化学发光酶免疫法检测盐酸克伦特罗残留

优化了化学发光酶免疫法(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)检测盐酸克伦特罗(clenbuterol)的方法.论文对检测方法的反应时间、温度、缓冲体系的pH值、离子强度、Tween-20的浓度等参数进行了优化,该方法的线性检测范围可达到0.04～42.5 μg·L-4,IC50值为1.46 μg·L-1,理论检测限为0.0014 μg·L-1.批内批间变异系数均小于10%,回收率在95%～110%之间,同时有较高的特异性.优化后的检测方法完全符合盐酸克伦特罗残留检测的要求.     

克伦特罗残留检测试剂盒条件的优化及其应用

以CL-OVA为包被抗原,抗克伦特罗单克隆抗体为一抗,组建检测克伦特罗的竞争EL ISA试剂盒。以方阵滴定确定包被抗原最佳浓度(0.72μg.孔-1),抗克伦特罗单克隆抗体(2F12)最佳稀释度(1∶2 000),并建立EL ISA标准曲线,确定最小检测量为0.25 ng.mL-1。用该方法检测动物模型仔猪尿样中的盐酸克伦特罗,结果表明:停药后第1~7天尿样均为阳性,2周后有少量猪仍为阳性,而阴性对照猪尿样均为阴性。这表明建立的试剂盒对克伦特罗残留的检测具有广阔的应用前景。     

猪尿和猪肝中克伦特罗ELISA方法的建立及初步应用

以自制的单克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA条件,建立标准曲线y=- 24.778.306x+53.744,r2=0.993 4,线性范围为0.1 ～27 μg/L,IC50为1.8 μg/L(n=25),最低检测限(LOD)为0.1μg/L.尿液经叔丁基甲醚提取,回收率为68.24％～100.73％;肝脏用盐酸水解,加KH2PO4缓冲液(pH值3.0)提取,过C18柱净化,回收率为80.45％～98.45％;变异系数均小于20％,尿液和肝脏中的LOD为0.3μg/L、0.3 μg/kg.用该方法检测喂药动物尿液和肝脏中的克伦特罗残留,特异性良好,适用于猪尿和肝脏中克伦特罗残留筛选.     

四环素类药物多残留酶联免疫检测方法

 【目的】构建一种四环素类药物多残留酶联免疫检测试剂盒。【方法】将四环素类药物与载体蛋白相连作为抗原免疫动物,获得了抗四环素类药物的抗体,建立了动物性食品中四环素类药物残留的ELISA检测方法,并将该试剂盒的检测性能与进口试剂盒比较,对实际样品的测定结果与高效液相-串联质谱法比较。【结果】人工抗原中四环素与蛋白质分子的结合比约为15﹕1,血清效价达到1﹕2 000倍以上,50%抑制浓度(IC50)为3 μg?L-1左右,7种四环素类药物交叉反应率在58%～100%之间,牛奶和鸡肉中四环素类药物的检测限分别为6.6 μg?L-1和6.5 μg?kg-1, 在鸡肉中四环素、土霉素和金霉素的回收率在40%～120%之间。【结论】试剂盒的最低检测限为0.3 μg?L-1,检测范围为0.3～30 μg?L-1,可同时测定兽医常用的四环素、金霉素、土霉素和多西环素4种药物残留。灵敏度、精密度和准确度均能满足兽药残留检测要求。     

免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗

试验选取自身蛋白制备克盐酸伦特罗克伦特罗载体抗原,免疫动物后产生高效价的特异性抗体,纯化抗体与胶体金结合成免疫金,制备成简易的检测试纸条。通过检测试纸条敏感性、保存期、金标抗体工作浓度选择、操作方法对比、实验检测及与单抗金标试纸条平行检测等试验,证明建立的免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗具有实用性、可靠性和稳定性。自身全血清作载体可使抗盐酸克伦特罗的ELISA效价高达4万以上。免疫金试纸法对盐酸克伦特罗的最小检测量为40ng·mL-1,试纸条在室温保存150d不影响检测结果。实验检测86份ELISA试剂盒阴性样品和42份阳性样品,其符合率分别为100%和95.2%。市售单抗金标试纸条检测结果与ELISA法的阳性符合率为95%(19/20)。     

酶联免疫吸附法测定猪肉中的盐酸克伦特罗

本文介绍了酶联免疫吸附法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的方法.利用盐酸克伦特罗试剂盒对猪肉组织中残留的盐酸克伦特罗用酶标仪进行测定分析.该法操作简便快速,是保证肉品卫生安全较好的检测方法.     

