苯巴比妥残留快速检测阻断ELISA试剂盒的研制及性能测定

苯巴比妥（Phenobarbital,PB）具有镇静、催眠等作用,在肉用畜禽生产中常被用作饲料添加剂,但PB存在神经、骨髓、致畸、致癌等毒性作用,其残留严重危害人们的身体健康,我国和世界上多数国家都严禁PB用作饲料添加剂.目前,国外已开发出PB残留检测的ELISA试剂盒,如德国DadeBehring公司等,国内尚未见报道.本研究应用杂交瘤技术在制备出PB单克隆抗体（mAb）基础上,成功研制出PB残留检测阻断EILSA试剂盒（PB-Kit）,并对其性能进行了测定,现报告如下.     

氯霉素残留ELISA检测方法

2002年农业部第235号公告《动物源性食品中兽药最高残留限量》中明确规定氯霉素禁止使用,在动物性食品中不得检出。所以建立检测动物源性食品中痕量氯霉素残留的分析方法具有重要的意义。目前常用于氯霉素残留的检测方法有微生物法、免疫分析方法、色谱法等,比较常用的是酶联免疫法和色谱法。酶联免役法（EUSA）因其具有操作简便、快速等优点,成为畜产品中农药残留、毒素、农药、微生物检测中最重要的检测技术之一。本文旨在建立畜产品中氯霉素残留的快速检测方法,并为进一步研制开发氯霉素残留检测试剂盒奠定基础。     

磺胺类药物在动物性食品中的残留与检测

磺胺类药物是一类广谱抗茵药,临床上主要用于预防和治疗细菌感染性疾病,还常作为饲料添加剂在动物生产中长期应用.然而,磺胺药会引起人过敏性反应,且可能有致癌性.因此,磺胺类药物的不合理使用,使其在动物性食品中残留引起生态环境污染和人类健康危害的潜在威胁已倍受关注.因此,研究出一种操作简便、快速、灵敏的磺胺类药物残留检测方法,对于畜产品的安全具有实际意义.酶联免疫吸附法(ELISA)作为一种免疫学检测技术不仅具有上述优点,而且准确性好、特异性强、检测成本低,还可用于大批量样品的检测.而单抗在试剂的标准化及抗体的大量供应上明显优于多抗,所以单克隆抗体技术的应用在药残检测上是主要的发展方向.     

单链抗体在小分子化学物质残留检测中的研究进展

兽药、农药及生物毒素等小分子化学物质在食品、饲料或水体中的过量残留对人、动物的健康及生态环境的平衡造成一定程度的危害,因此建立一种针对上述小分子化学物质残留的快速检测方法十分必要。以抗原抗体特异性结合为基础的免疫分析技术是残留检测的常用手段,该技术的关键是制备可用来检测特异性抗原的抗体。随着对抗体结构的解析及重组DNA技术的发展,单链抗体为小分子化学物质的残留检测提供了新的技术手段。单链抗体具有分子质量小、免疫原性低、可塑性强、可批量生产等优点,具有广阔的发展空间。近年来,以单链抗体为基础建立的酶联免疫吸附法检测小分子化学物质的残留检测成为最常用的分析工具,且单链抗体的筛选策略、表达策略、突变策略及与碱性磷酸酶形成的融合蛋白等进一步提高了抗体产量、灵敏度、广谱性,并使免疫分析方法简便化,从而推进单链抗体免疫分析方法在小分子化学物质残留检测的应用。作者综述了以单链抗体为基础的免疫分析方法在兽药、农药及生物毒素等小分子化学物质方面的研究进展,以期为小分子化学物质残留检测提供参考。     

动物源性食品中阿托品残留检测研究进展

阿托品(atropine)是兽医临床常用抗胆碱药物,超量及非法使用易造成其在动物源性食品中大量残留,从而影响消费者健康。为减少残留对消费者的危害,探究残留检测方法十分必要。本文从其主要检测方法——分光光度法、高效液相色谱法和仪器联用法入手,简述了各种方法的研究进展并总结出各自的特性。分光光度法灵敏度高、操作简便,可用于基层阿托品残留检测;高效液相色谱法和仪器联用法准确度与灵敏度高,但这两种方法使用仪器较多,对操作人员要求高,在基层检测中受到很大限制。因此,建立更加快速、操作简单、低成本的免疫学方法具有十分重要的意义。     

