大豆子叶节丛生芽的诱导

通过器官发生途径,由大豆子叶节诱导丛生芽。在相同的培养基和激素浓度条件下,不同基因型之间的诱导率相差很大,其中以“吉林30”、“吉林47”和“美引一号”的诱导率较高。不同的激素组合和水平,对大豆子叶节丛生芽的诱导率也不同,其中诱导培养基以MSB＋6－BA4mg/L IBA0.2mg/L及MSB＋6－BA2mg/L IBA0.2mg/L KT1mg/L效果较好。     

影响复合针介导的大豆子叶节遗传转化的主要因素的研究

以萌动1d的半片大豆种子为试验材料,用复合针针刺2次,农杆菌LBA4404/pCAMBIA1201侵染,共培养3d,GUS染色检测瞬时表达效率。结果表明:不同基因型和乙酰丁香酮(As)浓度对转化效率有显著影响,As浓度为100或200μmol/L时,转化效率显著提高,其中以合丰25的转化效率最高,平均为8.6个蓝色斑点;农杆菌的侵染时间以30 min为宜;农杆菌的侵染浓度以OD600为0.6时最佳,平均为9.8个蓝色斑点。     

农杆菌介导的大豆胚尖遗传转化体系中基因型的选择及抑菌条件的优化

大豆基因型对农杆菌介导大豆胚尖遗传转化体系的转化效率有很大影响,同时有效地抑制农杆菌是该体系的重要环节。研究选择3个东北地区主栽的大豆品种,以胚尖为外植体进行农杆菌介导的遗传转化,比较3个大豆品种的诱导率、伸长率和生根率,并在芽诱导、伸长及生根阶段采用不同的抗生素浓度配比,优化抑菌条件。实验结果表明3个品种中,黑农37为最佳受体品种;抗生素浓度对大豆胚尖遗传转化有很大影响。在芽诱导和伸长阶段添加头孢霉素300mg/L+羧苄青霉素150mg/L抑菌效果较好;而在生根过程中,不添加抗生素为最佳条件。     

大豆胚芽尖再生体系的建立及转基因初步研究

建立了吉林小粒1号的胚芽尖再生体系.对胚芽尖、子叶节、胚轴作为外植体的重生芽发生频率及主要影响因素进行了比较.结果表明,胚芽尖重生芽发生频率高,再生时间短,对卡那霉素敏感,合适的筛选浓度为100mg·L-1.以吉林小粒1号胚芽尖为外植体,将植物表达载体w10通过农杆菌(LBA4404)导入吉林小粒1号,在农杆菌中孵育6h,筛选培养基上重生芽发生频率高,成功获得了再生植株.     

大豆子叶节遗传转化受体体系的优化

以大豆品种JN18、JN28、JN54为试验材料,通过正交试验设计,对种子萌发以及子叶节不定芽诱导阶段的影响因素进行探究,以期对大豆的遗传转化受体体系进行优化.结果 表明:选择大豆品种JN28经次氯酸钠溶液灭菌10 min,接种于0.2 mg/L 6-BA的MS萌发培养基(pH 6)为大豆种子萌发的最优条件,大豆子叶节不定芽诱导的最佳条件是,将萌发5d的种子接种于MS+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA培养基上进行培养.根据得到的最优条件,利用农杆菌介导法对大豆品种JN28进行遗传转化,获得的T0代大豆转化植株,PCR阳性转化率达到5.56％.研究为大豆基因功能的鉴定及自主知识产权的转基因大豆新品系的获得奠定了基础.     

