葡萄风信子体细胞胚再生体系的建立及抗生素敏感性试验

【目的】建立葡萄风信子体细胞胚再生体系,通过外部形态判断愈伤组织的类型,并探索胚性愈伤组织对头孢霉素和潮霉素的敏感性。【方法】以多年生葡萄风信子‘蓝穗’的盛花期叶片为试验材料,通过正交试验筛选胚性愈伤组织诱导时适宜的植物生长调节剂质量浓度及配比;石蜡切片法观察不同愈伤组织内部的细胞结构,诱导具有胚性的愈伤组织形成体细胞胚,进而获得再生植株;在培养基中加入头孢霉素或潮霉素,观察2种抗生素对胚性愈伤组织生长和体细胞胚发生的影响。【结果】葡萄风信子胚性愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.1mg/L TDZ,在该培养基上诱导率高达100%。石蜡切片观察发现,外观质地紧密、节状或块状的愈伤组织为胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在不含任何激素的MS培养基上可诱导形成体细胞胚,在光照条件下体细胞胚伸长并生根,最后形成成熟小鳞茎。头孢霉素质量浓度超过500mg/L时,葡萄风信子胚性愈伤组织的生长和体细胞胚的发生受到强烈抑制;引起胚性愈伤组织褐变的潮霉素临界质量浓度为90mg/L。【结论】建立了葡萄风信子体细胞胚再生体系,90mg/L潮霉素可作为区分转化与非转化葡萄风信子胚性愈伤组织的有效选择压。     

小麦未熟胚离体培养的研究——愈伤组织发生及器官建成

对小麦胚离体培养过程中愈伤组织发生及器官的形态建成进行了解剖学观察。结果表明,胚龄对愈伤组织发生的起始部位有明显影响。胚的各个部位对离体培养反应的敏感程度随胚龄的增长盾片形成愈伤组织的能力而减弱,3周龄至成熟胚的盾片不能产生愈伤组织,只起分泌α-淀粉酶、转化、吸收和运转养分的作用。同时还观察到输导系统分化完善之前存在传递细胞。不定根及不定芽的分化和形成,既存在器官发生途径,也存在胚状体途径。根、芽原基形成的先后顺序并不固定。     

外源过氧化氢对水曲柳体胚发生中外植体抗氧化生理特性的影响

为了探讨外源过氧化氢（H₂O₂）对水曲柳体胚发生过程中外植体内部抗氧化物质、抗氧化酶、一氧化氮（NO）等的影响,以成熟水曲柳子叶胚为外植体诱导体胚发生,通过对体胚发生过程中不同时间段的外植体取材,测定其内部生理变化,分析外源H₂O₂对水曲柳内部生理生化的影响。结果表明：外源H₂O₂的添加,对水曲柳体胚发生过程中还原性抗坏血酸（ASA）的质量摩尔浓度的影响主要在中后期阶段（42 d）,且H₂O₂添加组高于对照组2.14%,对还原性谷胱甘肽（GSH）的影响在前期阶段（14 d）,H₂O₂添加组是对照组的3.23倍;外源H₂O₂处理提高外植体H₂O₂的质量摩尔浓度,在14 d时,外源H₂O₂处理和对照的H₂O₂     

橡胶树体胚发生过程中的生理生化特性

以巴西橡胶树花药为外植体,研究了巴西橡胶树花药体胚发生过程中抗氧化酶活性和某些生理参数的变化。结果表明,橡胶树花药体胚发生过程中,SOD活性变化表现在培养30 d达到最高值,而后下降平缓;丙二醛(MDA)含量在第60天达到最高。生理参数的变化表现为可溶性蛋白含量0 d含量最高,可溶性糖的含量在50 d达到最高,据此认为,SOD和MDA对橡胶树花药体胚的诱导起主导作用,可溶性蛋白含量与不定芽的发生密切相关。     

水曲柳体胚发生过程中不同状态类型外植体的生理生化状态

以水曲柳Fraxinus mandshurica幼嫩合子胚子叶为外植体诱导水曲柳体胚发生,对该过程中外植体的不同状态类型分别取样,检测这些不同状态类型外植体的多糖含量、可溶性蛋白质含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)活性等生理生化指标,分析不同状态类型外植体生理生化与体胚发生、愈伤组织发生、外植体褐化、外植体生长等方面的关系,以便为分析水曲柳体胚发生机理和改善其体胚发生技术提供依据.研究结果表明,不同状态类型外植体的生理生化状态与体胚发生、愈伤组织发生、外植体褐化和生长发育存在非常有趣的相关关系,值得进一步深入解析.     

