C型肉毒梭菌肉毒毒素的提取与鉴定

[目的]通过对C型肉毒梭菌肉毒毒素的提取与鉴定,为类毒素和抗毒素的制备及抗原性分析奠定基础.[方法]将分离鉴定得到的C型肉毒梭菌通过扩大培养、产毒培养后将产生的肉毒毒素采用除菌过滤、硫酸铵盐盐析、离心、透析、浓缩的方法从产毒培养基中分离提取出来.再将提取的肉毒毒素通过SDS-PAGE鉴定毒素蛋白的分子量.[结果]分离出来的毒素蛋白重链和轻链分别在98和53 KDa左右,与C型肉毒毒素的理论分子量相符.[结论]提取的肉毒毒素是C型肉毒毒素.     

C型肉毒梭菌肉毒毒素的抗原性分析

[目的]通过对分离纯化的C型肉毒毒素抗原性分析,提供快速鉴定动物因C型肉毒梭菌中毒的理论基础.[方法]对分离纯化的C型肉毒梭菌的肉毒毒素灭活后通过SDS - PAGE测定浓度,确定浓度后与弗氏佐剂乳化后免疫家兔,免疫结束后采家兔血液并分离血清.[结果]将不同稀释倍数的肉毒毒素经SDS -PAGE电泳分离后,转移至HybondNC膜,家兔三免后提取的血清作为一抗,用二抗进行Western blotting检测,大约在98.0和53.0 kDa处出现特异反应带;抗原与抗体在琼脂凝胶上结合时,会形成清晰的沉淀带.[结论]分离纯化的C型肉毒毒素,经免疫后家兔可见:C型肉毒毒素具有免疫原性和反应原性,抗体的效价为1∶8.     

米氏硫胺素芽孢杆菌的分离及鉴定

[目的]分离、纯化土壤中的细菌,通过鉴定得到米氏硫胺素芽孢杆菌.[方法]通过生化鉴定、提取细菌基因组并进行细菌16 s rDNA测序等方法鉴定.[结果]此细菌生化鉴定结果符合《常见细菌鉴定手册》中的关于米氏硫胺素芽孢杆菌的生化鉴定,将细菌的16 s rDNA测序结果在NCBI上进行比对,表明该细菌为米氏硫胺素芽孢杆菌.[结论]分离、纯化得到的细菌经测序对比后确定是米氏硫胺素芽孢杆菌.     

新生仔猪红黄痢二联灭活疫苗的研制与应用Ⅰ——C型魏氏梭菌生物学特性研究

[目的]研究C型魏氏梭菌C59-2菌株的生物学特性。[方法]将该菌株接种于适宜培养基,进行毒素致死性试验和免疫原性试验。[结果]C型魏氏梭菌C59-2菌株在厌气肉肝汤和血液琼脂平板上生长良好,生化特性与魏氏梭菌一致;该菌在厌气肉肝汤中培养物的上清液0.0001ml静脉注射可致小鼠100%死亡,0.2ml静脉注射可使家兔全部死亡;免疫原性试验表明,该菌株制备成疫苗后免疫家兔,攻毒保护率可达75%。[结论]C型魏氏梭菌C59-2毒株适合于疫苗生产。     

嗜水气单胞菌的分离与16S rDNA鉴定

[目的]分离并鉴定鱼嗜水气单胞菌,并构建系统发育分析.[方法]从云南某鱼场采集发病鱼的病变组织进行细菌分离与培养,并对分离菌株进行初步鉴定、16S rDNA鉴定和系统发育分析.[结果]分离培养到1株细菌,命名为Ah1305.经表型鉴定、生化试验及16S rDNA系统发育分析,鉴定为嗜水气单胞菌.[结论]该研究可为快捷、准确检测鱼嗜水气单胞引起的疾病提供参考.     

新疆番茄生长及其果实加工过程中霉菌污染的监测

[目的]确定新疆番茄果实生长及其加工过程中的霉菌组成,了解不同加工番茄产地所分离霉菌的差异与分布特征以及是否有产毒霉菌污染.[方法]对番茄生长与加工过程中不同环节进行样品采集与霉菌分离,并根据菌落形态特征、显微特征、生理生化和ITS序列分析等方法对分离获得的霉菌进行鉴定.[结果]共分离鉴定45株霉菌,曲霉为优势菌17株,其次为青霉9株,镰孢菌6株,赤霉菌4株,木霉2株,其它类型霉菌7株.[结论]番茄生长土壤与番茄果实中均分离鉴定出产毒真菌黄曲霉菌和木贼镰孢霉,从番茄叶片中分离到产毒真菌尖孢镰孢菌.     

兔流行性腹胀病样品中产气荚膜梭菌的分离鉴定

从发生典型病理特征的兔流行性腹胀病死亡兔盲肠内容物中分离到1株产气荚膜梭菌,命名为SD14-02。经革兰氏染色、生化鉴定、16S rRNA比对和毒素型特异性PCR等方法对分离细菌进行鉴定和分型,结果显示,分离株SD14-02为革兰氏阳性杆菌,生化鉴定显示其符合产气荚膜梭菌的生化图谱。经系统发育分析,SD14-02的16S rRNA基因序列与产气荚膜梭菌位于同一分支。经毒素型特异性PCR方法鉴定,SD14-02为A型产气荚膜梭菌,蛋白电泳显示其与A型产气荚膜梭菌疫苗株苏84-A存在一定差异。动物试验证明SD14-02对小鼠具有致病性。研究结果为兔流行性腹胀病致病原的进一步研究奠定了基础。     

水貂细菌病的病原分离·鉴定及药敏试验

[目的]调查水貂细菌病的病原种类及其耐药性,以更好地预防水貂细菌病.[方法]从山东某水貂场采集病料,通过病原分离和生化试验等方法对细菌进行了分离与鉴定,并在此基础上进行了药敏试验.[结果]分离菌鉴定为埃希氏菌、克雷伯菌、哈夫尼菌、志贺氏菌、成团泛菌、耶尔森菌和沙门氏菌.药敏试验结果表明所有分离株对头孢西叮、头孢他啶、头孢吡肟均敏感,对其他药物表现出不同程度的耐药性.[结论]水貂发生细菌病后,应尽可能通过药敏试验筛选敏感药物,避免盲目用药.     

药用植物青阳参可培养内生菌分离与多样性分析

[目的]从云南民间药用植物青阳参的根、茎和叶中分离内生菌,并且进行初步分类鉴定,对分离出的内生菌多样性进行分析.[方法]利用平板分离法分离内生细菌和真菌,通过菌落形态、革兰染色形态观察和生理生化特征鉴定细菌,根据显微形态观察分类鉴定真菌.[结果]从植物根、茎和叶中共分离获得56株内生菌,包括22株细菌和34株内生真菌.22株内生细菌经鉴定归属于6个属,25株真菌经鉴定归属为5目7科12个属.[结论]青阳参植物内生菌存在多样性.不同部位内生菌的数量、组成与种群分布存有差异.该研究为青阳参资源的开发利用提供了理论依据.     

肇庆地区柑橘内生细菌的分离及初步鉴定

[目的]寻找有效抑制柑橘黄龙病病原菌的拮抗内生菌.[方法]从肇庆地区所属的6个县（市）的柑橘果园中采集24份柑橘植株的枝叶样本,利用平板分离培养方法对其内生细菌进行了分离,并对其进行了鉴定.[结果]从柑橘枝叶样本中共分离得到柑橘内生细菌55株,经显微形态初步鉴定,分属于5个属.[结论]为柑橘黄龙病的防治提供了理论依据.