一种用健康兔血清代替溶血素和天竺鼠补体的简易补体结合反应

在防治某些家畜传染病的实践中,广泛的应用着补体结合反应。例如,根据补体结合反应的指征,可以阐明马鼻疽的病性,决定相应的防治措施。又如在诊断家畜的布氏桿菌病和牛的传染性胸膜肺炎时,补体结合反应也是综合诊断措施中的重要方法之一。但是,由于这种反应的现行操作方法比较复杂,而且需要天竺鼠的补体和特制的溶血素,因此,这种反应还未能在我国所有的基层兽医机构中普遍应用。本教研组以改良现行的补体结合反应为目的,从1959年下半年起,经过几个月的摸索,终于设计成功一种简易的补体结合反应。这种反应在操作方法上远较现行的标准补体结合反应简便。现将材料整理于后,供同道参考试用。     

血清学检测在传染病诊断与控制中的应用

血清学检验是体外发生的抗原抗体反应,根据可见的现象判定反应结果。凝集试验用颗粒性抗原,有直接法、间接法等。沉淀试验用可溶性抗原,有环状沉淀、琼脂免疫扩散、免疫电泳等方法。标记抗体技术尤其是荧光抗体与酶标抗体技术发展迅速、应用广泛。荧光抗体标记有直接法及间接法,酶标记抗体技术有免疫酶组化法及ELISA两类。补体结合试验需有补体系统和溶血系统共同参与。中和试验有体内中和试验和     

棉铃虫幼虫血淋巴免疫因子溶血素的理化特性研究

为深入研究棉铃虫幼虫血淋巴免疫因子溶血素的分子结构和生理功能,明确其分离、纯化的理化条件,采用分光光度法分别研究了温度、浓度、作用时间、pH、EDTA和金属离子对该溶血素的溶血活性影响及其糖结合特性。结果表明,棉铃虫幼虫血淋巴溶血素属热不稳定型。溶血素反应浓度与溶血活性并不成正比,8倍稀释液的溶血活性反高于4倍稀释液。反应2 h后,血淋巴溶血素对鸡血红细胞溶解速度急剧加快,6 h溶血效能达最大。血淋巴溶血活性的最适pH 7.0～8.0。62.5～500 mmol·L~(-1)EDTA对血淋巴溶血活性具有促进作用,而Ca~(2+)却具有极显著的抑制作用。糖抑制试验结果表明,供试的8种糖(糖苷)和唾液酸均未对血淋巴溶血活性产生抑制作用。     

仿刺参补体类似物活性的测定

用3种方法对仿刺参Apostichopus japonicus体腔液、体腔液上清液及体腔细胞中的总补体溶血活性和补体类似物AjC3、AjC4活性进行测定.结果表明:在仿刺参体腔液、体腔液上清液和体腔细胞中能够检测到总补体溶血活性和补体类似物AjC3、AjC4,表明仿刺参体内存在有脊椎动物的补体类似物,且活性与正常人补体活性相似.仿刺参体内总补体溶血活性和补体类似物AjC3、AjC4的活性依次顺序均为体腔液＞体腔细胞＞体腔液上清液.     

几种理化因子对仿刺参体腔液补体溶血活性的影响

测定了仿刺参Apostichopus japonicus 体腔液补体溶血活性,并研究了几种理化因子对仿刺参体腔液补体溶血活性的影响.结果表明:仿刺参体腔液补体溶血活性为(68.8±13.5) U/mL;仿刺参体腔液在pH为7.5、Mg2+浓度为8 mmol/L的EGTA-Mg-GVB缓冲液和20 ℃条件下恒温水浴90 min时,其溶血活性最高;Mg2+对仿刺参体腔液补体的溶血活性有影响,苯甲基磺酰氟(PMSF)、酵母聚糖、甲胺和肼对仿刺参补体旁路溶血活性均有明显的抑制作用.     

