不同黄芩成分对孕鼠免疫功能的影响

怀孕5～7d小鼠皮下注射0．075mg溴隐亭建立流产模型，于怀孕1～7d分别灌服蒸馏水、黄芩煎剂、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素，至怀孕10d宰杀。结果显示，血清中IFN-γ含量，以黄芩煎剂组为最低，子宫匀浆中IFN-γ含量，以黄芩苷组为最低，与对照组比较差异极显著（P〈0．01）；孕酮含量在血清及子宫匀浆中均以黄芩苷组为最高，与对照组差异显著（P〈0．05），各组间IL-10含量差异不显著。这一结果表明，黄芩成分对母体免疫功能有一定调节作用，其中黄芩苷可降低Th1型细胞因子含量，提高孕酮的含量，具有一定的保胎作用。     

黄芩苷、连翘酯苷对肺微血管内皮细胞分泌IFN-α、IFN-γ的影响

为了研究黄芩苷、连翘酯苷对大鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs）分泌IFN-α、IFN-γ的影响,本试验以体外培养的PMVECs为模型,用ELISA法检测这2种中药成分在不同浓度、不同时间点诱导PMVECs分泌IFN-α和IFN-γ的量。结果表明,黄芩苷在10 μg/mL,24 h时诱导PMVECs分泌的IFN-α和IFN-γ的量均最高,连翘酯苷分别在20 μg/mL、12 h时和5 μg/mL、24 h时诱导PMVECs分泌的IFN-α和IFN-γ的量最高。这一结果为体外筛选诱导PMVECs表达干扰素的中药成分提供了参考,为进一步研究中药成分的抗病毒机理奠定了基础。     

黄芩及其成分对RU486诱导小鼠流产的保胎作用及脾脏CD80+、CD86+细胞数量的影响

为了研究共刺激分子CD80(B7-1)、CD86(B7-2)在流产发生机制中的意义,探讨中药黄芩及其成分的安胎作用及机理,本试验用米非司酮(RU486)皮下注射(每鼠90μg)诱导BALB/c小鼠流产,流式细胞仪测定脾脏中CD80 、CD86 细胞的数量。发现RU486诱导流产的小鼠脾脏中CD80 细胞显著升高,CD86 细胞显著减少。预先经口给予保胎中药黄芩及其单体成分黄芩苷和黄芩素,则能显著抑制RU486的流产作用,使母鼠胚胎吸收率降低,脾脏中CD80 细胞数量显著降低,CD86 细胞数量显著升高。这些结果表明,RU486诱导流产与机体共刺激分子CD80 、CD86 有关。保胎中药黄芩及单体成分有调节共刺激分子CD80 、CD86 细胞数量的作用。     

黄芩苷对小鼠四氯化碳肝损伤保护作用的研究

探讨了黄芩苷对小鼠急性肝损伤的保护作用。将50只小鼠随机分成5组:对照组、模型组和黄芩苷低、中、高剂量组。黄芩苷组皮下注射不同剂量的黄芩苷注射液,用四氯化碳致小鼠急性肝损伤,观察小鼠采食量和饮水量、肝指数、血清及肝脏中谷丙转氨酶(ALT)活性和总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)含量。结果表明,黄芩苷各剂量组小鼠血清中ALT活性较模型组均明显降低(P<0.01),肝脏ALT活性较模型组均明显升高(P<0.01);其他指标差异不显著。结论:小鼠皮下注射黄芩苷对四氯化碳致肝损伤有一定的保护作用,且以中剂量为佳。     

黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

氧化应激是阻碍胚胎体外发育的重要因素之一,减少氧化应激可能是提高胚胎体外培养效果的途径。本文探讨了不同浓度黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,为体外抗氧化性研究及抗氧化物选择提供参考。试验选择4～6周龄雌性昆明小鼠获取GV期卵母细胞,在体外成熟培养液中分别添加不同浓度(0、20、40、60μmol/L)的黄芩苷,经37℃、5%CO₂、饱和湿度培养条件体外成熟12 h,统计卵母细胞第一极体排出率,检测卵母细胞胞质内活性氧(ROS)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及培养液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC),并采集8～10周龄雄性昆明小鼠精液,进行体外受精(IVF),分别于受精后6、24、96 h统计受精率、卵裂率和囊胚率。结果表明：体外成熟液中添加40、60μmol/L黄芩苷后,卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),且浓度为40μmol/L极体排出率显著高于60μmol/L,但对成熟后的卵母细胞体外受精率、卵裂率、囊胚率无显著性影响(P>0.05),卵母细胞胞质RO...     

