河南省番茄灰霉病菌对3种杀菌剂的抗药性检测

为了明确河南省番茄灰霉病菌对苯并咪唑类杀菌剂多菌灵、二甲酰亚胺类杀菌剂腐霉利和氨基甲酸酯类杀菌剂乙霉威的抗药性状况,2013年从河南省不同保护地中采集番茄灰霉病病果或病叶,经单孢分离共获得番茄灰霉病菌菌株139株。采用最低抑制浓度法（MIC）测定了其对多菌灵、腐霉利和乙霉威的抗药性。结果显示：番茄灰霉病菌对多菌灵、腐霉利和乙霉威产生抗性菌株的频率分别为81. 29%、80.58%和93.53%; 所测菌株对3类杀菌剂的抗性类型有BenRDicSNPCS、BenRDicRNPCS、BenRDicSNPCR、BenSDicRNPCR、BenSDicSNPCR和BenRDicRNPCR 6种,所占比例分别为2. 88%、3.60%、3.60%、5.04%、13.67%和71. 22%。表明河南省番茄灰霉病菌已对多菌灵、腐霉利和乙霉威产生抗药性,迫切需要筛选新的杀菌剂防治番茄灰霉病。     

番茄叶霉病菌对多菌灵、乙霉威及代森锰锌抗性检测

报道了番茄叶霉病菌Fulvia fulva对多菌灵、乙霉威及代森锰锌的敏感性基线,以及抗性频率和抗性水平。离体条件下,多菌灵、乙霉威及代森锰锌对番茄叶霉病菌敏感菌株的平均EC50值分别为0.101、2.475、9.067 μg/mL;最低抑制浓度(MIC)值分别为0.5、5、50 μg/mL 。山西晋南地区番茄叶霉病菌对3种杀菌剂的抗性频率最高,分别达到97.4%、70.5%、98.7%;山西吕梁地区与太原地区相对较低,但该病菌对3种杀菌剂的抗性频率也都超过了30%。辽宁沈阳、山东寿光、河北保定番茄叶霉病菌对多菌灵的抗性频率均为100%;对乙霉威的抗性频率前两地为100%,保定为10%;对代森锰锌的抗性频率都超过90%。所有抗性菌株对多菌灵均属于高抗类型,抗性指数超过5000,测不出MIC值;对乙霉威有50%的高抗菌株,抗性指数在100以上;对代森锰锌各地均未发现高抗菌株,低抗和中抗菌株所占比例较大,其抗性指数集中在50左右。对多菌灵与乙霉威具有双重抗性的菌株占测试菌株总数的49.9%,并且首次在田间发现了对3种杀菌剂都具有抗性的番茄叶霉病菌多抗菌株。     

辽宁省蔬菜灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性

2006年从辽宁省不同地区采集蔬菜灰霉病果或病叶,经分离共获得灰霉病菌株86株。采用菌丝生长速率法测定了其对嘧霉胺的敏感性。试验结果表明,灰霉病菌对嘧霉胺产生中等水平抗药性,抗性频率为17.41%。经紫外、药剂联合诱导获得了高抗菌株,抗性倍数最高达62.78倍。嘧霉胺与多菌灵和腐霉利间不存在交互抗药性,苯胺基嘧啶类杀菌剂之间存在交互抗性。野生抗性菌株具有较好的遗传稳定性,连续转接9次后抗药性无明显下降。不同菌株的菌丝生长速度、鲜重和产孢量存在明显差异,但该差异与灰霉病菌对嘧霉胺的敏感性无相关性。     