4种中药复方对小鼠的免疫增强作用

通过4种中药复方对小鼠的脾脏指数、体重、腹腔巨噬细胞吞噬指数和吞噬率、溶血素、溶血空斑、淋巴细胞增殖、血清中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、自然杀伤细胞(NK细胞)的影响作用,测得不同中药复方与对照组的差异。结果表明,复方1对小鼠的脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、血液中溶血素水平差异显著,复方2对小鼠的脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬率、血液中溶血素和溶血空斑差异显著;复方3对小鼠吞噬指数、血液中溶血素和溶血空斑、淋巴细胞增殖(ConA)差异显著;复方4对小鼠的脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、血液中溶血素和溶血空斑、淋巴细胞增殖(LPS)、血液中NO和NK细胞均差异显著。不同中药复方中复方4的免疫增强作用最强。     

棘皮动物体内防御机制的研究进展

概述了棘皮动物体内防御机制的研究进展。棘皮动物体内具有识别不同异物的机制,体腔细胞具有吞噬、捕捉、包囊入侵外来微生物等多种功能,并介导棘皮动物有效的细胞免疫机制。棘皮动物在捕捉细菌、排出细胞物质、裂解颗粒细胞等过程中能够激活细胞的包囊反应。棘皮动物血淋巴中的溶菌酶、溶血素、类补体及凝集素等因子共同参与机体免疫反应,而感染反应能够诱导细胞因子的产生。体液免疫反应是棘皮动物抵抗微生物入侵的主要防御反应。     

猪链球菌2型溶血毒素的产生条件及其特性分析

猪链球菌２型江苏分离株ＨＡ９８０１产生一种溶血毒素,培养条件影响其产量。最佳培养条件为Ｔｏｄｄ－Ｈｅｗｉｔｔ肉汤（ｐＨ７．５）中接种Ｖ（种子液）：Ｖ（肉汤）＝１：１００的种液,３７℃静置培养１２ｈ。培养基中的胰蛋白的胨对该溶血素的产生起决定性作用。该溶血素可被还原剂活化,被氧化剂和胆固醇及蛋白酶Ｋ抑制,亦被抗链球菌溶血素Ｏ阳性血清和抗猪链球菌２型全菌阳性血清抑制。该溶血素在－２０℃较稳定,在４,２     

牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb)β-溶血素(h/b)的克隆、表达及溶血活性分析

[目的]实现牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组β-溶血素的溶血活性.[方法]PCR扩增牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因,构建原核表达载体pET32a+/hlb,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,用96孔血凝板测定重组蛋白的溶血效价,以血琼脂平板法检测重组蛋白的CAMP反应.[结果]测序结果表明,扩增片段含有993 bp的ORF,可编码含330个氨基酸的成熟蛋白;SDS-PAGE分析重组蛋白表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为57 kD,表达量占菌体总蛋白的23.9%;溶血效价分析,金葡菌β-溶血素对绵羊红细胞的溶血效价为278 HU·mg-1,对奶牛红细胞的溶血效价为9×103Hu·mg-1;重组蛋白在血琼脂平板上和无乳链球菌能发生明显的CAMP反应.[结论]成功表达了牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素,该毒素对奶牛红细胞的溶血活性明显大于绵羊红细胞,显示出牛源金黄色葡萄球菌β-溶血素的特性明显不同于人源金黄色葡萄球菌β-溶血素,为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了理论基础.此外,重组蛋白还可用来特异性诊断、鉴别无乳链球菌,为兽医临床诊断提供新的方法.     

牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株（zfb）β-溶血素(hlb)的克隆、表达及溶血活性分析

 【目的】实现牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组β-溶血素的溶血活性。【方法】PCR扩增牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因,构建原核表达载体pET32a+/hlb,并在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,用96孔血凝板测定重组蛋白的溶血效价,以血琼脂平板法检测重组蛋白的CAMP反应。【结果】测序结果表明,扩增片段含有993 bp的ORF,可编码含330个氨基酸的成熟蛋白;SDS-PAGE分析重组蛋白表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为57 kD,表达量占菌体总蛋白的23.9%;溶血效价分析,金葡菌β-溶血素对绵羊红细胞的溶血效价为278 HU?mg-1,对奶牛红细胞的溶血效价为9×103 HU?mg-1;重组蛋白在血琼脂平板上和无乳链球菌能发生明显的CAMP反应。【结论】成功表达了牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素,该毒素对奶牛红细胞的溶血活性明显大于绵羊红细胞,显示出牛源金黄色葡萄球菌β-溶血素的特性明显不同于人源金黄色葡萄球菌β-溶血素,为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了理论基础。此外,重组蛋白还可用来特异性诊断、鉴别无乳链球菌,为兽医临床诊断提供新的方法。     