PRRSV特异性肽-N对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓细胞因子分泌的影响

本试验探讨PRRSV特异性肽-N对CSFV弱毒疫苗免疫猪骨髓细胞因子分泌量的影响。选择已免疫CSFV弱毒疫苗的猪为实验动物,提取四肢长骨骨髓,进行T淋巴细胞的分离培养。分别在培养后的24、72 h,用PRRSV特异性肽N1、N2对所培养细胞进行刺激,再进行培养12 h,经离心方法得到细胞上清液,最终检测上清液中细胞因子IFN-γ、IL-12、IL-10的分泌含量变化。结果显示,PRRSV特异性肽-N对于免疫猪骨髓中IFN-γ的分泌影响较小,能够抑制IL-12的分泌,不利于机体免疫反应,对IL-10的分泌影响复杂,需进一步研究。     

黄芩苷抗病毒作用研究进展

黄芩苷是从黄芪的干燥根中提取的黄酮类化合物。黄芩苷具有抗炎,抗高血压,利尿,解热和抗氧化清除作用,并具有醛糖还原酶抑制作用。它对免疫,消化和神经系统具有保护作用。它具有很强的抗病毒,抗过敏和抗肿瘤作用,表明黄芩苷的抗病毒作用具有一定的潜力。     

黄芩苷对黏菌素致小鼠周围神经毒性的保护作用研究

黏菌素的神经毒性是众所周知的。中药黄芩苷具有抗氧化、保护神经等作用。本试验通过设定正常组(生理盐水)、模型组(静脉注射15 mg/kg体重黏菌素)、黄芩苷高剂量组(200 mg/kg体重黄芩苷+15 mg/kg黏菌素)、黄芩苷中剂量组(100 mg/kg体重黄芩苷+15 mg/kg体重黏菌素)和黄芩苷低剂量组(50 mg/kg体重黄芩苷+15 mg/kg体重黏菌素)共5个剂量组,连续给药7 d后,进行氧化-抗氧化相关生化指标测定(MDA、SOD、CAT和GSH)、坐骨神经组织中凋亡相关因子表达(Caspase3和Bax)及碱性髓鞘蛋白(myelin basic protein,Mbp)表达的测定。结果表明,黄芩苷干预组的小鼠氧化指标明显降低,提高小鼠的抗氧化能力;Caspase3和Bax以及Mbp蛋白表达量均有降低。     

黄芩白术与PXF对LPS诱导流产小鼠的保胎作用及子宫内IL-10含量的变化研究

胚胎在发育过程中会表达父体抗原。这种带有一半同种异体抗原的胎儿并不被母体免疫系统所排斥。这不仅是由于胎盘屏障的保护作用，更重要的是母体胎儿界面产生的免疫调节因子有保护胎儿的作用[1]。尽管如此，妊娠并不象人们所期望的那样一帆风顺。哺乳动物已着床的胚胎发育到正常分娩，约有40％～60％会发生胚胎丢失，其中2／3(约67％)发生在妊娠早期[2]。生殖免疫学观点认为，这些胚胎丢失或流产与妊娠母体Th1细胞因子反应增强有关[3]。Th1细胞因子反应以细胞免疫功能增强，产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)等细胞因子为特征，     