沙丁胺醇人工抗原的合成与鉴定

通过沙丁胺醇(SAL)与琥珀酸酐的醇解反应制备SAL的琥珀酸衍生物,用EDC法将SAL琥珀酸衍生物偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SAL和包被原OVA-SAL,用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SAL免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-SAL的UV与BSA、SAL的相比发生了改变;通过UV分析,SAL-HS与BSA的分子结合比约为7.2∶1;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为SAL残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

基于单抗的免疫分析方法及其在兽药残留检测中的应用

兽药残留检测是监督控制药物滥用的手段之一。免疫学技术基于抗原对抗体的特异性识别,具有灵敏度高、稳定性好、操作简单、快捷等优点被广泛应用于兽药残留检测。该方法的关键是要获得高质量的特异性抗体,因而单抗技术的应用与发展,对免疫分析方法的普及起了巨大推动作用。为此,本文针对单抗的制备以及基于单抗的免疫分析方法在兽药残留检测领域的应用进行简要综述。目前酶联免疫吸附法（ELISA）与胶体金免疫层析法（GICA）是应用最广泛的基于单抗的兽药残留检测方法,主要用于检测抗生素、化学合成抗菌药、激素类和β-受体激动剂类药物、镇静剂类药物,其操作简单,灵敏度高,但均需要对样品进行一定的前处理,实际操作中较易出现假阳性,反应时间长等问题。为提高检验的敏感度、稳定性、特异性、便捷性,正在研究新型的免疫分析技术,如结合采用表面增强拉曼光谱（SERS）技术和金标检测试纸（LFA）实现超灵敏检测,采用微流控免疫分析芯片技术联合ELISA实现高通量检测等。诸多研究将为基于单抗的免疫分析方法在兽药残留检测中的应用提供新思路。     

新霉素人工抗原的合成与鉴定

用水溶性碳化二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于栽体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(O-vA),合成免疫原BSA-NEO和包被原OVA-NEO,用红外扫描(IR)、SDS-PAGE法进行鉴定;用BSA-NEO免疫BALB/C小鼠,问接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性.结果表明,BSA-NEO的红外光谱与BSA相比发生了改变,BSA-NEO的电泳条带与BSA的相比出现了明显的拖尾现象;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为NEO残留免疫学检测方法的建立奠定了基础.     

聚醚类抗生素残留分析方法研究进展

聚醚类抗生素是从链霉菌中提取出来的离子载体类抗生素，包括莫能菌素（monensin，MON）、马杜霉素（maduramicin，MAD）、盐霉素（salinomycin，SAL）、拉沙菌素（lasalocid，LAS）等，具有较广的抗虫谱，对常见的鸡艾美耳球虫有抗虫活性，对反刍动物及猪有促生长作用。由于聚醚类抗生素的不规范使用，导致其在动物性食品中残留蓄积，引起人类健康问题，因此，要加大该类抗生素残留检测强度。聚醚类抗生素的残留分析方法主要包括分光光度法、微生物检测法、色谱法（薄层层析法、高效液相色谱、液相色谱-串联质谱法）及免疫学方法。文章总结了该类抗生素的残留分析方法，并对聚醚类抗生素残留检测技术未来的研究发展方向做出展望，以期为今后多残留检测聚醚类抗生素提供参考依据。     

多西环素人工抗原的合成与鉴定

将多西环素（doxycycline,DOX）进行化学修饰引入羧基或氨基等活性基团,然后与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联合成人工免疫原DOX—PABA—BSA、DOX—BSA和包被原DOX—PABA—OVA、DOX～OVA,并用紫外吸收（UV）、凝胶电泳（SDS—PAGE）和EUSA方法对人工抗原进行鉴定;将合成的人工抗原DOX—PABA—BSA、DOX—BSA分别免疫BALB／C小鼠,用间接ELISA方法测定多抗（pAb）效价,用竞争ELISA方法鉴定其敏感性,用交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,二个免疫组6只小鼠血清抗体效价均在1：6400以上,DOXpAb对DOX的50％抑制浓度（IC50）在39．79～53．13μg/L,抗血清与四环素类药物交叉反应很低。本实验为建立多西环素ELISA残留免疫学检测方法和并制备多西环素试剂盒奠定了基础。