影响农杆菌介导大豆遗传转化的因素

以大豆子叶节为外植体,采用农杆菌介导的遗传转化方法,探讨农杆菌菌液浓度、侵染时间、抗氧化剂、表面活性剂Silwet L-77及草丁膦(PPT)筛选浓度等因素对大豆转化效率的影响。结果表明:适合大豆转化的农杆菌菌液浓度D600nm为0.8,子叶节外植体侵染时间以30min为宜,外植体侵染后在含有25mg·L-1LA共培养基中暗培养3d有利于提高转化效率。此外,PPT筛选的适宜浓度为5mg·L-1。根据大豆子叶节农杆菌转化特点,研究中采用了延迟筛选的方法。     

遗传转化中诱导蓖麻子叶节分化适宜的PGR条件

以通蓖5号蓖麻子叶节为试材,应用组织培养技术以及不同质量浓度的ZT和NAA,IAA,IBA处理农杆菌浸染后的子叶节,以期寻找其共培养后诱导芽及根适宜的PGR质量浓度配比,建立蓖麻遗传转化中的快繁体系。结果表明,当ZT质量浓度为2.0 mg/L时,最适合蓖麻子叶节芽诱导;IBA为最适根诱导剂,最适质量浓度为0.10 mg/L。     

大豆胚尖再生体系的研究

为建立良好的大豆遗传转化受体系统,本研究以河北省8个优质大豆品种为材料,探讨了激素种类、浓度、诱导时间等因素对胚尖生长过程的影响,并对胚尖再生体系与传统的子叶节再生体系进行了比较。结果表明:经0.5～1.0 mg/L 6-BA诱导5d大豆的胚尖出芽率、植株再生率及胚尖丛生芽数等综合指标较好,植株再生率最高达84.1%。胚尖再生体系与子叶节再生体系的比较表明:以胚尖为外植体的大豆再生体系具有再生率高、操作简便、周期短、重复性好的优点。     

影响大豆子叶节再生的因素研究

以大豆品种北京小黑豆的成熟种子为材料,研究了不同消毒方法、激素配比、外植体以及芽诱导时间对再生频率的影响。结果表明,使用氯气消毒法,以大豆子叶节为外植体,在B5+1.0 mg.L-1 6-BA的诱导培养基上诱导5 d后,北京小黑豆能获得较高的植株再生率,每个外植体成苗数在3个左右。     

农杆菌介导大豆遗传转化优化的初步研究

利用农杆菌对大豆成熟种子子叶节进行转化,探究了不同种植物提取物、植物提取物浓度、大豆基因型、萌发天数以及共培养天数对提高农杆菌遗传转化效率的影响。结果表明:含有植物提取物的共培养菌液侵染子叶节均能够明显提高抗性芽的再生率,但不同基因型的大豆所需的最适提取物浓度不同,‘豫豆22’最适浓度为7mL/L,‘中黄42’最适浓度为14mL/L;‘豫豆22’是本研究中最适宜转化的大豆基因型;萌发5d的大豆子叶节转化率最高;共培养10d获得阳性转化植株率最高。     

农杆菌介导薄皮甜瓜遗传转化体系建立

以薄皮甜瓜"M15"和"M43"子叶节为外植体,研究激素浓度、卡那霉素浓度和消毒时间等对甜瓜子叶节再生及农杆菌介导遗传转化的影响。结果表明,诱导甜瓜子叶节不定芽分化最佳激素组合为0.5 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)IAA,芽伸长激素为0.05 mg·L~(-1)6-BA,生根激素为0.1 mg·L~(-1)IAA。农杆菌介导甜瓜转化最佳条件为预培养48 h,OD_(600)=0.6农杆菌菌液侵染15 min,黑暗条件下共培养48～72 h,头孢抑菌浓度500 mg·L~(-1),卡那霉素浓度75 mg·L~(-1)。PCR检测卡那霉素抗性苗,验证外源基因已整合进入甜瓜基因组,"M15"和"M43"抗性植株阳性率分别为84.2%和77.4%。     

6-BA诱导大豆子叶节和茎尖出芽的研究

以大豆品种“合丰35”的成熟种子为材料,研究6-BA诱导子叶节和茎尖出芽的结果表明,大豆萌发和不定芽诱导时分别加入0.4mg·L-1和1.1mg·L-16-BA,每个外植体分化出的芽数最多为3.56;茎尖再生系统中,6-BA诱导茎尖不定芽形成的最佳浓度是3.5mg·L-1,最佳诱导时间是24～28h左右,平均每个外植体分化出的不定芽数为2.78。     