梅山猪血液细胞因子水平的测定与分析

试验利用猪多细胞因子检测试剂盒（ProcartaImmunoassayKits）对35日龄梅山猪血液中部分重要细胞因子（IFN-α IFN-γ IL-2 IL-6 IL-10 IL-12）水平进行测定,分析梅山猪各细胞因子水平间的相互关系,并比较梅山猪和大白猪之间部分重要细胞因子水平的差异。结果表明：健康状态下梅山猪血液中IFN-α、IL-2的水平较高,而IFN-γ,IL-6、IL-10及IL-12水平相对较低;IL-2、IL-6、IL-10水平之间显著相关,存在密切的联系;梅山猪IL-10水平极显著高于大白猪（P〈0．01）,而IL-6水平极显著低于大白猪（P〈0．01）。试验结果初步解释了地方品种梅山猪与引进品种大白猪抗病力差异的免疫学基础,并为今后梅山猪一般抗病力评价体系的建立和抗病育种工作提供一定的理论依据。     

Th1／Th2型细胞因子的动态变化对山羊妊娠的影响

为了研究Thl/Th2型细胞因子的动态变化对山羊妊娠的影响,探讨其生理学意义,试验通过ELISA方法对山羊妊娠早期及流产前后外周血液中Thl(TNF-α、IL-2)与Th2(IL-10)型细胞因子的含量进行了检测.结果表明:妊娠早期外周血液中TNF-α和IL-2含量先升高后降低,IL-10量持续上升;流产后TNF-α和IL-2含量高于流产前含量(P<0.01或P<0.05),IL-10则低于流产前含量(P<0.05或P<0.01).说明山羊正常妊娠时Th1/Th2型细胞因子动态平衡应当是以Th2型免疫及其相关因子占优势,平衡失调则导致妊娠失败.     

Th1/Th2型细胞因子的动态变化对山羊妊娠的影响

为了研究Th1/Th2型细胞因子的动态变化对山羊妊娠的影响,探讨其生理学意义,试验通过EUSA方法对山羊妊娠早期及流产前后外周血液中Th1(TNF-α、IL-2)与Th2(IL-10)型细胞因子的含量进行了检测.结果表明:妊娠早期外周血液中TNF-α和IL-2含量先升高后降低,IL-10含量持续上升;流产后TNF-α和IL-2含量高于流产前含量(P＜0.01或P＜0.05),IL-10则低于流产前含量(P＜0.05或P＜0.01).说明山羊正常妊娠时Th1/Th2型细胞因子动态平衡应当是以Th2型免疫及其相关因子占优势,平衡失调则导致妊娠失败.     

牛磺鹅去氧胆酸对小鼠脾脏中白介素-2基因表达的影响

探讨牛磺鹅去氧胆酸（taurochenodeoxycholic acid, TCDCA）的抗炎和免疫调节作用机理。采用实时定量RT-PCR技术检测正常小鼠和免疫抑制模型小鼠脾脏内白介素-2（IL-2）基因mRNA水平表达量的变化。高剂量TCDCA组（0.2 g/kg体重）和低剂量TCDCA组（0.1 g/kg体重）小鼠脾脏组织内IL-2基因mRNA水平的表达量极显著地高于蒸馏水组（P<0.01）;免疫抑制模型高剂量TCDCA和低剂量TCDCA组的小鼠脾脏组织内IL-2基因mRNA水平的表达量均极显著（P<0.01）高于免疫抑制模型,且免疫抑制模型低剂量TCDCA组显著（P<0.05）高于蒸馏水组。TCDCA的抗炎和免疫调节作用与其提高IL-2基因mRNA水平的表达量有关。     

