性测定结果表明,发酵液对热和酸的稳定性强,发酵液加热到80C未丧失活性,在pH 2~3的1 mol/L HCI溶液中活性几乎不丧失,但对碱的稳定性差。菌株传接5代时,活性稳定,从第6代开始其活性缓慢降低,第10代的抑菌圈直径比出发菌株仅减少了1.8mm。     

一株抗生素产生菌No.24菌株发酵液抗菌谱及稳定性测定研究

从12个省采集的200份土壤中分离得到一株放线菌No.24菌株,其产生菌经初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces).以17种病原真菌、8种病原细菌和酵母菌为供试菌,分别采用抑制菌丝生长速率法和管碟法测定了No.24菌株发酵液对病菌的抗菌活性.抑制菌丝生长速率法生测结果表明,No.24菌株发酵液对17种供试真菌的菌丝生长抑制率达80%以上的占76.5%;管碟法生测结果表明,No.24菌株发酵液对8种供试细菌和酵母菌的4种抑菌圈直径在15 mm以上.对No.24菌株发酵液的稳定性测定结果表明,发酵液对热和酸的稳定性强,发酵液加热到80 ℃未丧失活性,在pH 2～3的1 mol/L HCl溶液中活性几乎不丧失,但对碱的稳定性差.菌株传接5代时,活性稳定,从第6代开始其活性缓慢降低,第10代的抑菌圈直径比出发菌株仅减少了1.8 mm.     

白腐真菌发酵罐液态发酵产漆酶条件的优化

通过在发酵罐中液体发酵产漆酶,在发酵罐中筛选黄孢原毛平革菌液体发酵产漆酶的最佳条件.试验选取已优化的白腐真菌液态发酵培养基进行培养,在发酵罐中进行单因素和多因素正交试验,对其在发酵罐中发酵产酶条件进行优化.选取的白腐真菌黄孢子原毛平革菌的最佳发酵生产条件为:温度28℃、转速300r/min、通气量5L/min(通气比1.0vvm)、pH值5、接种量为15%.在此条件下最高产酶水平可达14.86U/mL.     

农用抗生素高产育种技术研究进展

综述了近年来国内外农用抗生素生产上常用的几种高产菌株育种技术的研究进展,内容包括自然选育、诱变育种、基因重组育种、生物工程育种技术.并对各种技术尤其是的原生质体融合及研究热点--生物工程育种技术从技术原理及应用上作了较为详细介绍.通过对当前各种农用抗生素育种技术在生产应用上存在问题的讨论对其应用前景作了展望,认为通过细胞工程和生物技术发展原生质体融合和生物工程育种技术构建以生物工程技术为主的多元育种途径,是今后农用抗生素育种发展的重要方向.     

血芝深层发酵条件优化初探

以多糖和三萜化合物为指标,初步优化血芝深层发酵碳、氮源及温度、pH值等参数,并确定液体发酵血芝的最佳工艺条件。结果表明血芝液体发酵的最适碳源为玉米粉,最适氮源为黄豆饼粉,最适初始pH值为5,最适温度为26℃。发酵96h生物量基本稳定,胞内多糖含量与产量分别在60、72h达到最大,分别为2.68%、8.960mg/100mL;三萜类化合物含量和产量均在96 h达到最大,分别为2.51%、11.4mg/100mL。