堆型艾美耳球虫早熟株与强毒株致病性和繁殖力的比较

为了比较堆型艾美耳球虫（E．acervulina）早熟株与强毒株的致病性和繁殖力情况,通过测定接种 E．acervulina 早熟株与强毒株后鸡只的精神状态、临床症状、增重、病变记分和卵囊产量,表明早熟株的排卵囊高峰出现在第5天,比强毒株提前1 d,早熟株的繁殖力是强毒株的85．8％;早熟株感染后对鸡只增重的影响较小,接种剂量在2．40×104个卵囊／羽之内时,相对增重率均大于90．0％,早熟株组鸡的肠道病变记分显著低于同剂量的强毒株组的肠道病变记分（P ＜0．05）。由此认为,该早熟株符合球虫早熟株的低致病性特性,可用于鸡球虫病早熟苗的制备。     

巨型艾美耳球虫山西早熟株诱导及生物学特性研究

本研究采用早熟选育技术，诱导选育出1株与已获得的山东株免疫原性差异较大的巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)山西株的早熟弱毒株，并对其进行生物学特性研究。结果表明：早熟诱导获得的巨型艾美耳球虫山西早熟株卵囊略小于亲本株，潜隐期为109 h;早熟株各组小肠病变记分差异显著低于(P<0.05)亲本株组，且临床症状较亲本株组弱；等剂量下，早熟株组的卵囊产量及卵囊繁殖力低于亲本株组；早熟株单次免疫剂量≥400个卵囊/只、2次免疫的一免剂量≥100个卵囊/只、二免剂量≥200个卵囊/只时可达到良好免疫效果。本研究结果为制备高效广谱、免疫原性良好的鸡球虫疫苗提供虫株和理论依据。     

柔嫩艾美耳球虫早熟株的内生发育及其致病性

为了给鸡球虫早熟弱毒疫苗的开发提供依据,对柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella) 北京株经10 代早熟选育获得的早熟株的内生发育研究发现,其第2 代裂殖生殖发育较快,第2 代裂殖体含裂殖子较少,提前进入配子生殖,从而造成卵囊“早熟”。该早熟株致病性大大下降,经口感染10×104 个/只的致病性仅相当于剂量0.1×104 个/只亲本毒株的致病性。该虫株可作为研制早熟弱毒苗用虫株。     

巨型艾美耳球虫早熟株选育及其相关生物学特性研究

为了选育巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)早熟株并观测其生物学特性,运用Jeffers创立的球虫早熟株选育方法,对实验室保存的E.maxima进行了早熟株选育,并比较了所获得的早熟株与母株在卵囊大小、繁殖能力、致病性、免疫保护力等生物学特性上的差异。经过17代早熟株选育,E.maxima的潜在期由母株的142 h缩短至107 h,缩短了35 h。早熟株卵囊的长、宽及大小均比母株小,且差异显著(P0.05);卵囊形状指数比母株的稍大,但差异不显著(P0.05)。早熟株的卵囊繁殖能力较母株的低,排卵囊高峰出现在接种后d6,较母株提前1 d。在同等剂量之下,早熟株的致病性低于母株,但免疫保护力和免疫原性与母株相当。早熟株的选育成功,为球虫早熟株弱毒疫苗的研制以及早熟株相关基因的筛选提供了重要材料。     

布氏艾美耳球虫保定株早熟系的免疫原性研究

经过20代的选育,选育出了布氏艾美耳球虫保定株早熟系虫株,该早熟系虫株与亲本株均对常见的抗球虫药物——克球素、地克珠利、磺胺喹恶啉和尼卡巴嗪高度敏感,敏感性与保定亲本株一致;分别接种200个该早熟系虫株和亲本株孢子化卵囊,21d后鸡群均能抵抗1.0×105个布氏艾美耳球虫强毒株孢子化卵囊的攻击,说明早熟株仍然保持良好的免疫原性。     

布氏艾美耳球虫保定株早熟系的免疫原性研究

经过20代的选育，选育出了布氏艾美耳球虫保定株早熟系虫株，该早熟系虫株与亲本株均对常见的抗球虫药物-克球素、地克珠利、磺胺喹噁啉和尼卡巴嗪高度敏感，敏感性与保定亲本株一致；分别接种200个该早熟系虫株和亲本株孢子化卵囊，21d 后鸡群均能抵抗1.0×10^5个布氏艾美耳球虫强毒株孢子化卵囊的攻击，说明早熟株仍然保持良好的免疫原性。     

