鲎试剂检测乳品中内毒素浓度的研究

为研究乳品中内毒素的浓度范围,本研究检测了不同牛奶样品中内毒素的浓度和细菌总数,分析了牛奶中内毒素的浓度及其与细菌污染的关系,并对来自牛场的107份鲜奶样品和市售的乳制品进行了检测。结果表明,鲎试剂检测法可用于牛奶内毒素的检测,但不能用于判断牛奶中细菌含量的高低;85.1%(87/107)的鲜奶样品的内毒素浓度低于300EU/mL,5.6%(6/107)的鲜奶样品内毒素浓度超过500EU/mL;不同厂家、不同类别的乳制品内毒素浓度差异较大。本研究为奶制品的安全检验提供了参考。     

兔舍环境气载内毒素检测

兔舍内气载内毒素的含量介于65￣217 EU/m 3;需氧革兰氏阴性活菌的含量介于0.7￣1.6×103 C FU/m 3空气之间,占优势的是肠杆菌,其中大肠杆菌最为常见;需氧菌含量介于3.3￣7.8×103 C FU/m 3。气载内毒素与需氧革兰氏阴性活菌含量和需氧菌总数在数值上存在弱的正相关(r=0.23;r=0.20)。结果表明:不能通过测定气载革兰氏阴性细菌或细菌总数来估计气载内毒素的含量。气载内毒素含量与粪便和饲料中内毒素浓度之间呈正相关(r=0.71;r=0.58),证明饲料和粪便是气载内毒素的重要来源。     

猪瘟脾淋毒耐热保护剂活疫苗内毒素检测方法的建立与应用

依据《中华人民共和国兽药典》2005年版(一部)附录112-115和《中华人民共和国药典》2005年版(三部)ⅫE收载的细菌内毒素检测方法及指导原则进行实验。研究猪瘟脾淋毒(耐热保护剂)活疫苗对细菌内毒素检查试验的干扰情况,并建立其内毒素检测方法。结果猪瘟耐热保护剂活疫苗在10倍稀释后对灵敏度为0.25EU/ml的鲎试剂无干扰,细菌内毒素检测方法可用于猪瘟耐热保护剂活疫苗内毒素的检测。     

兔舍中气载内毒素的测定

本试验采用ANDERSEN-6级和AGI-30(AGI=All Glass Impinger)空气微生物样品收集器分别对三个不同兔场环境中气载内毒素及革兰氏阴性菌含量进行了测定,并对二者在数量上的关系进行了探讨.此外,还对兔舍内环境中气载内毒素和气载革兰氏阴性菌的来源进行了初步分析.结果表明,兔舍内气载内毒素含量介于22～774 EU/m3空气之间;气载需氧革兰氏阴性菌含量在0.39～10.3×102CFU/m3之间,没有检测出专性厌氧的革兰氏阴性活菌.在三个兔场中,革兰氏阴性菌含量与内毒素含量之间存在弱的正相关(rA=0.23;rB=0.29;rC=0.24),所以不能通过测定气载革兰氏阴性细菌含量来估计气载内毒素的含量.通过对气载内毒素来源的分析,可以推测饲料和粪便可能是其主要的来源.     

