牛结核体外免疫诊断技术

牛分支杆菌感染的主要特征是引起细胞内免疫反应。现在针对牛结核的诊断试验是以T细胞反应机制为基础的。低敏感性的结核血清学试验是不值得提倡的，血清学试验最好作为细胞学试验的补充而不是替代。最近，发现了牛结核r干扰素试验是一种快速的(24小时)惟一使用全血的体外试验，该方法在澳大利亚地区应用发现，该方法要比传统的结核菌素法诊断牛结核更敏感。假阳性反应的难题归因于所使用的抗原制品间的交叉反应特性，设动物对牛PPD和禽PPD的r干扰素反应作对照可解决假阳性的问题。虽然牛结核特异性蛋白已确认并被分类，这些特异性蛋白可能在血清学或细胞学诊断试验中使用，但是它们可能因牛对结核分支杆菌感染的免疫反应的遗传多样性而受到限制。     

牛结核病体外免疫诊断技术

牛分支杆菌感染的主要特征是引起 细胞免疫反应。现在牛结核病的诊断试验是 以T细胞反应机制为基础的。低敏感性的结 核血清学试验是不值得提倡的,血清学试验 最好作为细胞学试验的补充而不是替代。最 近,发现了牛结核γ干扰素试验是一种快速 的(24h)惟一使用全血的体外试验,该方法 在澳大利亚应用,结果表明,比传统的结核菌 素法诊断牛结核更敏感。假阳性反应的难题 归因于所使用的抗原制品间的交叉反应特 性,设动物对牛PPD和禽PPD的γ干扰素反 应作对照可解决假阳性的问题。虽然牛结核 特异性蛋白已确认并被分类,这些特异性蛋 白可能在血清学或细胞学诊断试验中使用, 但是它们可能因牛对牛分支杆菌感染的免疫 反应的遗传多样性而受到限制。     

牛结核分枝杆菌基因文库的构建

以国际标准牛型结核分枝杆菌（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）ＴＭＣ４１０为材料,制备其总ＤＮＡ,经过限制性内切酶Ｓａｕ３Ａ部分消化后,纯化回收９～２５Ｋｂ片段,并将其用Ｔ４ＤＮＡ连接酶与经ＢａｍＨＩ酶切为粘性末端的ＬａｍｂｄａＥＭＢＬ３左右臂连接。用噬菌体包装蛋白包装,再进行连续稀释,然后将不同稀释度的噬菌体转移到宿主菌ＬＥ３９２。所获重组子为６×１０４,因为牛结核杆菌基因组大小约为４×１０６Ｋｂ则以９９％概率筛到任一基因,要求的重组子数为１．０８×１０３,故该基因文库已达到要求     

国产牛结核诊断试剂盒

<正>一种快速检测牛结核的方法及其相应检测试剂盒,近日通过国家发明专利申请。这项技术是由江苏省扬州大学兽医学院院长秦爱建教授带领的课题组,历时近3年研制出的。该技术的关键是获得特异性抗牛γ干扰素不同表位的特异性单克隆抗体以及夹心ELISA方法的建立,其创新之处在于应用细胞免疫学技术,通过特异性结核抗原体外刺激淋巴细胞,使其分泌干扰素,然后测定干扰素的量,判定牛只是否感染结核。牛结核病是由牛分支杆菌和结核分支杆菌所引起的     

牛结核胶体金免疫层析快速诊断方法的建立及初步应用

建立一种快速检测牛结核抗体的方法,用以诊断牛结核病。根据胶体金免疫层析技术原理,用兔抗牛血清蛋白和大肠埃希菌表达的牛分支杆菌MPB70-83-ESAT-6蛋白分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获杭原,制备牛结核抗体检测试纸条。结果表明,MPB70-83-ESAT-6抗原的最适包被浓度为2.5mg/mL;研制的试纸条不与牛的其他疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性;该试纸条的最高检出稀释度为1∶640;试纸条与TST的符合率为80%。该试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,具有良好的应用前景。     