接种不同数量柔嫩艾美耳球虫卵囊对雏鸡的致病作用

以15日龄罗曼蛋雏为对象,研究接种不同剂量柔嫩艾美球耳虫(E.tenella)卵囊对雏鸡的致病作用。试验共设4个组,其中3个球虫卵囊感染组和1个非感染对照组,球虫感染组鸡只分别接种E.tenella孢子化卵囊1×104、5×104、8×104个/只。结果显示,感染1×104、5×104、8×104个/只组的平均血便记分分别为0.750、1.825、2.500,致死率分别为10%、30%、60%,盲肠病变值分别为13.0、22.0、28.0,平均增重率分别为75%、56%、49%。试验表明,E.tenella卵囊具有很强的感染性,致病作用与其数量有关。     

毒害艾美耳球虫山西株的分离和鉴定

为了鉴定造成太谷区某鸡场57日龄蛋鸡死亡的鸡球虫种类，明确其生物学特性，本试验采用饱和食盐水漂浮法和单卵囊分离技术从病死鸡粪便中分离纯化得到1株球虫；将分离球虫口服接种SPF鸡，观察并测定卵囊最短孢子化时间、裂殖体寄生部位和大小、卵囊寄生部位和大小、潜隐期、死亡率、增重情况、肠道病变记分等指标，了解该虫株的生物学特点并初步鉴定其类型，随后采用序列特征性扩增区域(SCAR)标记技术进一步确定虫株类型。结果显示，分离虫株的裂殖体寄生于空肠，平均大小为(63.17±7.66)μm×(47.12±6.91)μm,卵囊仅盲肠可见，平均大小为(19.92±0.20)μm×(19.27±0.11)μm,虫株潜隐期为152 h,最短孢子化时间为18 h,接种5.0×10⁴个卵囊/羽和1.1×10⁵个卵囊/羽的分离虫株可分别造成40%和50%的实验鸡死亡，相对增重率下降至31.61%和20.87%,病变记分分别达到3.9和4.0;SCAR标记扩增显示，分离虫株与毒害艾美耳球虫(E.necatrix)的同源性达97.1%,命名为E.necatrix-CN-SX-...     

堆形艾美耳球虫早熟株选育及相关生物学特性研究

为了选育堆形艾美耳球虫（Eimeria acervulina）早熟株及观测其生物学特性,运用Jeffers创立的艾美耳属球虫早熟株选育方法,对实验室保存的堆形艾美耳球虫进行连续传代早熟选育,并对获得的早熟株与母株孢子化卵囊大小、繁殖能力、致病性以及免疫保护力等指标进行了测定,比较堆形艾美耳球虫早熟株与母株之间的基本生物学特性差异。经过18代早熟选育后,堆形艾美耳球虫的潜在期由母株的99h缩短至84h。与母株相比,早熟株的孢子化卵囊大小明显减小（P〈0．05）,卵囊繁殖能力降低了17％～42%。致病性试验中,早熟株感染组的平均增重均高于母株,而病变记分相当。免疫保护试验中,早熟株与母株的免疫保护力相当,其卵囊抑制率略低于母株,差异不明显（P〉0．05）。结果表明,本研究成功选育出堆形艾关耳球虫早熟株,对母株攻击具有保护力,为鸡球虫疫苗的研制奠定了基础。     

布氏艾美耳球虫保定株早熟系的选育及致病性研究

本实验采用按照Jeffers建立的球虫早熟株选育方法对布氏艾美耳球虫保定株进行早熟选育,经20代的选育获得了布氏艾美耳球虫早熟株。与保定亲本虫株相比,该早熟株潜隐期缩短了37h,即由125h减至88h;卵囊大小为24.4μm×20.0μm,形状指数为1.22;并且繁殖力下降了约40%,致病力显著低于亲本虫株;再经5代非选择性传代后,该虫株的早熟特性和弱毒性均得以保持。     