畜禽舍空气细菌内毒素两种检测方法的比较研究

[目的 ]比较气相色谱-串联质谱法(GC-MSMS)与鲎试验(LAL)在检测畜禽舍空气内毒素中的应用效果及相关性,以及气载内毒素是否对环境和饲养人员健康构成危害。[方法 ]通过国际标准AGI-30液体冲击式空气采样器,在4个养殖场16个畜禽舍采集空气样品,采用GC-MSMS与LAL测定空气细菌内毒素浓度。[结果 ]LAL测定的牛舍、猪舍、羊舍和禽舍空气细菌内毒素浓度中间值分别为1.85×10~5 EU/m~3、2.76×10~6 EU/m~3、4.82×10~5 EU/m~3、6.55×10~6 EU/m~3;而GC-MSMS测定的分别为3.3×10~4 EU/m~3、1.26×10~5 EU/m~3、2.4×10~4EU/m~3和8.21×10~5 EU/m~3。GC-MSMS在禽舍检测出的空气内毒素浓度显著大于其他畜舍(p0.05)。用LAL和GC-MSMS分析测定的空气中内毒素浓度超过了对大多数动物和人体有威胁的阈限值1.0×10~3EU/m~3。用GCMSMS与LAL测定的禽舍和羊舍空气样品中细菌内毒素浓度之间存在显著相关(p0.05),而牛舍和猪舍之间浓度没有显著相关性。GC-MSMS主要检测存在于动物舍空气内毒素中含有C_(14)-C_(18)链的3-羟基脂肪酸。LAL测定的内毒素浓度与含有C_(14)-C_(16)链3-羟基脂肪酸量之间有显著相关(p0.05)。[结论 ]GC-MSMS与LAL联合应用可以提高检测气载内毒素的准确性,且本研究表明畜禽舍中检测到的空气细菌内毒素浓度可以危害人类和家畜动物健康。     

鲎试剂检测中药提取物中的内毒素--动态浊度法

采用动态浊度法对人参提取物进行内毒素检测。结果表明人参提取物(3．2mg/ml)对鲎试剂检测不存在干扰作用，内毒素含量小于检测限值(0．031Eu／ml)。因此可以采用动态浊度法检测人参提取物中的内毒素。     

兔舍中气载内毒素的测定

本试验采用ANDERSEN-6级和AGI-30(AGI=All Glass Impinger)空气微生物样品收集器分别对三个不同兔场环境中气载内毒素及革兰氏阴性菌含量进行了测定,并对二者在数量上的关系进行了探讨。此外,还对兔舍内环境中气载内毒素和气载革兰氏阴性菌的来源进行了初步分析。结果表明,兔舍内气载内毒素含量介于22~774 EU/m3空气之间;气载需氧革兰氏阴性菌含量在0.39~10.3×102CFU/m3之间,没有检测出专性厌氧的革兰氏阴性活菌。在三个兔场中,革兰氏阴性菌含量与内毒素含量之间存在弱的正相关(rA=0.23;rB=0.29;rC=0.24),所以不能通过测定气载革兰氏阴性细菌含量来估计气载内毒素的含量。通过对气载内毒素来源的分析,可以推测饲料和粪便可能是其主要的来源。     

铜绿假单胞菌混合蛋白疫苗制备研究

为了制备免疫力高、不良反应少的铜绿假单胞菌混合蛋白疫苗,试验采用间接ELISA方法测定内毒素蛋白、类毒素和外膜蛋白免疫后小鼠的血清抗体效价,鲎试剂凝胶半定量方法测定上述3种蛋白的内毒素含量,采用"高免疫力+低内毒素"作为配伍指标制备5组混合蛋白疫苗,分别编为1～5号,间接ELISA法测定混合蛋白疫苗的免疫力水平,鲎试剂凝胶半定量方法测定混合蛋白疫苗的内毒素含量,小鼠腹腔注射法测定混合蛋白疫苗的异常毒性。结果表明:三种蛋白免疫后,小鼠血清抗体效价均随免疫进程持续升高,内毒素蛋白抗体效价最高,达到1∶12 500;内毒素蛋白中内毒素含量(E_内)为8.00 EU/mL,类毒素中内毒素含量(E_类)为1.73 EU/mL,外膜蛋白中内毒素含量(E_外)为2.24 EU/mL;3号混合蛋白疫苗(内毒素蛋白∶类毒素∶外膜蛋白=60∶20∶20)血清抗体效价达到了1∶12 800,其内毒素含量(E_3)为5.66 EU/mL;3号混合蛋白疫苗异常毒性试验合格。说明3号混合蛋白疫苗免疫效果好,与内毒素蛋白持平,且内毒素含量低于内毒素蛋白。     