黄芩苷对BALB/c小鼠无乳链球菌性乳腺炎治疗作用的研究

在建立小鼠乳腺炎标准动物模型的基础上,通过细菌计数、HE染色、酶联免疫吸附试验等方法研究了乳腺炎模型中无乳链球菌感染诱发的乳腺免疫反应,并在此基础上研究黄芩苷对乳腺炎的治疗效果。结果表明,模型组母鼠乳腺内的无乳链球菌在攻菌后24h达到峰值,随后逐渐下降。模型组乳腺组织在攻菌后12h出现明显脂肪变性,并随感染时间延长有加重趋势。模型组IFN-γ水平在攻菌后72h达到峰值,和生理盐水组相比差异极显著（P〈0.01）;模型组IL-4水平在攻菌后48h达到峰值后逐渐下降。IL-4水平急剧升高可能是促使乳腺急性炎症的主要原因之一。治疗组乳腺内细菌数在攻菌后24h、48h极显著低于模型组（P〈0.01）,此后治疗组细菌数逐渐下降,乳腺炎症明显减轻,全身症状逐渐缓解;治疗组IFN-γ水平在感染后48h、72h极显著高于模型组（P〈0.01）;治疗组IL-4水平在感染后24h、48h极显著低于模型组（P〈0.01）;由此可推断,黄芩苷能够抑制无乳链球菌在体内增殖来降低乳腺感染程度,并通过调节Th1/Th2平衡来减轻乳腺局部的炎症表现,说明黄芩苷对试验性小鼠乳腺炎有良好的治疗作用。     

PRRSV特异性肽对CSF、PRRS免疫猪IFN-Y、IL-10分泌的影晌

应用PRRSV-GP5特异性肽刺激CSF、PRRS免疫猪外周血淋巴细胞,采用EI。IsA方法测定不同时间点淋巴细胞分泌IFN-7及IL-10的水平,分析PRRSv_GP5特异性肽刺激后,淋巴细胞培养上清中细胞因子的变化规律。结果显示,CSFV高抗PRRSV低抗体组于PRRSV免疫14d,肽刺激组中IFN-7水平显著高于对照组（P〈0．05）;其他组均差异不显著（P〉0．05）。PRRSV免疫14d,细胞培养24,72h后加PRRSV—GP5肽刺激,各组中试验组与对照组相比IL-10水平明显降低（P〈0．01）;PRRSV免疫28d,各组中肽刺激组与空白组相比,IL-10水平均无显著性差异（P〉0．05）。结果表明,PRRSV-GP5肽在PRRSV免疫早期可以促进IFN-7的分泌,并抑制IL-10的产生,但在免疫后期对淋巴细胞分泌的调节作用还需进-步研究。     

向日葵茎芯多糖的提取及其对鸡血清白介素-2含量的影响

本文旨在研究向日葵茎芯多糖(HAP)的提取工艺,向日葵茎芯原粉及HAP对鸡血清白介素-2(IL-2)含量的影响.采用索氏提取法从向日葵茎芯中提取多精,选用1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡100只,按试验要求随机分为4组,每组5个重复,每个重复5只鸡.Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组饲喂基础饲粮,Ⅰ组在基础饲粮中添加600 mg/kg的向日葵茎芯原粉,Ⅲ组在肉仔鸡14日龄时颈部皮下连续7 d每天注射提取的多糖0.2 mL/只,Ⅳ组注射相同剂量的生理盐水作为Ⅲ组的对照.在21日龄时从每组鸡中随机抽取12只,翅静脉采血,分离血清,用鸡IL-2酶联免疫试剂盒检测血清IL-2含量.结果表明,向日葵茎芯多糖含量为5.341 6%;在基础饲粮中添加600 mg/kg的向日葵茎芯原粉可显著提高肉仔鸡血清中的IL-2含量(P<0.05);对肉仔鸡颈部皮下每天注射0.2 mL/只的HAP连续7 d后,血清中的IL-2含量有所提高,但差异不显著(P>0.05).结果提示,饲粮中添加一定浓度的向日葵茎芯原粉可诱导机体产生IL-2.     

中药复方对热应激下猪肠道组织IL-2 IL-10和黏液IgA含量影响

随着我国畜禽集约化养殖业的不断发展,应激性疾病,尤其是热应激已经成为我国养殖业中的重要疾病之一[1]。动物胃肠道不仅是消化、吸收营养物质的场所,也是动物体内免疫器官[2]之一,即肠壁内有大量的淋巴组织如上皮内淋巴细胞(iIEL)、固有层淋巴细胞(LPL)和Peyer's淋巴小结等,且     

Effect of hay dust extract and cyathostomin antigen stimulation on cytokine expression by PBMC in horses with recurrent airway obstruction

