克仑特罗在猪肝脏中残留检测的ELISA法研究

本研究旨在用ELISA试剂盒建立一种简便、可靠的猪肝脏中克仑特罗残留的检测方法。添加了适量克仑特罗标准工作液的肝脏样品同 5倍 0 .1mol/L的盐酸溶液匀浆 ,冻藏、解冻后离心。上清液用正已烷萃取脂溶性杂质 ,再用氢氧化钠溶液调节pH至 1 2。用异丁醇提取待测药物 ,将提取液在 6 0℃用氮气吹干。用 1mL试剂盒中的稀释液将残渣溶解后 ,用ELISA法在 4 50nm处检测克仑特罗的含量。该方法的线性范围为 0 .1 3～ 5.3ng/mL ,回归方程为y=- 1 .80 0x 2 .2 85,相关系数r=0 .997,最低检测限为 0 .1 3ng/mL ,最低可定量限为 0 .2 5ng/g,浓度为 0 .2 7、0 .53和 1 .0 6ng/g时的回收率分别为 6 8.9%、72 .7%和 77.4 % ,CV <2 0 %。本法的可靠定量限低于克仑特罗在动物肝脏中的最高残留限量 ,且回收率和变异系数均能满足残留检测的要求 ,是一种较简便、可靠的克仑特罗在猪肝脏中残留的快速检测方法     

喹乙醇代谢物残留ELISA试剂盒检测方法的建立

通过间接竞争ELISA反应检测鸡肉、猪肉、鱼肉、虾肉、鸡肝以及猪肝中MQCA的残留量,标准曲线IC50值为3.8μg/L,线性范围为1.0~81.0μg/L,对鸡肉、猪肉、鱼肉、虾肉、鸡肝、猪肝样本的检测限在1.65~1.89μg/kg,样品添加回收率均在79.0%~93.7%,批内变异系数小于15%。该方法的建立,为快速检验试剂盒的研究奠定了基础。     

化学发光免疫分析与酶联免疫分析法检测水产品药物残留的比较研究

对检测水产品中呋喃唑酮代谢物( AOZ)和氯霉素( CAP)药物残留的两种方法---化学发光免疫分析( CLEIA)和酶联免疫分析( ELISA)法进行了比较研究。结果表明：两种药物残留检测中, CLEIA分析方法的线性范围和检出限均优于ELISA法,且两种免疫分析法的添加回收率均具有很好的相关性;用CLEIA法检测AOZ的检出限为0.01μg/kg,线性范围为0.01~2.56μg/kg,检测CAP的检出限为0.016μg/kg,线性范围为0.025~6.400μg/kg;用ELISA法检测AOZ的检出限为0.1μg/kg,线性范围为0.10~1.62μg/kg,检测CAP的检出限为0.05μg/kg,线性范围为0.05~4.05μg/kg;用CLEIA法检测CAP的批内变异系数( RSD)为5.5%~11.3%,批间RSD为12.3%~20.9%,检测AOZ的批内RSD为6.6%~11.1%,批间RSD为15.6%~18.3%。研究表明,用CLEIA法检测水产品药物残留较ELISA法检出限低、线性范围宽,虽然检出CAP和AOZ的变异系数均高于ELISA法,但仍符合《兽药残留酶联免疫试剂(盒)备案参考评判标准》的规定。     