加米霉素注射液内毒素检查方法研究

参照《中华人民共和国兽药典》2015版(后简称兽药典)一部附录200页细菌内毒素检查法的有关规定,对加米霉素注射液内毒素限度及检查方法进行了研究。结果显示,加米霉素注射液在0.075～0.3mg/mL时对鲎试剂无增强或抑制作用,产品内毒素含量均小于限定值125EU/mL,符合规定。通过试验研究,建立了加米霉素注射液的内毒素检查方法,且采用凝胶法对其进行细菌内毒素检查是可行的。     

兽用原料药磷酸替米考星细菌内毒素的检查

按照《中国兽药典》2010年版一部附录中凝胶法对兽用原料药磷酸替米考星细菌内毒素进行检查,对不同稀释倍数的磷酸替米考星溶液与细菌内毒素与鲎试剂之间凝集反应的干扰试验。结果显示磷酸替米考星经稀释后对鲎试剂与细菌内毒素之间的凝集反应既无抑制作用,也无增强作用。因此使用凝胶法检测磷酸替米考星中细菌内毒素是可行的,具有简便、快捷等优点。从而确定的磷酸替米考星中细菌内毒素的限度为不大于0.5EU/mg。     

泰地罗新原料药细菌内毒素检查方法学研究

本文建立了泰地罗新原料药细菌内毒素检查方法。根据《中国兽药典》2015年版一部附录1143细菌内毒素检查法(凝胶法)的要求[1],通过干扰试验确定样品最大不干扰浓度,并进行方法学验证。结果显示泰地罗新质量浓度小于0.4mg/mL时,不会干扰内毒素和鲎试剂的反应;泰地罗新内毒素应小于1.25EU/mg。结论:可以采用此法对泰地罗新原料药进行细菌内毒素检查。     

鲎试验检测脂肪乳注射液中细菌内毒素的研究

目的:验证鲎试验检查脂肪乳注射液中细菌内毒素的可行性。方法:按照2010年版《中国药典》细菌内毒素检查方法,用2个厂家的鲎试剂对脂肪乳注射液进行研究。结果:用λ为0.5EU/ml的鲎试剂检测细菌内毒素可行、有效。结论:细菌内毒素检查法(凝胶法)可代替兔热原法控制脂肪乳注射液的产品质量。     

转移因子注射液中细菌内毒素检测方法研究

为检测转移因子(TF)注射液中细菌内毒素,本研究采用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的凝胶法对国内1个生物制品厂的TF注射液样品进行了检测,实验结果表明当TF注射液稀释至0.025 mg/mL时,对鲎试剂的凝集反应无干扰作用.因此,该方法适用于TF注射液中细菌内毒素检测,并可以用于该项生物制品的质量监控.     

HPLC法测定黄芩苷-β-环糊精包合物中黄芩苷的含量

为了建立HPLC法测定黄芩苷-β-环糊精包合物中黄芩苷的含量方法,在CLC-ODSC18柱上,以甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)为流动相,检测波长280 nm,以外标法定量测定了黄芩苷-β-环糊精包合物黄芩苷的含量.结果:线性范围为20.0～80.0μg/ml,回归方程为Y=9753.1X 1546,r=0.9993(n=5),平均加样回收率为99.37%(n=5),精密度试验RSD为0.30%(n=6).本方法准确、可靠、重现性好,可作为黄芩苷-β-环糊精包合物中黄芩苷的含量测定方法.     