湖南地区引种葡萄风信子的物候期及生长特性观察

为了丰富湖南省球根花卉种质资源,从荷兰引种‘流苏’、‘蔚蓝’、‘白美人’3个品种的葡萄风信子,对其在湖南地区的物候期、观赏特性和生长状况进行了观察。结果表明,3个品种的耐寒性均较强,‘蔚蓝’和‘白美人’的物候期早于‘流苏’;3个品种的单花序开花持续时间和群体开花持续约22~30 d,其中‘流苏’的开花时间最长,花序也最长,极具观赏价值。因此,认为葡萄风信子适合在湖南地区种植,可用于盆栽、花坛、花境、林下观花地被及岩石园绿化等。     

黑香蕉葡萄不同器官发生途径再生体系的优化

为探讨葡萄高效再生体系的优化,以黑香蕉葡萄品种叶片、叶柄、茎尖分生组织为外植体,对其再生体系进行了优化,同时比较了不同器官再生的效果。结果显示:适合叶片再生的培养基为:MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,但再生率仅为4.88%;适合叶柄再生的培养基为:NN69+1.33mg/L6-BA+0.02mg/L NAA,再生率为16.92%。说明叶柄的再生率高于叶片但两者都没有超过20%。并且NAA对黑香蕉叶柄的再生效果好于IBA。NN69基本培养基要优于MS。以茎尖为外植体在起始培养基MS+6-BA 1.40mg/L+NAA 0.09mg/L和诱导培养基培养MS+2mg/L 6-BA+0.09mg/L NAA上通过反复损伤芽尖得到茎尖分生组织(Meristematic bulk,MB),其不定芽诱导率高达87.63%。说明利用茎尖分生组织建立的葡萄再生体系更适合葡萄的遗传转化。     

植物体细胞胚胎发生的生理生化研究进展

体细胞胚胎发生在植物中有着广泛的应用前景,不仅是植物进行大规模快速繁殖的重要途径,还为研究细胞全能性提供了理想的实验体系。近几年来,对植物体细胞胚胎发生的研究取得了较大的进展,但同时也存在着一系列的问题有待于进一步解决。根据近几年来的相关研究报道,简述植物体细胞胚胎发生过程中酶类变化、核酸代谢、氨基酸及蛋白质代谢等方面的研究成果,并对体细胞胚胎发生的应用前景和存在问题进行探讨。     

油棕体细胞胚的诱导和次生胚的增殖研究

油棕体细胞胚的诱导是油棕体胚发生技术体系中最关键的培养过程,通过建立油棕次生胚增殖培养方法可有效地实现油棕组培苗快速的增殖繁育。本研究通过系统的对油棕体细胞胚发生及次生胚再生途径中若干影响因子的比较研究,建立油棕体细胞胚和次生胚再生体系。结果表明:油棕体细胞胚再生体系在不同基因型的油棕品种内诱导率存在较大差别,其中植物外源激素二氯苯氧乙酸(2,4-D)对油棕胚诱导效果较好;油棕次生胚增殖在不同基因型的油棕品种内差异不显著,木本植物培养基(WPM)在油棕次生胚增殖中培养效果最好。     

影响木薯器官发生主要因素的优化

为了给木薯主栽品种的转基因改良提供条件,对木薯4个主栽品种NZ188,SC8,C3及C4器官发生的影响因素（基因型,蔗糖,IBA,AgNO3）进行了优化研究。结果表明：在体细胞胚的发生、器官发生等能力上,不同基因型之间存在明显差异,NZ188,SC8和C3在黑暗条件下侧芽膨大,初级体细胞胚的诱导率可达80%以上,而C4品种则在光照培养下效果较好;在进行体细胞胚诱导和成熟子叶胚的诱导时,培养基中蔗糖质量浓度为25～30g·L-1时效果最好;不定芽诱导培养基中添加0.3mg·L-1的IBA及4mg·L-1的AgNO3时,不定芽的诱导率及芽再生数目明显提高。     

烟草体细胞胚胎诱导发生初报

 以烤烟云烟85叶片诱导的愈伤组织为材料,通过不同的激素浓度配比进行试验,研究其体细胞胚胎的发生能力。结果表明:云烟85体胚诱导的最高频率为61.1%,其体细胞胚发生的最佳激素配比是NAA 2.0 mg/L,BA 0.2 mg/L,从诱导出的体胚中观察到体胚几个主要发育阶段。     