化学发光免疫分析与酶联免疫分析法检测水产品药物残留的比较研究

对检测水产品中呋喃唑酮代谢物(AOZ)和氯霉素(CAP)药物残留的两种方法——化学发光免疫分析(CLEIA)和酶联免疫分析(ELISA)法进行了比较研究。结果表明:两种药物残留检测中,CLEIA分析方法的线性范围和检出限均优于ELISA法,且两种免疫分析法的添加回收率均具有很好的相关性;用CLEIA法检测AOZ的检出限为0.01μg/kg,线性范围为0.01².56μg/kg,检测CAP的检出限为0.016μg/kg,线性范围为0.0252.56μg/kg,检测CAP的检出限为0.016μg/kg,线性范围为0.025⁶.400μg/kg;用ELISA法检测AOZ的检出限为0.1μg/kg,线性范围为0.106.400μg/kg;用ELISA法检测AOZ的检出限为0.1μg/kg,线性范围为0.10¹.62μg/kg,检测CAP的检出限为0.05μg/kg,线性范围为0.051.62μg/kg,检测CAP的检出限为0.05μg/kg,线性范围为0.05⁴.05μg/kg;用CLEIA法检测CAP的批内变异系数(RSD)为5.5%4.05μg/kg;用CLEIA法检测CAP的批内变异系数(RSD)为5.5%¹1.3%,批间RSD为12.3%11.3%,批间RSD为12.3%²0.9%,检测AOZ的批内RSD为6.6%20.9%,检测AOZ的批内RSD为6.6%¹1.1%,批间RSD为15.6%11.1%,批间RSD为15.6%¹8.3%。研究表明,用CLEIA法检测水产品药物残留较ELISA法检出限低、线性范围宽,虽然检出CAP和AOZ的变异系数均高于ELISA法,但仍符合《兽药残留酶联免疫试剂(盒)备案参考评判标准》的规定。     

定量测定蜂蜜中呋喃唑酮代谢物残留的ELISA检测试剂盒的可靠性

研究定量测定蜂蜜中呋喃唑酮代谢物残留的酶联免疫(ELISA)检测试剂盒的准确性。通过将ELISA样本前处理进行优化,计算添加平均值、回收率及变异系数,并对国标方法和ELISA检测试剂盒测定结果进行t检验。当选择0.1mol/L Tris-HCl为样品稀释液、样本稀释倍数为1、试剂盒灵敏度为0.03μg/kg时,呋喃唑酮代谢物在各蜂蜜中添加0.1～0.3μg/kg的回收率为83%～97%,变异系数均低于5%,试剂盒检测限为0.03μg/kg,ELISA检测试剂盒与国标法测定同一份蜂蜜的t0.05检验结果差异不显著。呋喃唑酮代谢物ELISA检测试剂盒经优化与仪器的符合率为100%,ELISA检测试剂盒测定蜂蜜中呋喃唑酮代谢物存在极高的准确度和精密度。     

酶联免疫吸附试剂盒与免疫金标快速检测试纸检测氯霉素的比较

应用英国RANDOX的ELISA试剂盒和免疫金标试纸同时检测10份虾样,阳性率均为10%,两种方法都具有微量、特异、准确的优点。前者需要有酶标仪等仪器,试验时间长、成本高,但能用准确的数字表达抗体水平;后者不需要特殊仪器设备,试验时间短、成本低,适用于企业自检和大批量样品筛选。     

甲基对硫磷残留酶联免疫检测试剂盒的研制

合成了甲基对硫磷的半抗原,并与载体蛋白偶联合成了人工抗原,然后通过免疫的方法制备了其单克隆抗体.在筛选甲基对硫磷单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测苹果、玉米、蔬菜中甲基对硫磷残留的试剂盒.该试剂盒的灵敏度为0.5μg/L,对苹果、玉米、蔬菜样品的最低检测限分别可达到10、20、50μg/kg;加标回收率为70.3％～102.4％,变异系数为7.4％～13.0％;对实际样品的检测结果与气相色谱法基本一致.该方法快速、灵敏、可靠,为水果、蔬菜、谷物中甲基对硫磷的残留检测提供了便捷、准确的分析手段.     