免疫芯片法追溯检测克伦特罗用药史研究

以雄性皖浙花猪毛发、尿液为检测材料,以免疫芯片为检测手段,考察克伦特罗残留规律。结果表明,免疫芯片法检测动物毛发样品的检测限和定量限分别为0.15、0.50 ng/g,回归方程为:y=-0.391x3+12.576x2-141.88x+867.84,r2=0.999 4,线性范围为0.5~16.0 ng/g,回收率为65.2%~81.4%,休药期42 d仍能检测出毛发中克伦特罗残留。免疫芯片法检测动物尿液样品的检测限和定量限分别为0.20、0.60 ng/m L,回归方程为:y=-0.107 1x3+6.179 5x2-110.33x+839.37,r2=0.992 3,线性范围为0.6~16.0 ng/m L,回收率为61.5%~72.2%,休药期7 d基本不能检测出克伦特罗残留。免疫芯片法检测动物毛发克伦特罗残留快速、简单、准确,适合规模化检测,可用于克伦特罗用药史追溯性检测。     

动物性食品中4种药物残留的检测

为了解北京地区动物性食品中兽药残留情况,随机抽查北京京郊几家猪场、鸡场和商场,检测4种药物(盐酸克伦特罗、氯霉素、磺胺类、氯羟吡啶)的残留情况。盐酸克伦特罗检测采用酶联免疫法(ELISA),取206份猪肝、240份猪尿测定盐酸克伦特罗残留,阳性数分别为19、23,阳性率分别为9.22％、9.58％;氯霉素检测采用酶联免疫法,取150份鸡肝测定氯霉素残留,阳性数为15,阳性率为10.00％。磺胺类药物和氨羟吡啶检测采用高效液相色谱法(HPLC),取50份猪肝、50份鸡肝测定磺胺类药物残留,结果全为阴性;取100份鸡肝测定氯羟吡啶残留,结果全为阴性。检测结果不容乐观。     

酶联免疫法检测盐酸克伦特罗的试验报告

盐酸克伦特罗酶联免疫反应测试盒适用于尿样、组织和饲料等样品中克伦特罗残留的定量检测。克伦特罗作为一种主要的β-兴奋剂应用于畜禽肉制品生产中,用以提高肌肉和脂肪的比例并加快生长速度。由于克伦特罗可作为肌肉舒缓剂用于人类疾病治疗,在畜禽中过量残留可能会对消费者造成危害,为此,被禁止在食品生产中应用。根据美国FDA和WHO规定,在肌肉和脂肪中克伦特罗的含量不能超过0.2ng/g,在肝脏和肾脏中其含量不能超过0.6ng/g。与传统的HPLC或GC-MS方法相比,酶联免疫方法具有操作简便、灵敏度高、成本低的优点。盐酸克伦特罗酶朕免疫反应测试盒为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速检测克伦特罗残留的方法,该试剂盒的特点包括4方面,第一,该试剂盒的提取方法能达到75%～95%以上的回收率,可以不需用有机溶剂并在10～30min之内完成提取过程。第二,高灵敏度(0.05ng/g);低检测下限(肉类/脂肪0.025ng/g,尿液0.05ng/ml,饲料0.2μg/kg)。第三,检测过程只需不到2h。第四,高重复性。     

光学表面等离子共振测定盐酸克伦特罗的试验研究

为了实现高灵敏度定量检测盐酸克伦特罗,提出了一种新颖的、无标记、快速的内嵌TSPR1K23生物传感器的光学表面等离子共振(Surface plasmon resonance,SPR)盐酸克伦特罗测定方法,并通过试验验证了光学表面等离子共振生物测定装置的性能.光学表面等离子共振盐酸克伦特罗测定装置由集成光学SPR生物传感器、微流通池、便捷更换芯片的夹具、触电屏,USB接口板及光电转换电路板组成.在光学SPR芯片金膜表面固定盐酸克伦特罗抗原,在标准样品中(盐酸克伦特罗抗体质量浓度33.75 mg·L-1)分别添加0,10,20,40 mg·L-1的盐酸克伦特罗抗原,采用竞争免疫反应方法建立的盐酸克伦特罗测定标准曲线,相关系数0.997,相对标准偏差6.5%.     