北京地区番茄灰霉病菌的多重抗药性检测

2009年12月-2010年5月,在北京12个郊区县采集番茄病标样150份,分离纯化得到109个灰葡萄孢（Botrytis cinerea）单孢菌株,用最低抑制浓度法（MIC）测定了其对苯并咪唑类（多菌灵）、二甲酰亚胺类（腐霉利）和氨基甲酸酯类（乙霉威）杀菌剂的抗药性。结果表明：番茄灰霉病菌对多菌灵、腐霉利和乙霉威产生抗性菌株的频率分别为96.3%、80.7% 和58.7%;所测菌株对3类杀菌剂的抗性类型有BenRDicSNPCS、BenSDicSNPCR、BenRDicRNPCS和BenRDicRNPCR 4种,所占比例分别是19.3%、3.7%、21.1%和56.0%,表明北京地区番茄灰霉病菌对苯并咪唑类、二甲酰亚胺类和氨基甲酸酯类三类杀菌剂的抗药性严重,在生产中需慎用,应选择一些替代的新型杀菌剂和生物农药。     

灰霉病菌对三种杀菌剂的抗性表现型分布及稳定性测定

采用最低抑制浓度法(MIC)和菌落直径法,对采自山西晋中、晋南、晋东南和晋北4个地区的188个灰霉病菌株对3种杀菌剂的抗性表现型和稳定性进行了测定,旨在了解灰霉病菌的抗药性状况和预测其抗性发展趋势。结果表明:对多菌灵的抗性表现型可分为敏感(S)、低抗或中抗(RM)和高抗(R),对腐霉利和乙霉威可分为敏感(S)和抗性(R)。以对多菌灵、腐霉利和乙霉威的抗性为序,检测出8种不同类型的抗性表现型,即RRR、RRS、RSR、RSS、RMRS、RMSR、RMSS 和SSR。各表现型的分布频率随各地区用药历史和水平的不同而变化,并与抗性监测结果相一致。对55个不同抗性表现型的单孢菌株的稳定性测定结果表明:继代无药培养10代后,以RRR和RSS型表现最稳定,而其余类型菌株均不同程度发生了变异,尤其是RMSS和RMRS型菌株100%发生了变异,抗性表现型不稳定的菌株占52.7%。对多菌灵的抗性变化趋势是由敏感向低抗、再向高抗发展;对腐霉利的抗性变化主要是由抗性转变为敏感;而对乙霉威的抗性则相对比较稳定。     

湖南省草莓灰霉病菌对4种杀菌剂的抗药性检测

为明确湖南省草莓灰霉病菌菌株的抗药性状况,2013-2015年从湖南省不同地区草莓灰霉病病果或病叶上经单孢分离获得草莓灰霉病菌454株,采用最小抑制浓度法(MIC)检测不同地区草莓灰霉病菌株对多菌灵、腐霉利、异菌脲、嘧霉胺的抗药性。结果表明:草莓灰霉病菌对多菌灵、腐霉利、异菌脲、嘧霉胺的抗性频率分别为55.73%,77.31%、3.52%和77.31%;所测菌株对4种杀菌剂的敏感性类型有Cbz~RPcm~RIpd~RPmt~R、CbzSPcm~RIpd~RPmt~R、Cbz~RPcm~RIpdSPmt~R、Cbz~SPcm~RIpdSPmt~S、Cbz~RPcm~SIpd~SPmt~R、Cbz~SPcm~RIpd~SPmt ~R等6种,其所占比例分别为33.26%、5.07%、41.41%、4.63%、3.96%、11.67%,未发现对4种杀菌剂均敏感的类型,表明湖南省草莓灰霉病菌已对多菌灵、腐霉利和嘧霉胺产生抗药性,对异菌脲的抗药性较低。     