格罗斯氏反应在乳牛結核病上的应用

格罗斯氏(Gros,1939年,1942年)昇汞試驗在医学上是用来診断人的肝病的。在兽医学方面也有应用这种試驗的个别报导。这一試驗在动物各种疾病上的应用證明,它不是特異性的,不仅对肝炎可以产生阳性結果,而且对其他一些疾病,如胸膜炎、肺炎、腎盂腎炎、乳房炎等也可产生阳性結果。庫宾(Kubin,1955年)在乳牛結核病方面曾应用过这种試驗,他发現为了檢出对結核菌素呈現反应的无利的牛只以及由于阴性变态反应消失对結核菌素不呈現反应的結核病牛,这种試驗是一个有价值的方法。由于考虑到用格罗斯氏昇汞試驗可以查出在家畜流行病学方面是最危險的活动型的結核病牛,我們决定試用这种試驗来診断牛結核病。这項工作是在北京农業大学兽医微生物学及家畜流行病学教研組内、利用昌平、西郊和南郊农場(河北省)的牛只进行的。一     

牛金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因的克隆及序列分析

根据GenBank上发表的金黄色葡萄球菌β-溶血素基因序列,设计了一对特异性引物。提取临床乳腺炎致病性金黄色葡萄球菌山东株zfb的全基因组DNA为PCR模板,扩增β-溶血素基因,将PCR产物纯化后连接到pMD18-T载体中。测序结果表明,扩增片断含有993 bp的ORF,可编码含330个氨基酸和1个终止子的成熟蛋白,与已报道的金黄色葡萄球菌β-溶血素蛋白的氨基酸组成同源性为99.4%。软件分析显示,克隆的金葡菌β-溶血素是一种依赖于金属离子的磷脂酶。上述结果显示,已获得金黄色葡萄球菌β-溶血素基因,为获得重组金黄色葡萄球菌β-溶血素蛋白及对其结构和功能的研究奠定了基础。     

细菌溶血素的分类及代表性溶血素研究进展

 【研究目的】溶血素作为细菌致病的重要毒力因子,在动物细菌性疾病的发病过程中起着不容轻视的作用。但是,目前国内尚未见到关于细菌溶血素的系统介绍。另外,细菌溶血素的英文命名并不统一,检索时容易造成漏检或误检;【方法】通过查阅大量英文文献资料,归纳汇总近20年报道的溶血素研究进程;【结果】该文详细列出了细菌溶血素名称、分类以及各溶血素家族列表。并且分别介绍了其中三种典型的穿孔毒素：葡萄球菌α-毒素、链球菌溶血素-O（胆固醇结合家族代表）、埃希氏大肠杆菌溶血素HlyA (RTX家族成员代表)。【结论】最近十几年,溶血素的家族成员、分子结构、分类、作用机理日趋明朗。这无疑是寻找代替抗生素治疗细菌性疾病方法的一条新路。     

布鲁氏菌病微量补体结合试验的方法改进和应用

[目的]补体结合试验是布鲁氏菌病(简称"布病")血清学确诊方法.现行国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T 18646-2018)中收录的补体结合试验分为常量法补体结合试验(CFT)和微量法补体结合试验(mCFT),但两者之间的相关技术参数和结果判定标准均存在差异,导致常量法CFT和mCFT检测结果不一致.笔者通...     