Equine recurrent airway obstruction (RAO) is an inflammatory, obstructive airway disease induced by exposure of susceptible horses to inhaled organic dust particles. The immunological process underlying RAO is still unclear. Previous studies have shown that RAO is linked to the Interleukin-4 receptor (IL-4R) gene in one Warmblood family (F1), but not in another (F2). It has also been shown that in F1, but not in F2, RAO is associated with resistance against parasites, suggesting that this association may have an immuno-genetic basis. Therefore, we hypothesized that the T helper (h)1/Th2/regulatory (Treg) cytokine profiles of RAO-associated antigen- and parasite-antigen-stimulated peripheral blood mononuclear cells (PBMC) differ between RAO-affected and healthy horses depending on their genetic background. In our study, PBMC from 17 RAO-affected and 14 healthy control horses of F1 and F2 were stimulated for 24 h with antigens relevant to RAO [hay dust extract (HDE), Aspergillus fumigatus extract (AFE) and lipopolysaccharids (LPS)]; cyathostomin extract (CE) and recombinant cyathostomin antigen (RCA) or with concanavalin A (ConA). Total mRNA levels of IL-4, IL-4R, IL-13, interferon (INF)-γ and IL-10 were examined by qRT-PCR. Stimulation with either HDE or RCA resulted in significant differences in IL-4R mRNA levels between RAO-affected and control horses in F1, but not in F2. For IL-10 mRNA expression, a significant difference between RAO-affected and control horses in F1 but not in F2 was observed only following stimulation with HDE. In contrast to HDE, stimulation with CE resulted in a significant difference of IL-10 mRNA expression level between RAO-affected horses of F2 and healthy horses of F1. No significant differences were detected upon stimulation with any of the other challenge agents. These findings indicate that the immunological response, specifically IL-4R expression, in response to hay dust and cyathostomin antigens, differs between RAO-affected and healthy horses depending on their genetic background. This study shows that analysis of PBMC reveals systemic changes associated with RAO and helps to elucidate immunological pathways involved in this disease.     

GnIH过表达载体构建及其对小鼠睾丸间质细胞的作用研究

本试验通过构建GnIH过表达载体,探究其对小鼠睾丸间质细胞（TM3细胞系）的凋亡效应及睾酮合成的调节作用。从6~8周雄性小鼠睾丸组织中提取RNA,反转录获得cDNA样本,利用PCR扩增并纯化GnIH基因,应用T4连接酶将其连入PLVX-IRES-ZsGreen1载体,进一步转化到感受态菌中,通过PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染TM3细胞系72 h,分为空质粒组和GnIH过表达组,通过显微镜观察细胞荧光、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法、ELISA法和流式细胞术检测GnIH表达水平、细胞凋亡率及相关凋亡基因表达变化、睾酮分泌水平和睾酮合成酶基因表达水平。结果显示,GnIH扩增片段序列与参考序列一致,将GnIH过表达质粒转染至TM3细胞系72 h后,可见高强度绿色荧光,过表达组中GnIH基因水平极显著升高（P<0.01）,表明GnIH过表达载体构建成功且在TM3细胞系中高表达。转染72 h后,与空质粒组相比,过表达组中细胞凋亡率极显著升高（P<0.01）,凋亡基因P53和Bax/Bcl-2表达量比值也极显著升高（P<0.01）。与空质粒组相比,过表达组中睾酮浓度极显著降低（P<0.01）。与此同时,睾酮合成相关酶基因P450 scc mRNA表达量极显著降低（P<0.01）,StAR、3β-HSD和P450c17 mRNA表达量显著降低（P<0.05）,17β-HSD mRNA表达量在两组间无显著性差异（P>0.05）。综上所述,在体外培养的TM3细胞中过表达GnIH能诱导TM3细胞凋亡、抑制睾酮分泌且降低睾酮合成相关酶的基因表达水平,推断GnIH在小鼠睾丸间质细胞生长和睾酮合成过程中发挥负调控作用。本研究可为揭示GnIH在雄性哺乳动物生殖调控过程中的作用提供科学理论依据。