山东蓬莱葡萄灰霉菌对7种杀菌剂的抗药性检测

为了明确葡萄灰霉菌对啶酰菌胺、多菌灵、咯菌腈、异菌脲、腐霉利、嘧霉胺的抗药性和对抑霉唑的敏感性,本试验采用菌丝生长速率法和孢子萌发法检测了采自山东蓬莱地区的69株葡萄灰霉菌对上述前6种杀菌剂的抗药性、对抑霉唑的敏感性及抑霉唑与其他6种杀菌剂的交互抗性关系。结果表明,抑霉唑对这69株葡萄灰霉菌的EC₅₀分布在0.403～28.76μg/mL之间,平均值为(9.34±10.34)μg/mL;葡萄灰霉菌菌株中抗啶酰菌胺(BosR)、多菌灵(CarR)、咯菌腈(FluR)、异菌脲(IprR)、嘧霉胺(PyrR)、腐霉利(ProR)的比例分别为100%、100%、9.47%、97.18%、100%、89.20%,测试菌株的抗药性均为多抗类型,没有单抗菌株,其中对3种杀菌剂(啶酰菌胺、多菌灵、嘧霉胺)、对4种杀菌剂(啶酰菌胺、多菌灵、异菌脲、嘧霉胺)、对5种杀菌剂(啶酰菌胺、多菌灵、异菌脲、嘧霉胺、腐霉利或啶酰菌胺、多菌灵、咯菌腈、异菌脲、嘧霉胺)和对6种杀菌剂(啶酰菌胺、多菌灵、咯菌腈、异菌脲、嘧霉胺、腐霉利)的抗性频率分别为2.33%、9.30%、79.07%、2.33%、6.97%,表明啶酰菌胺、多菌灵、嘧霉胺对测试葡萄菌株完全丧失防效,建议在该葡萄产区停止使用这些药剂,测试菌株对腐霉利、异菌脲的抗性频率高,建议采取限制使用、禁止单独使用等措施,测试菌株对咯菌腈的抗性频率较低,可以继续使用但需按照科学使用规则进行。抑霉唑与其他6种杀菌剂间不存在交互抗性关系,说明其可以和其他药剂同时使用但建议减少使用。     

四川猕猴桃灰霉病菌对4种杀菌剂的抗药性检测

为明确猕猴桃灰霉病菌对常见杀菌剂的抗药性状况, 本试验于2016年-2018年调查统计了四川猕猴桃生产中防控灰霉病所用的药剂种类和施药频次, 并从四川8个猕猴桃主产区采集病叶?病花和病果, 经单孢分离获得122个灰葡萄孢 Botrytis cinerea 菌株, 采用最低抑制浓度法(MIC)测定其对4种化学药剂嘧霉胺?咯菌腈?腐霉利和异菌脲的抗药性?结果表明:用于四川猕猴桃灰霉病防控的药剂主要有8种, 其中嘧霉胺?异菌脲和腐霉利3种药剂施用频次最高; 猕猴桃灰霉病菌对嘧霉胺?咯菌腈?腐霉利和异菌脲的抗性频率分别达95.08%?86.07%?80.33%和5.74%, 且不同产区的灰霉病菌对药剂的抗药性频率不同; 所测菌株对4种杀菌剂的敏感性类型共有8种, 其中以Pyr RFlu RPcm RIpr S(对嘧霉胺?咯菌腈?腐霉利表现抗性, 对异菌脲表现敏感)类型为主, 该类型的菌株占65.57%, 对4种杀菌剂均表现抗性的菌株为7株?表明四川省猕猴桃灰霉病菌对嘧霉胺?咯菌腈?腐霉利和异菌脲已经产生了抗药性, 对异菌脲抗药性较低, 迫切需要筛选新的杀菌剂防治猕猴桃灰霉病?     