用眼試驗和皮内試驗綜合診断乳牛結核病

大家都知道,皮内試驗是牛結核菌素接种的主要办法。A.H.馬卡維依斯卡婭(1953年)的研究确定,皮内試驗对成年結核病牛可檢出90%,犢牛为99%。根据М.К.尤斯科維茨的資料(1953年)證明,皮内試驗与剖檢結果有84%-97%是相符合的。眼試驗也是很敏感的,但不及皮内試驗,特别是在幼畜方面。根据A.H.馬卡維依斯卡婭的資料,只有78%的成年牛和35%的犢牛呈現眼反应。在М.К.尤斯科維茨的試驗中,約有36%的結核病犢牛对眼試驗不呈現反应,但是对結核菌素皮内注射却呈現阳性反应。虽然皮内試驗是檢出牛結核病的最可靠的方法,但是它仍有自己的缺点。已經查明,消瘦的結核病牛以及帶有活动性結核过程的牛只对皮内試驗呈現微弱的反应。同时,这样的动物对眼試驗产生一般的变态反应。     

金黄色葡萄球菌β溶血素研究进展

金黄色葡萄球菌β溶血素是一种具有磷脂酶C活性的外毒素,具有白细胞毒性、溶血活性等特征,并且对奶牛乳房炎也具有一定的致病性。因此,β溶血素在免疫预防和细胞生物学领域的研究具有很大的价值。对其理化性质与细胞膜作用机制进行介绍,对其毒力、致病性等最新研究进展进行综述。     

副溶血弧菌耐热性直接溶血素的研究进展

副溶血孤菌是存在于海洋水体及海洋生物的致病菌,同时也是引发人食物中毒的重要因素之一.其主要的致病因子是溶血素,其中耐热性溶血素被认为是致病性副溶血弧菌的主要毒力因子.本文就副溶血孤菌耐热性直接溶血素的研究进展作一综述.     

牦牛布氏桿菌病若干诊断方法的综合比较试验

关于牛只布氏桿菌病的診断問題,国內目前一股应用凝集反应,但此反应的主要缺点是不能检出处于布氏桿菌病不同病程中的病畜,因此其診断价值往往受到限制。国外学者,特別是苏联学者主张将疑集反应、补体结合反应及变态反应綜合应用,以求发現处于各个病程发展阶段中的病畜,提高检出率。1959年上半年,作者等曾应用变态     

南陵县农民培养地力的經驗

我县广大农民在长期的生产实践中,积累了充分用地、积极养地、养用結合的丰富經驗。凡是遵循这些经驗的地方,土地越种越肥,产量逐年提高,但也有部份社、队没有根据当地的水、肥和劳畜力的实际状况,过分地提高了复种指数,打乱了一些合理的輪作換茬制度,结果“事与愿违”。因此,恢复和提高土地肥力,使用地与养地正确地結合起来,是当前、也是今后值得重视的間题。为此,我們于1962年初步地总結了一下本县农民用地与养地相結合的經驗,現分述如下:     

欧鳗源嗜水气单胞菌β-溶血素基因序列分析

对克隆的欧鳗源嗜水气单胞菌β一溶血素基因AHL316HEM进行序列和结构分析表明，AHL316HEM基因读码框架全长为1482bp，编码长度为493个氨基酸的蛋白，分子量为54．2kD，等电点为5．625，读码框架内有一个EcoRI酶切位点。AHL316HEM从起始位点至第23个氨基酸残基形成一明显疏水区，可能构成信号肽，其抗原位点大部分都在亲水区，不具穿膜性。同源性分析表明，AHL316HEM基因编码的氨基酸序列与已报道的嗜水气单胞菌溶血素基因(accessionNo．BAA83088)的同源率为98％，与斑点气单胞菌溶血素基因(accessionNo．U40711)、温和气单胞菌溶血素基因(accessionNo．AF443393)的同源串分别为84％和72％，与霍乱弧菌溶血素基因(accessionNo．AF540655)、副溶血弧菌溶血素基因(accessionNo．VIBTRH2A)、金黄葡萄球菌β—溶血素基因(accessionNo．S72497)的同源性分别为7％、5％和4％。这一结果提示，气单胞菌属内各菌种的溶血素基因可能有共同的起源。