鸡和缓艾美耳球虫早熟虫株选育及其生物学特性研究

按照Jeffers1975年建立的艾美耳属球虫早熟虫株选育方法,对鸡和缓艾美耳球虫巴彦淖尔株（SY-MB株）进行了单卵囊分离、扩增和早熟虫株的选育。经SPF鸡15代传代之后,分离株的潜隐期由96 h缩短至77 h,缩短了19 h。按索勋等1998年建立的方法对选育出的和缓艾美耳球虫巴彦淖尔早熟株（SY-mb77株）进行10代非选择性传代,证明该早熟虫株的潜隐期、卵囊产量、免疫原性和致病性均具备早熟虫株特性,并能有效抵抗强毒虫株的攻击。     

鸡巨型艾美耳球虫单卵囊分离及雏鸡扩增试验

采用饱和食盐水漂浮法收集就诊病死球虫阳性鸡小肠中段内容物中的球虫卵囊,恒温培养至孢子化后,用2%琼脂薄板进行球虫单卵囊分离,分别感染7只5日龄雏鸡,对据形态学鉴定为巨型艾美耳球虫的分离株进行2代单卵囊分离和雏鸡感染,取其后代以每只1.0×10⁴个卵囊感染10只10日龄雏鸡进行卵囊扩增,获得大量纯种巨型艾美耳球虫卵囊。结果表明,刀片切割琼脂薄板单卵囊分离法操作简便,单卵囊感染成功率较高,准确率达100%,适用于纯种卵囊的分离与扩增。     

布氏艾美耳球虫南宁株的分离及鉴定

本试验从南宁市郊区某鸡场感染球虫病的病鸡粪便中收集到混合卵囊,采用改良过的琼脂单卵囊分离法从中分离纯化出2个球虫虫株,并对其中的1个球虫分离株进行了鉴定,鉴定结果为:该株球虫卵囊呈椭圆形或卵圆形,卵囊平均大小为(22.51±0.4790)μm×(15.94±0.5599)μm,平均卵型指数为1.41212±0.06714,裂殖体平均大小为31.33 μm×27.46 μm,潜在期为120 h 50 min,排卵高峰期为感染后第6天,最短孢子化时间为18 h 50 min,寄生部位为小肠中、下段,属中等毒力的球虫虫株。通过将这些测定和观察到的指标与各类文献中所记载的各种鸡艾美耳球虫的特征进行了对比,经过综合分析后,将该分离株球虫鉴定为布氏艾美耳球虫,并且将它命名为布氏艾美耳球虫南宁株,记为Eimeria.brunetti-GXNN。对该虫株的成功分离鉴定,为进一步了解本地球虫虫株的生物学特性,开展鸡球虫病的免疫预防奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制

为制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株单克隆抗体,用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株免疫BALB/c小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光试验（IFA）筛选,以有限稀释法克隆3次,制备单克隆抗体,并对制备的单克隆抗体进行鉴定。结果表明获得了2株分泌PRRSV膜基质蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞,命名为1D12、5H5,经鉴定其抗体亚型分别为IgG2b、IgM,2株均为κ链,腹水ELISA效价分别为1∶107和1∶105。该单克隆抗体与PRV、PPV、PCV、CSFV、JEV无交叉反应。作者成功制备了抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体,为进一步建立相关诊断方法奠定了基础。     

狭翅雏蝗蝗蝻抽样技术的研究

本文在空间格局研究的基础上,对狭翅雏蝗蝗蝻在不同密度下的理论抽样数及序贯抽样技术进行了研究。结果表明：狭翅雏蝗蝗蝻的理论抽样数可据ｎ＝（１／Ｄ２）（１２７５６／ｍ＋０３６１８）确定,序贯抽样可依Ｉｗａｏ法确定的两条截止线Ｔｏ（ｎ）＝８０７５ｎ±１１４１０５ｎ和据Ｋｕｎｏ确定的最大抽样数Ｔｎ＝１２７５６／（Ｄ２－０３６１８／ｎ）结合起来使用。     

堆型艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性测定

The study was aimed to explore the sensitivity of Eimeria acervulina （E.acervulina） precocious strain to some common anticoccidials (diclazuril, toltrazuril, sulfamonomethoxine, dinitolmide, decoquinate, nicarbazin, maduramicin, salinomycin and oxytetracycline). The sensitivity of E.acervulina precocious strain to 9 kinds anticoccidials was assessed by using 4 indices: anticoccidial activity percentage (POAA), reduction of lesion scores (RLS), relative oocyst production (ROP) and anticoccidial index (ACI). The results of these sensitivity trials indicated that the four indices POAA, RLS, ROP and ACI of groups toltrazuril, sulfamonomethoxine, dinitolmide, decoquinate, nicarbazin, salinomycin and oxytetracycline were all negative; the ROP index of diclazuril group was positive, the other three indices were negative. The ROP and ACI indices of maduramicin group were positive, the other two indices were negative. The results showed that the Eimeria acervulina precocious strain was sensitive to diclazuril, toltrazuril, sulfamonomethoxine, dinitolmide, decoquinate, nicarbazin, salinomycin and oxytetracycline, it was partly sensitive to maduramicin.     