不同大豆品种对农杆菌EHA105和GV3101敏感性及共培养条件的优化

不同的大豆品种对于农杆菌的敏感性不同,易感型的品种更有利于转化的进行。为了进一步优化大豆转化体系,实验利用农杆菌菌株EHA105、GV3101对东农50等10个大豆栽培品种进行敏感性测定。同时对2个易感性品种,东农50、中豆32共培养中添加光照处理,统计GUS染色率。结果表明,农杆菌GV3101的侵染能力较强,10个品种的平均GUS染色率达到66.7%,远远高于EHA105的平均值(38.4%);2个菌株对中豆32和东农50进行侵染,GUS染色率平均达到69.93%和73.62%,其他品种的GUS平均染色率显著低于东农50和中豆32;但个别品种对2个菌株的敏感性差异显著,在大豆遗传转化中对于品种和菌株的选择具有重要的意义。农杆菌的侵染时间为30~60min时效果较好;在共培养阶段进行光照处理有利于提高转化率。     

大豆农杆菌子叶节转化菌株适宜生长时期及浸染浓度的研究

在大豆子叶节转化过程中,农杆菌侵染受体材料受多种因素的影响。文章对农杆菌侵染受体的菌株生长时期和浸染浓度进行了探讨。结果表明,菌株生长时期OD600=0.6和菌液的浸染浓度为OD600=0.5时,子叶节抗性芽率最高,利用此结果筛选出对农杆菌具有高度的易感性大豆品种3个,为大豆转化效率的提高奠定了基础。     

大豆子叶节再生体系的优化与农杆菌转化的研究

以大豆子叶节为外植体,采用农杆菌介导法将目的基因Cry1Ac导入大豆中。结果表明,卡那霉素抗性植株经PCR检测,初步证明外源基因Cry1Ac已经整合到大豆基因组中,并从灭菌方法、6-BA对出芽率的影响、大豆基因型、卡那霉素筛选方式及选择压力等方面优化了大豆植株再生体系。     

根癌农杆菌介导的苦瓜遗传转化

用含质粒载体pB I121的根癌农杆菌转化“南屿”苦瓜子叶节,通过对gus基因瞬时表达情况进行观测,对根癌农杆菌介导的苦瓜遗传转化体系相关因素进行研究.结果表明,苦瓜子叶节必须预培养3 d左右,用D600nm值为0.3-0.5之间的菌液浸泡,侵染时间为10 min,然后共培养3-4 d.再生植株经PCR检测初步证明gus基因已成功整合到苦瓜基因组中.     

优化农杆菌介导的月季遗传转化系统的研究

为了建立月季品种‘萨蔓莎’根癌农杆菌介导的遗传转化系统，我们通过衡量GUS基因瞬间表达水平，探讨了各因子对基因转化的影响.结果表明:外植体、光照条件、共培养培养基中无机盐含量及乙酰丁香酮（AS）含量是重要的影响因子；共培养时间、共培养温度及农杆菌菌液浓度对根癌农杆菌的生长以至基因转化有重要影响.优化后的转化条件为:将月季胚性愈伤组织与OD６００值为0.5～0.8的农杆菌菌液侵染20min，然后在含300μmol/L AS并且无机盐减半的MS培养基上黑暗、23℃条件下共培养3d.      

Effect of 6-BA and 2, 4-D on Soybean Transformation

Regeneration from cotyledonary nodes and embryonic tips of soybean "Peking" was studied. The disinfectant ways of the mercuric chloride and chlorine gas were used and the concentrations of 6-BA and 2, 4-D were studied in the culture medium. The results showed that the sterilization effect of chlorine gas was better than that of mercuric chloride. The best concentration of 6-BA was 1.0 mg · L-1 and the best concentration of 2, 4-D was 2.0 mg · L-1 in the germinating medium. The number of buds of each explant was 3.56 and 2.98, respectively. The best concentrations of 6-BA and 2, 4-D were 3.0 mg·L-1 and 3.5 mg·L-1 in regeneration of embryonic tips. The best inducing time was 16-20 h and the mean shoots per explant was 2.69 and 2.78, respectively.