辽西地区设施蔬菜灰霉病菌对4种杀菌剂的抗性检测

为探明辽西地区设施蔬菜灰霉病菌抗药性发展现状,采集了172株灰霉病菌,对腐霉利、嘧霉胺、啶酰菌胺、氟啶胺进行抗性频率和抗药性水平检测。结果显示：辽西地区灰霉病菌对上述4种药剂的抗性频率分别为72.09%、87.79%、16.90%、2.32%;相应的EC₅₀范围分别为0.175～7.147、0.003～107.823、0.172～74.329、0.001～2.678μg/mL。由此得出：嘧霉胺已不适合在辽西地区使用;腐霉利要严格使用次数,注意轮换用药;氟啶胺、啶酰菌胺抑菌活性较高,可作为主力防治药剂,但仍需科学使用。     

番茄叶霉病菌异菌脲抗药性突变体的诱导与生物学性状

测定了苯并咪唑类杀菌剂敏感-乙霉威抗性(BenS-DieR)、苯并咪唑类杀菌剂抗性-乙霉威敏感(BenR-DieS)和苯并咪唑类杀菌剂抗性-乙霉威抗性(BenR-DieR)3种类型的番茄叶霉病菌Cladosporium fulvum菌株对不同类型药剂的敏感性。结果表明,蕃茄叶霉病菌对供试药剂的敏感性与其对苯并咪唑类杀菌剂及乙霉威的敏感性无关。根据药剂对3类菌株EC50值的平均值, 16种杀菌剂抑制菌丝生长的活性依次为腐霉利＞乙烯菌核利＞异菌脲＞戊唑醇＞百菌清＞嘧霉胺＞醚菌酯＞代森锰锌＞8-羟基喹啉铜＞丙环唑＞苯醚甲环唑＞嘧菌酯＞灭锈胺＞烯酰吗啉＞烟酰胺＞三唑酮;抑制孢子萌发的活性依次为醚菌酯＞腐霉利＞百菌清＞乙烯菌核利＞灭锈胺＞8-羟基喹啉铜＞异菌脲＞代森锰锌＞嘧菌酯＞烟酰胺＞嘧霉胺＞戊唑醇＞丙环唑＞苯醚甲环唑＞三唑酮＞烯酰吗啉。通过紫外诱变共获得17株抗异菌脲突变体,突变频率为4.5×10-7。其中低抗、中抗和高抗菌株分别占 17.65%、70.59%和11.75%。这些突变体对腐霉利和乙烯菌核利表现交互抗性,对苯并咪唑类、脱甲基抑制剂(DMIs)、QoIs等药剂的敏感性与亲本菌株之间没有显著性差异,与亲本菌株在生长、产孢、致病能力等方面也无显著差异,但对渗透胁迫的敏感性要显著高于亲本。     

两种蚕豆赤斑病菌对常用杀菌剂的抗药性检测及比较

对采自浙江、湖北和安徽3省的蚕豆赤斑病样品进行了病原菌的分离和鉴定,采用菌丝生长速率法检测了引起赤斑病的2种病原菌——蚕豆葡萄孢Botrytis fabae和灰葡萄孢B.cinerea 的抗药性发生情况,并在离体条件下通过抗药性诱导试验比较了二者的抗药性风险。结果共分离得到153个菌株,其中蚕豆葡萄孢122株(占79.7%),灰葡萄孢31株(占20.3%)。共检测到37株多菌灵高水平抗药性菌株(其中蚕豆葡萄孢9株)和42株异菌脲低水平抗药性菌株(其中蚕豆葡萄孢17株);嘧霉胺对153个菌株的EC50值在0.01~5.13 μg/mL之间,平均EC50值为0.72±0.15 μg /mL;表明蚕豆赤斑病菌对常见杀菌剂已表现出一定的抗药性,且灰葡萄孢的抗药性问题比蚕豆葡萄孢要严重得多。抗药性诱导试验进一步证实,灰葡萄孢的抗药性风险明显高于蚕豆葡萄孢。     

Detection and characterization of benzimidazole resistance of <Emphasis Type="Italic">Botrytis cinerea</Emphasis> in greenhouse vegetables