盐酸氯苯胍灌服后在兔尿液和粪便中的排泄规律

【目的】建立氯苯胍在兔尿液和粪便中的高效液相色谱检测方法,以测定氯苯胍在兔排泄物中的排泄量.【方法】12只健康新西兰大白兔灌服盐酸氯苯胍15 mg·kg-1后,于不同时间间隔收集其所有粪便和尿液,粪便称质量、尿液定容后冻存.称取0.2 g粪便,用体积比为2∶1的三氯甲烷-甲醇混合液提取,氮气吹干;量取1 m L兔尿,用体积分数为0.2%乙酸酸化的乙酸乙酯提取,氮气吹干,残渣均用乙腈-水(体积比30∶70)溶液复溶,CNW HLB柱净化,浓缩后用甲醇定容,上机检测.【结果和结论】氯苯胍在兔尿中的检测限与定量限分别为0.005和0.01μg·m L-1,通过尿液排泄的氯苯胍占给药总量的比例为0.56%;在兔粪便中的检测限与定量限分别为0.01和0.05μg·g-1,通过粪便排泄的氯苯胍占给药总量的比例为87.17%.氯苯胍在兔尿和粪便中排出高峰期分别在给药后0~6和6~12 h,占给药后累积排泄总量的比例分别为28.37%和38.46%.结果显示,该检测方法满足测定氯苯胍在兔尿和粪便中排泄量的要求,内服盐酸氯苯胍后大部分氯苯胍随尿液和粪便排出体外.     

运用试剂盒法检测兽药残留

快速检测试剂盒已经普遍地应用在兽药残留监督检测中。这种方法速度快,可用于大量样品的筛选检测,阳性可疑样品再用HPLC或GC-MS确证,可以大大提高工作效率,降低检测成本。随着生产企业的不断研发,其检测样品的范围越来越广（鸡肉、鸡肝、猪肉、猪肝、肠衣、蜂蜜、牛奶、尿液、血清、虾、鱼、饲料等）,检测的药品品种也越来越多（盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、氯霉素、磺胺类等）。     

克仑特罗CLEIA试剂盒与ELISA试剂盒的比较分析

用研发的克仑特罗化学发光酶联免疫（CLEIA）试剂盒与克仑特罗酶联免疫（ELISA）试剂盒进行检测效果比对,结果显示,CLEIA试剂盒检测时间为33 min,而ELISA试剂盒则需要50 min,CLEIA试剂盒方法要比ELISA试剂盒方法更节省时间;CLEIA试剂盒IC50为400 ng·L-1,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为201 ng·L-1和907 ng·kg-1,而ELISA试剂盒IC50则为1252 ng·L-1,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为235 ng·L-1和993 ng·kg-1,CLEIA试剂盒方法的灵敏度要高于ELISA试剂盒方法的灵敏度。综合分析得知：CLEIA法比ELISA法灵敏度更高、反应时间更短。     

QuEChERS法测定葡萄酒中乙烯菌核利方法研究

建立了QuEChERS测定葡萄酒中乙烯菌核利的方法.样品经乙腈提取,丙基乙二胺(Primary Secondary Amine,PSA)净化,冷冻离心分离,氮气吹干,最后采用气相色谱-串联质谱检测.结果表明:乙烯菌核利浓度在25～250 μg·L-1时与峰面积有良好的线性关系(R2 ＞0.9900),定量限(10 S/N)为1.3 μg·L-1;当添加量在25、50、250 μg· L-1时乙烯菌核利的平均回收率为87％～ 102％,相对标准偏差(Relative standard deviation,RSD)为3.1％～7.3％.因此,该方法定性定量结果准确,适合葡萄酒中乙烯菌核利残留的快速检测.     