鲢鱼体内卵黄蛋白原ELISA试剂盒的研制

以鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)为抗原,卵黄蛋白原抗血清为抗体,建立了检测鲢鱼体内卵黄蛋白原的间接酶联免疫吸附反应(ELISA)方法,组装卵黄蛋白原ELISA试剂盒,并对其性能进行鉴定。结果表明,建立的ELISA间接法检测浓度为6.1~396.0 ng/m L,灵敏度为6.1 ng/m L,且在该范围内标准曲线线性良好;稳定性试验结果表明,在系列抗原标准品中添加1%蔗糖、20%甘油和0.000 5%Mg Cl_2时,试剂盒在37℃条件下放置7 d,其标准曲线灵敏度和线性基本保持不变,说明筛选的该稳定剂配方对ELISA试剂具有良好的保护作用。     

酶联免疫(ELISA)分析晋麦叶片中脱落酸的含量

[目的]为了研究低温处理和外施脱落酸(ABA)对晋麦叶片中ABA含量的影响,为引进和推广小麦品种提供参考。[方法]通过低温处理和外施脱落酸,采用酶联免疫法(ELISA)测定晋麦47叶片中内源ABA含量的变化。[结果]经外源ABA处理的晋麦47叶片的ABA含量比对照增加3.16 ug/g;低温处理的晋麦47叶片的ABA含量比对照增加了2.105 ug/g。[结论]通过对两种处理的比较可发现,外施ABA对晋麦47叶片中ABA含量的影响比低温处理更为明显。     

兽药残留检测中试剂盒的验证评判方法研究

试剂盒是应用酶联免疫技术研发的新一代药物残留检测产品,与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点,操作时间仅需1.5 h,能最大限度地减少操作误差和工作强度。但是应用试剂盒时检测结果与有些试剂盒所标示的各项技术指标相差甚远,出现假阳性的几率很大,有必要在兽药残留检测中确定试剂盒指标评判的具体内容和方法。     

酶联免疫法检测中华鳖肌肉中己烯雌酚

根据酶标免疫法原理，用含有针对兔IgG（已烯雌酚抗体）的羊抗体与待测中华鳖肌肉中的已烯雌酚发生特异性的结合反应。洗涤后，加入的酶标底物连接未结合的已烯雌酚抗体，在酶基质的作用下与无色发色剂生成有色产物。反应后于450nm处理量吸光度，吸光强度与样品中的已烯雌酚浓度成反比。该检测方法平均最低检测下限为0.0125μg/kg，平均回收率74.8%，变异系数为1.763-3.084%。表明本方法快速、灵敏、可靠，适合对已烯雌酚残留限量检测的要求。     

酶联免疫法检测中华鳖肌肉中己烯雌酚

根据酶标免疫法原理，用含有针对兔IgG（已烯雌酚抗体）的羊抗体与待测中华鳖肌肉中的已烯雌酚发生特异性的结合反应。洗涤后，加入的酶标底物连接未结合的已烯雌酚抗体，在酶基质的作用下与无色发色剂生成有色产物。反应后于450nm处理量吸光度，吸光强度与样品中的已烯雌酚浓度成反比。该检测方法平均最低检测下限为0.0125μg/kg，平均回收率74.8%，变异系数为1.763-3.084%。表明本方法快速、灵敏、可靠，适合对已烯雌酚残留限量检测的要求。     

仔猪血清猪瘟抗体动态的数学模型

作者对8窝104头仔猪血清的猪瘟抗体用酶联免疫吸附试验间接法进行测定,在获得大量数据的基础上,使用多项式回归分析方法,建立了仔猪血清猪瘟抗体酶联免疫吸附试验测定A值(y)关于日龄(x)的回归方程,本模型的意义在于对各日龄(3日龄～25日龄)仔猪血清猪瘟抗体A值的观察值能进行点预测及区间预测。另4窝45头仔猪血清猪瘟抗体A值作为考验样本,考验样本值都落在置信度:勾0.90的预测区间之内。模型提示,猪瘟抗体水平的最低点在20～21日龄;猪瘟母源抗体的半衰期为11.86天。     

检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立

选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法.结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5 μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min.对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%.     