植物体胚成苗培养的研究进展

体胚成苗方式是愈伤组织成苗的主要方式之一,综述了植物体胚成苗培养中的主要问题及解决的方法。     

龙眼体细胞胚发生中期的蛋白质组学研究

 【目的】了解龙眼体细胞胚发生中期（球形胚至子叶形胚）蛋白质组的变化,为进一步阐明植物体细胞胚发生的机制提供依据。【方法】进行龙眼体细胞胚发生中期的同步化调控,采用双向电泳和质谱对龙眼体细胞胚发生中期的蛋白质组变化进行分析。【结果】龙眼体细胞胚发生中期表达蛋白的种类随着体细胞胚的发育逐渐减少,但在鱼雷形胚阶段其种类数量有所回升,且增加的蛋白分子质量小于66.0 kD,pI主要集中在5.00—7.00。成功鉴定了35个差异蛋白,发现了多个与体细胞胚发生密切相关的蛋白。1/2以上的蛋白与代谢途径有关,多个蛋白与氧化胁迫有关。RAN2 和 GTPase ObgE在龙眼体细胞胚发生中期发生了活跃的变化。【结论】随着体细胞胚的发育,细胞不断分化,体细胞胚中表达的蛋白种类减少。氧化胁迫相关蛋白、RAN2 和 GTPase ObgE与龙眼体细胞胚发生的调控有关。     

大豆体细胞胚胎发生系统组织学研究

大豆体细胞可以诱导发生在形态和结构上类似胚结构的胚状体。利用大豆体细胞胚发生系统进行大豆遗传转化,具有转化频率高、同步性好、转基因植株嵌合体少等诸多优点。对经根癌农杆菌侵染后,在含卡那霉素筛选培养基上生长的大豆未成熟子叶胚性细胞的发生、分化及发育进行了组织学研究。结果表明,体细胞胚以非芽体方式发生。胚性细胞可以从外植体表层或表层下1-2层细胞开始发生。随着胚性细胞的分裂,周围细胞开始退化解体,并形成具有类似胚柄结构的胚状体。之后,呈球形的胚状体突出于表皮之外,并依次发育成心形胚、鱼雷形胚和子叶形胚。以期为利用大豆未成熟子叶诱导体细胞胚发生系统高效转化体系的建立提供理论依据。     

芹菜体细胞胚胎发生早期变化的超微结构观察

采用超薄切片的方法，研究了芹菜人工种子体细胞胚早期发育的过程，对其亚细胞结构单位作了观察和描述。认为：离体条件下源自单一胚性细胞启动以后，是以自由的方式进行分裂，经历不同旺盛分裂阶段，然后进入极性分化，与合子胚最初发育过程相吻合。     

三叶木通体细胞胚胎发生及植株再生研究

以三叶木通成熟种子的幼胚为材料,探讨不同浓度2,4−D（1.0、2.0、4.0 mg/L）、NAA（0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L）、6−BA（0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L）、KT（0.2、0.5、1.0 mg/L）的植物生长调节剂对三叶木通愈伤组织的诱导及体细胞胚胎发生的影响,分别筛选出诱导愈伤组织、体细胞胚、次生胚增殖、植株再生的最适培养基,以此间接途径建立三叶木通体细胞胚胎发生及植株再生体系。结果表明：三叶木通种子最佳灭菌处理方式为0.1 % HgCl₂灭菌18 min,无菌水冲洗干净后接种在添加了0.05 % PPM的愈伤诱导培养基上;三叶木通幼胚诱导愈伤组织的最佳培养基是 MS+2.0 mg/L 2,4−D+0.2 mg/L NAA,愈伤诱导率为95.67%;胚性愈伤诱导三叶木通体胚发生的最佳培养基为MS+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L 6−BA,体胚诱导率为55%;次生胚增殖的最佳培养基为MS+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L 6−BA,增殖倍数达19.84,体胚随继代次数增多逐渐分化,次生胚增殖活力变弱;成熟的体胚分化后一部分可再生成苗,在MS中能起到壮苗作用,再生植株转移至人工光照培养箱中炼苗3~5 d再转入V（泥炭土）∶V（蛭石）∶V（珍珠岩）为2∶1∶1的基质中能够稳定生根成活且形态正常。