浊度法测定维生素C注射液细菌内毒素含量

应用BET-32型细菌内毒素测定仪定量测定维生素C注射液的细菌内毒素含量，干扰试验表明，维生素C注射液在400倍稀释时，测定内毒素的干扰最小。7个不同批号的维生素C注射液测定结果显示，7批的回收率均符合测定要求，其中4个批号的人用维生素C注射液内毒素含量符合药典标准，兽用3个批号产品的内毒素含量偏高。     

培氟沙星间接竞争ELISA检测方法的建立

为了建立培氟沙星(PFLX)残留含量的间接竞争ELISA快速测定法(ci-ELISA),试验采用人工合成的培氟沙星-卵清白蛋白偶联物(PFLX-OVA)为检测抗原,PFLX标准品为竞争半抗原,与一定量的PFLX进行抗血清竞争反应。结果表明:理想的包被抗原质量浓度为0.25μg/mL,PFLX抗血清稀释倍数为1∶16 000,得到回归方程(y=-18.298x+93.374,R2=0.991)和标准曲线,最小检测量为28.77 ng/mL,在0.5～2 000 ng/mL范围内样品添加回收率为89.07%。说明所建立的检测方法可以用于培氟沙星残留含量的快速测定。     

高效液相色谱法测定洛克沙胂预混剂含量方法的研究

采用高效液相色谱法测定洛克沙胂预混剂的含量,色谱柱为C18(250×4.6mm,5μm),流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-醋酸(9091),检测波长254nm,流速1ml/min,进样量20μl.方法的线性范围为0.4124～0.04124mg/ml,r=0.9999,样品回收率为100.7%(5%)和100.8%(10%),RSD=0.19%(5%)和RSD=0.26%(10%),本方法具有专属性,可与已知的杂质进行有效地分离.     

硫酸链霉素细菌内毒素定量测定法的研究

应用鲎试剂动态浊度法，将硫酸链霉素制备成4、2、1、0．5mg／mL溶液，定量添加标准内毒素进行干扰预试验，计算回收率，确定不干扰浓度为0．5—2mg／mL。从中选出1mg／mL为最佳浓度，然后进行3个批次硫酸链霉素正式干扰试验。在供试品中定量添加标准内毒素，其回收率分别为125．8％、126．1％、127．3％，均在50％-200％之间，说明此浓度的供试品对鲎试剂反应无干扰作用。因此，内毒素含量在0．015—1EU／mL范围内，将硫酸链霉素制备成浓度为1．0mg／mL的溶液，可用于细菌内毒素的定量检测。     

高效液相色谱法测定阿奇霉素的含量

为了测定阿奇霉素的含量,试验采用高效液相色谱(HPLC)法,以Kromasil C_(18)为色谱柱(250.0 mm×4.6 mm,5.0μm),以0.067 mol/L磷酸二氢铵(三乙胺调p H值为6.5)︰乙腈=70︰30为流动相,流速为1.0 m L/min,用UV230+型紫外-可见波长检测器,检测波长为210 nm,用外标法定量。结果表明:阿奇霉素在1.4~3.4 mg/m L的浓度范围内线性关系良好(r=0.999 8,n=6);样品的平均回收率为100.20%,相对标准偏差(RSD)=0.38%(n=3);样品测定方法重现性的RSD=0.49%(n=6),说明该方法可用于阿奇霉素含量的测定。     

毒品美沙酮的液相色谱定量分析

目的：建立毒品美沙酮的液相色谱定量分析方法。方法：将样品美沙酮加入甲醇超声溶解,离心取上清,与不同浓度的美沙酮标准溶液以及空白甲醇共同进样,采用高效液相色谱法对样品中美沙酮成分进行定量分析,流动相：甲醇：去离子水：三乙胺缓冲液（PH=8）=65∶34.8∶0.2;柱温：50℃;检测波长：220 nm、270 nm、290 nm。结果：该方法可实现美沙酮成分的快速定量,美沙酮工作曲线线性范围为0.01～1.0 mg/mL（相关系数r=0.999 6）。定量下限为0.01 mg/mL(1.0%)。检出样品中美沙酮的含量约为33%,其中两平行样品的相对相差为0.45%。结论：采用高效液相色谱法定量测定美沙酮的含量,操作简便,数据准确,适用于涉毒案件中查获毒品美沙酮物证的含量检测。