牛结核病检测诊断技术研究进展

结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium)引起的人、畜、禽共患的一种慢性传染病,由人结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、禽型分枝杆菌(M,avium)、非洲分枝杆菌以及田鼠分枝杆菌(M,microti)所引起,统称这些病原为结核分枝杆菌复合物(或群)。目前已知,结核病除感染人外还能使50多种哺乳动物和25种禽类感染,牛是最敏感的动物。牛结核     

牛结核分枝杆菌LppA基因克隆与序列分析

牛结核分枝杆菌LppA基因是一个编码磷脂蛋白的基因,为了研究牛结核分枝杆菌LppA基因的多态性,试验以牛结核分枝杆菌基因组DNA为模板,克隆 LppA基因,并进行序列测定,然后利用DNAMAN软件对其序列进行分析.结果表明:LppA基因全长564 bp,编码187个氨基酸,与GenBank所发表的牛结核分枝杆菌LppA基因的核苷酸同源性为99.47% ,氨基酸同源性为98.40%,有3处位点发生有义突变.     

牛结核分支杆菌的检测技术

结核病是一种人畜共患传染病,许多野生动物如鹿、羚羊、各种野鸟等都能感染和传播此病.由于结核病传染宿主广泛,可以交互传染,很难根绝,直到现在,仍是全球性传染病之一,成为发展畜牧业,保障人类健康的重要问题.牛结核病在世界各发生,其传播流行直接影响着畜牧业生产和畜牧业经济发展,是养牛业的一大障碍.因此,搞好牛结核病的诊断和防制工作至关重要.     

应用噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌的方法研究

建立噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。比较各种检测方法对测定结果的影响。结果:噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h,杀毒剂浓度在100mmol/L、室温作用10min为最佳检测条件。指示细胞浓度在1×106条/ml时,形成噬菌斑清晰,便于计数。结论:在选择最佳测定条件下,噬菌体生物扩增法检测牛结核分枝杆菌,快速、简便、灵敏。     

牛结核病诊断技术的研究进展

牛结核病（bovine tuberculosis）主要是由牛分枝杆菌（Myeobactelium bovis）引起的一种牛的慢性消耗性传染病,该病可通过病畜传染给人类或其他动物。自从1882年Robert Koch首次分离培养并详细描述了结核分枝杆菌以来,人们开始渐渐研究和认识分枝杆菌。到1898年,Smith首次将牛分枝杆菌（M.bovis）和其它的分枝杆菌明确区分开来。牛分枝杆菌主要感染不同种属的温血动物,包括有蹄动物、有袋动物、食肉类动物、灵长类、鳍脚类动物和啮齿类动物在内的50多种哺乳动物,还包括类鹦鹉鸟、石鸽、北美洲乌鸦等20多种禽类。其中牛是最敏感的动物。人对牛结核也很敏感,且很多病例与感染动物有接触史。由于牛和人类的关系（牛奶、牛肉及制品等）较其他动物更为密切,因此约10％左右的人结核病（不同的国家和地区不同有不同的比例）足由牛分枝杆菌引起。     