From 2003 to 2006, a total of 426 single-conidial isolates of B. cinerea collected from greenhouse vegetables in China were characterized for resistance to benzimidazole fungicides and diethofencarb according to inhibition of mycelial growth. Rapid development of double-resistance to benzimidazoles and diethofencarb was observed. Three types of benzimidazole-resistant isolates, Ben R1, Ben R2 and Ben R3 were detected. A new phenotype, Ben R3, which showed low level of resistance to benzimidazole fungicides and resistance to diethofencarb, was detected with frequencies of 6.8%, 10.0%, 13.2% and 12.4% from 2003 to 2006, respectively. Further studies indicated that Ben R3 was caused by a point mutation from GAG in sensitive(S) isolates to GTG at codon 198 in the β-tubulin gene, predicted to cause a change from glutamic acid to valine. Ben R3 isolates had comparable growth, sporulation and pathogenicity ability as isolates of other phenotypes but were more sensitive at lower temperatures.     

梨黑斑病菌抗药性检测及其对啶酰菌胺的敏感性基线

黑斑病是梨的主要病害之一,近年来不少地区反映多菌灵等传统常用杀菌剂对其防治效果已出现下降。作者从浙江、江苏和安徽3省分离了252株梨黑斑病菌Alternaria kikuchiana,采用菌丝生长速率法检测了其抗药性发生情况。结果发现:所检测的黑斑病菌群体(n=252)对苯并咪唑类杀菌剂多菌灵的抗性频率为57.1%,且全部为高水平抗性(HR);对二甲酰亚胺类杀菌剂异菌脲的抗性频率为46.8%,全部为低水平抗性(LR);对甾醇脱甲基抑制剂类杀菌剂苯醚甲环唑的抗性为低水平(LR)及中等水平(MR),抗性频率均为28.6%;表明梨黑斑病菌对常用杀菌剂已产生较为严重的抗性。供试252株梨黑斑病菌对琥珀酸脱氢酶抑制剂啶酰菌胺的EC50值分布在0.12~3.85μg/m L之间,平均EC50值为(1.21±0.12)μg/m L,且其分布呈近似正态的单峰曲线。研究表明,啶酰菌胺可作为潜在的梨黑斑病防治替代药剂,其平均EC50值(1.21±0.12)μg/m L可作为梨黑斑病菌对啶酰菌胺的敏感性基线。     

浙江衢州地区柑橘绿霉病菌对抑霉唑和多菌灵的抗性水平及其分子机制

研究了采自浙江衢州地区,包括柯城区、衢江区和开化县12个贮藏库的70个柑橘绿霉病菌Penicillium digitatum菌株对抑霉唑和多菌灵的抗性频率、抗性水平及其抗性分子机制。结果表明:柯城区和衢江区的抑霉唑抗性菌株(最低抑制浓度MIC≥0.5 μg/mL)的比例分别为77.1%和62.5%,两地抗性菌株的平均EC50值分别为2.07±1.04 μg/mL和2.35±0.73 μg/mL,分别是当地敏感菌株EC50值的41.4和47.0倍;而采自开化县的菌株均对抑霉唑敏感(MIC≤0.1 μg/mL),平均EC50值为0.04±0.02 μg/mL。柯城区和衢江区的多菌灵抗性菌株(MIC≥10 μg/mL) 的比例分别为54.3%和54.2%,而开化县的抗性菌株比例仅为9.1%。即来自柯城和衢江两个柑橘主产区的绿霉病菌群体对抑霉唑和多菌灵的抗性频率均远高于非柑橘主产区的开化县群体,说明抗药性群体的形成与药剂使用历史有关。进一步研究发现,衢州地区柑橘绿霉病菌对抑霉唑的抗性均属于IMZ-R3型,即与抑霉唑靶标基因 CYP51B 启动子区的插入突变有关,而对多菌灵的抗性则与 β-微管蛋白基因的992位核苷酸点突变(T→A)导致对应的200位点的氨基酸突变(F→Y)有关。     