一株鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株的分离鉴定

从四川德阳某鸭场病死鸭肝脏中分离的DY9株细菌,经理化特性、16SrRNA核苷酸序列与cam基因检测,证明为鸭疫里默氏杆菌,并对其毒力与毒力稳定性等进行了测定。DY9株细菌对14日龄非免疫健康鸭的LD50大于2.3×1010CFU/0.5mL,但死亡鸭不具有纤维素性炎症病变,并未能回收到细菌;经敏感鸭体内连续传10代和经巧克力营养琼脂平板传30代后毒力未见显著改变;培养滤液不影响鸭胚成纤维细胞的形态;油佐剂灭活菌苗与活菌苗免疫鸭后14d攻毒分别获得100%和79.52%的相对保护率,21d时均为100%。以上结果表明,DY9株细菌为毒力稳定的鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株。     

高寒生态脆弱区不同扰动生境草地植被及土壤无机氮变化特征

为了解不同干扰生境下高寒生态脆弱区草地植被、土壤无机氮素含量变化特征,以天祝高寒草地为对象,选取3种干扰生境(围栏内天然草地、围栏外天然草地以及牧道),测定和分析不同季节、不同土壤深度铵态氮和硝态氮含量变化特征。结果表明,不同干扰生境,地上植物种类、盖度、高度及生物量等变化明显;相同土层深度,铵态氮、硝态氮含量表现为围栏内>围栏外>牧道。相同干扰生境土壤铵态氮、硝态氮含量随土层深度增加而降低,且变化幅度较大,0~10 cm与20~30 cm土层间差异显著;土壤铵态氮、硝态氮含量从4月到10月呈现先增加后减少的趋势,并在8月出现峰值,围栏内土壤铵态氮含量8月与10月无显著差异,围栏外土壤硝态氮含量10月升高。3种干扰生境下铵态氮、硝态氮同地上生物量之间均呈正相关关系。     

鸭疫里氏杆菌生长曲线的测定

采用P L琼脂平板涂布法 ,测定鸭疫里氏杆菌WJ4株 (血清 1型 )、FXb7株 (血清 2型 )在P L肉汤中静置培养和振荡培养情况下的生长曲线。结果表明 ,在P L肉汤中振荡培养时 ,WJ4株培养 10h达生长最高峰 ( 4 7× 10 1 0 CFU mL) ,FXb7株 11h活菌数最高达 ( 4 2× 10 1 0 CFU mL) ;在静置培养时 ,WJ4株培养 2 2h达最高峰 ( 1 8× 10 9CFU mL) ,FXb7株 2 3h可达最高峰 ( 1 3× 10 9CFU mL)。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白刺激小鼠产生抗体的研究

为比较传统免疫、脾内免疫、胶粒免疫和硝酸纤维素膜皮下包埋等4种方法制备的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)核衣壳蛋白抗原免疫小鼠后刺激机体产生特异性抗体的水平,比较不同方法对于特定抗原刺激机体产生免疫应答的影响,筛选一种最有效的能够用于PRRSV核衣壳蛋白多克隆抗体和单克隆抗体制备的免疫方法。用PRRSV核衣壳蛋白作免疫原,分别用传统皮下免疫法、脾内免疫法、胶粒免疫和硝酸纤维素皮下包埋法免疫BABL/c小鼠,间接ELISA检测血清效价,用Western blotting检测其特异性。三免后,常规免疫小鼠血清效价为1.28×105,脾内免疫法为1.28×105,胶粒免疫为3.2×104,NC膜皮下包埋法为6.4×104。结果表明,4种免疫方法均获得了高滴度、高特异性的多克隆抗体,与传统免疫法相比,其他3种方法有其明显的优势,即节省抗原,其中脾内免疫法为优先选用的免疫方法,其免疫效果好,可节省大量抗原和时间。