阿克苏地区某规模化奶牛场牛结核抗体的监测及分析

试验旨在为阿克苏地区牛结核的防控提供基础数据。试验在2020—2021年间于阿克苏地区某规模化奶牛场采集全血3 215份（2020年1 668份和2021年1 547份）,对采集的全血分离血清,使用牛结核抗体快速检测卡（胶体金法）对血清进行抗体阳性率检测,并对检测结果进行比对分析。结果显示,2020年共计检测1 668份不同繁殖状态样品,阳性样品23份,可疑样品3份,阳性率为1.38%;其中妊娠奶牛阳性率最高,为2.03%。2021年共计检测1 547份不同繁殖状态样品,阳性样品35份,可疑样品5份,阳性率为2.26%;其中妊娠奶牛阳性率最高,为2.26%。2020年共计检测1 577份不同月龄样品,阳性样品23份,可疑样品3份,阳性率为1.46%;其中6～10月龄奶牛阳性率最高,为1.82%。2021年共计检测1 477份不同月龄样品,阳性样品35份,可疑样品5份,阳性率为2.37%;其中6～10月龄奶牛阳性率最高,为2.84%。2020年共计检测874份不同胎次样品,阳性样品20份,可疑样品3份,阳性率为2.29%;其中7胎以上奶牛阳性率最高,为5.56%。2021年共计检测777...     

牛结核γ干扰素ELISA检测方法的建立及应用

为建立快速、敏感的牛结核分枝杆菌检测方法,本研究利用两株牛γ干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(MAb)建立检测牛IFN-γ的抗原捕获夹心ELISA方法。通过优化反应条件,确定抗体包被浓度为5μg/mL;全血刺激上清最佳稀释倍数为1∶2,作用时间为1 h;最佳酶标抗体作用时间为1 h;底物作用时间为15 min。该方法对重组牛IFN-γ的最小检测量可达25 pg/mL,对重组和天然牛的IFN-γ均具有特异性,与IFN-α、IFN-β或白细胞介素4为阴性反应;与山羊和绵羊的IFN-γ呈阳性反应,而与猪、鸡、鹿、犬和人的IFN-γ呈阴性反应。通过对177头牛进行检测,该方法与皮内变态反应的符合率为78.9%,与进口试剂盒的符合率为89.8%,表明该方法具有良好的应用价值。本研究为牛结核早期及其潜伏期感染的监测及流行病学调查提供了快速敏感的检测方法。     

牛结核的防制

牛结核病主要是由牛型结核分枝杆菌引起的一种人兽共患的慢性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为B类动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。1病原结核病是由结核分枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性传染病,结核分枝杆菌根据其致病性可分为人型、牛型、禽型和鼠型4种。其中以牛型对牛的致病性最强。结核分枝杆菌对湿热抵抗力弱,60℃30min即失去活性。但分枝杆菌因富含类脂和蜡脂,对外界环境的抵抗力较强,不会轻易被扑灭,3℃条件下可存活6￣12个月,即使是盛夏,也能在粪便中可存活2￣3天。在干燥的痰液中可存活6￣8个月,在冰点下能存活4￣5个…     

牛结核分枝杆菌PCR检测方法的建立

随着牛结核病疫情日趋严重,快速、高效的分子生物学检测方法建立显得十分必要.试验设计合成了牛结核分枝杆菌特异性引物,优化反应条件,建立了牛分枝杆菌PCR检测方法.结果显示,所建立的牛结核分枝杆菌PCR检测方法可有效检测牛结核分枝杆菌,在模板浓度、引物浓度和退火温度分别为1.32 μg/mL、0.5 μm/L、54℃时最佳;性能评估显示,该方法具有较好的特异性、敏感性和临床应用性,为我省牛结核病的综合防控提供关键技术.     

国产牛结核诊断试剂盒将问世

一种快速检测牛结核的方法及其相应检测试剂盒，近日通过国家发明专利申请。这项技术是由江苏省扬州大学兽医学院院长秦爱建教授带领的课题组，历时近3年研制出的。     

牛结核分枝杆菌的生物学性状

1 形态与染色 结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌,牛分枝杆菌则比较粗短,细菌细胞壁脂质含量较高,约占干重的60％,特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面,可影响染料的穿入.分枝杆菌一般用齐尼抗酸染色法,以5％石炭酸复红加温染色,但用3％盐酸乙醇不易脱色.若再加用美蓝复染,则分枝杆菌呈红色,而其他细菌和背景中的物质为蓝色. 近年发现结核分枝杆菌在细胞壁外尚有荚膜.