咯菌腈对草莓灰霉病Botrytis cinerea的毒力及防效研究初报

用生长速率法测定了咯菌腈、多菌灵、硫菌·霉威、苯醚甲环唑4种药剂对草莓灰霉病Botrytis cinerea的毒力。结果表明,4种药剂对草莓灰霉菌菌丝的生长都有不同程度的抑制作用,随药剂浓度增加抑制作用增强,其EC50值分别为0.0472、95.7193、0.4854、1.3611 mg/L,其中咯菌腈的毒力最强。田间防治试验结果表明:2.5%咯菌腈FC每667 m2施药量120 mL时防效为83.7%,80 mL时防效为67.7%;65%硫菌·霉威WP每667m2施药量100 g时防效为65.3%。     

Distribution and fitness of isolates of Botrytis cinerea with multiple fungicide resistance in Spanish greenhouses

Forty-nine greenhouses of vegetable crops were surveyed in southeast Spain at the beginning of the disease season in December 1992 to estimate frequencies of resistance to benzimidazoles, dicarboximides and N -phenylcarbamates (NPC) in B. cinerea . Out of 261 isolates collected, 28% were sensitive to both benzimidazoles and dicarboximides, 15% were benzimidazole-resistant and dicarboximide-sensitive, 8% were benzimidazole-sensitive and dicarboximide-resistant and 46% were benzimidazole- and dicarboximide-resistant. Resistance to benzimidazole, dicarboximide and N -phenylcarbamate was determined by measuring the ability of each isolate to grow in the presence of carbendazim, procymidone and diethofencarb fungicides respectively. Carbendazim- or procymidone- resistant isolates were found in all surveyed greenhouses. Three isolates were found with resistance to carbendazim, procymidone and diethofencarb collected in two adjacent greenhouses that were sprayed with the carbendazim and diethofencarb mixture. All other isolates were sensitive to the mixture because they were either sensitive to carbendazim and resistant to diethofencarb or vice versa. Fitness of 31 isolates of B. cinerea was determined in vivo by measuring their sporulation and lesion growth rate on leaf disks. No fitness costs were associated with resistance to iprodione (dicarboximide) and benomyl (benzimidazole). Isolates with EC₅₀ values higher than 101 mg/L for benomyl and 1.6 mg/L for iprodione were considered to be field resistant (they caused visible lesions on cucumber leaf disks treated with each fungicide).     

Evolution of resistance to different classes of fungicides in <Emphasis Type="Italic">Botrytis cinerea</Emphasis> from greenhouse vegetables in eastern China

Between 2003 and 2005, 337 isolates of Botrytis cinerea collected from greenhouse vegetables were characterized for resistance to fungicides. A low level of chlorothalonil resistance was detected and in these resistant isolates there was cross-resistance to captan and thiram. To the best of our knowledge, this is the first report of chlorothalonil resistance in B. cinerea from vegetables in China. The sub-population of B. cinerea highly resistant to benzimidazoles developed quickly during the years 2003 to 2005. Rapid spread of double resistance to benzimidazoles and diethofencarb was also observed. Resistance to dicarboximides was of low-level character and no highly resistant isolates were detected. In contrast, emergence of resistance to pyrimethanil, the only anilinopyrimidine fungicide used in China at present, was detected in 2003 just 3 years after pyrimethanil introduction. Pyrimethanil-resistant isolates demonstrated fitness comparable with that of wild sensitive isolates. These results suggest that pyrimethanil has a high risk of leading to resistance development in B. cinerea in greenhouse vegetables.     

安徽省番茄灰霉菌抗药性测定和治理

测定了安徽省番茄灰霉病菌对多菌灵、腐霉利、乙霉威的抗性。结果表明,田间有B_SD_SN_S、B_SD_SN_LR、B_SD_SN_HR、B_HRD_SN_S、B_MRD_LRN_S、B_HRD_LRN_S、B_HRD_LRN_LR7种抗性类型,对多菌灵、腐霉利、乙霉威具有抗性的菌株分别占试验总菌株数的28.3%、20%和73.3%。