检测莠去津残留的间接竞争ELISA试剂盒的研制

在制备多克隆抗体的基础上,研制用于检测莠去津残留的间接竞争ELISA试剂盒。结果表明:莠去津抑制率回归曲线为y=19.762x+5.6026,相关系数R2=0.981,线性检测范围为1~5000μg·L-1,最低检测限为5.35μg·L-1,IC50为176.44μg·L-1。莠去津多克隆抗体的交叉反应率小于20%,莠去津试剂盒的添加回收率均高于75%,供试样品检测结果的批内和批间变异系数均低于10%。试剂盒在4℃或-20℃下贮存270d仍有效。     

克伦特罗在猪尿液和血液中残留消除规律研究

本研究对克伦特罗在喂药期和休药期猪尿液和血液中残留规律和相关性进行了研究。选择10头健康猪（60～5．7kg）进行试验,在饲料中添加4mg／kg盐酸克伦特罗,连续饲喂15d后休药,参考NY/T468—2006方法标准监测喂药期和休药期尿样和血样中克伦特罗含量,研究其残留消除规律。试验结果表明：克伦特罗在喂药期间猪尿液中平均含量为393μg／L～1131μg/L,血液中平均含量为6．8μg/L。22．1μg/L;停药后含量迅速下降,其中,19d后猪尿液中平均含量为2．19μg／L,猪血液中平均含量为0．49μg／L。同时尿液和血液中克伦特罗含量呈一定的正相关关系,喂药期相关系数为0．9385,休药期相关系数为0．9402。     

兽药残留检测中试剂盒的验证方法研究

试剂盒是新研发出的一代药物残留检测产品,主要是应用酶联免疫技术。相对于传统的仪器分析技术,试剂盒检测方法具有简便、快速、灵敏度高以及准确性高等特点,能够最大限度的减少工作强度和操作误差。但是在使用试剂盒进行检测时,其结果往往和试剂盒已标示出的各项技术指标都存在较大差距,导致出现假阳性的概率变大,因此注重兽药残留检测中试剂盒的验证方法,确定试剂盒指标评判的具体方法和内容,会大幅提高检测结果判定的可靠性。     

瘦肉精三合一胶体金快速检测板的研制及在畜肉中的应用

应用胶体金免疫层析技术,研制了一种瘦肉精三合一免疫胶体金快速检测板,用于检测畜肉中盐酸克伦特罗(CLEN)、莱克多巴胺(RAC)、沙丁胺醇(SAL)残留。将制备的羊抗鼠IgG、人工结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素(NC)膜和胶体金结合垫上,包被后的NC膜和胶体金结合垫、样品垫、吸水垫及其他辅料组装成检测板。实验结果表明,样品通过粗提处理,检测板的检出下限为5.0 μg·kg-1,整个检测所需时间约20 min;样品通过精提处理,检测板的检出下限为1.0 μg·kg-1,整个检测所需时间约35 min。     

克伦特罗残留GC-MS检测方法的建立及对自制试纸条性能的确证

建立了猪尿液中盐酸克伦特罗(CL)残留的GC-MS检测方法,并对自主研制的CL残留快速检测免疫金标试纸条(CL-Strip)进行了比较分析.结果表明,GC-MS的检测限为0.5ng/ml,CL-Strip的检测限为1.0ng/ml:CL-Strip与GC-MS两者的加标测定实验结果完全一致;用CL-Strip检测出的100份阴性尿样和18份阳性尿样,与GC-MS检测结果完全一致.说明CL-Strip与GC-MS同样灵敏、准确、稳定,由于CL-Strip具有简便、直观、快速、敏感、特异、准确等优点,建议在CL残留快速检测中推广应用.     

酶抑制-比色法农残速测试剂盒检测效果及贮存条件的研究

为探讨商品化农残速测试剂盒的贮存条件及检测效果,将某一品牌试剂盒在28℃室温下存放30 d,用农残快速检测仪测定其3 min的吸光度;同时用6种商品化酶抑制-比色法农残速测试剂盒测定蔬菜中的农药残留,与使用气相色谱-FPD、液相色谱-质谱联用仪定量检测蔬菜中甲胺磷等50种有机磷及涕灭威等10种氨基甲酸酯类农药残留的测定结果相比,得出各试剂盒检测样品的假阳性率、假阴性率及符合率.结果 表明:未配制的试剂在28℃室温下存放30 d及配置后试剂在12℃冰箱中存放15d不影响使用;6种试剂盒检测样品均有一定的假阳性、假阴性样品产生,与色谱、质谱检测结果相比符合率有所差异,D品牌试剂盒检测结果与色谱、质谱检测结果符合率最高.综合而言,酶抑制-比色法农残速测试剂盒作为现阶段的主流检测手段,在检测结果的准确性方面存在较大偏差,不同品牌试剂盒检测效果存在一定差异,这不仅取决于试剂盒的质量,还受制于样品的选取,广大生产者、销售者和使用者应引起重视.