酶联免疫法检测盐酸克伦特罗的试验报告

盐酸克伦特罗酶联免疫反应测试盒适用于尿样、组织和饲料等样品中克伦特罗残留的定量检测。克伦特罗作为一种主要的β-兴奋剂应用于畜禽肉制品生产中,用以提高肌肉和脂肪的比例并加快生长速度。由于克伦特罗可作为肌肉舒缓剂用于人类疾病治疗,在畜禽中过量残留可能会对消费者造成危害,为此,被禁止在食品生产中应用。根据美国FDA和WHO规定,在肌肉和脂肪中克伦特罗的含量不能超过0.2ng/g,在肝脏和肾脏中其含量不能超过0.6ng/g。与传统的HPLC或GC-MS方法相比,酶联免疫方法具有操作简便、灵敏度高、成本低的优点。盐酸克伦特罗酶朕免疫反应测试盒为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速检测克伦特罗残留的方法,该试剂盒的特点包括4方面,第一,该试剂盒的提取方法能达到75%～95%以上的回收率,可以不需用有机溶剂并在10～30min之内完成提取过程。第二,高灵敏度(0.05ng/g);低检测下限(肉类/脂肪0.025ng/g,尿液0.05ng/ml,饲料0.2μg/kg)。第三,检测过程只需不到2h。第四,高重复性。     

克伦特罗残留检测试剂盒条件的优化及其应用

以CL-OVA为包被抗原,抗克伦特罗单克隆抗体为一抗,组建检测克伦特罗的竞争EL ISA试剂盒。以方阵滴定确定包被抗原最佳浓度(0.72μg.孔-1),抗克伦特罗单克隆抗体(2F12)最佳稀释度(1∶2 000),并建立EL ISA标准曲线,确定最小检测量为0.25 ng.mL-1。用该方法检测动物模型仔猪尿样中的盐酸克伦特罗,结果表明:停药后第1~7天尿样均为阳性,2周后有少量猪仍为阳性,而阴性对照猪尿样均为阴性。这表明建立的试剂盒对克伦特罗残留的检测具有广阔的应用前景。     

三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

[目的]探讨系统地检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的方法.[方法]通过三甲氧苄氨嘧啶与马来酸酐反应,得到三甲氧苄氨嘧啶半抗原,再通过免疫动物得到抗三甲氧苄氨嘧啶的单克隆抗体,并将其应用于能够检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的ELISA试剂盒.[结果]该试剂盒对水质中三甲氧苄氨嘧啶的检测限为2.34 μg/kg,IC50(50％抑制浓度)为4.8 μg/L,回收率为60.5％～79.7％,试剂盒的标准曲线范围为0～80 μg/L,批内、批间的相对标准偏差均小于10％.三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体与二甲氧苄氨嘧啶的交叉反应率小于1％.4℃下能够保存12个月,稳定性较好.[结论]研究结果为监管三甲氧苄氨嘧啶的滥用提供参考依据.     

不同pH值对酶联免疫法检测生猪尿样中瘦肉精含量的影响

意大利试剂盒与三方圆试剂盒检测生猪尿样的瘦肉精含量及pH值,试验结果表明,在一定pH值范围内瘦肉精含量与样品pH值呈极显著负相关关系;不同试剂盒对样品的pH值要求不同,样品pH值的变化对其检测结果影响的总体趋势相同,但影响程度不同;在试剂盒所对应的推荐pH值范围以内,样品pH值的变化对检测结果的影响较小,反之,样品pH值每调节1个单位所得的检测结果间显著差异。     

酶联免疫吸附法检测鸡蛋中三聚氰胺的残留

将三聚氰胺与琥珀酸酐反应以合成半抗原,再采用混合酸酐法合成人工完全抗原,然后免疫新西兰白兔获得针对三聚氰胺的特异性抗体(IC50为42 ng/mL),以此抗体为核心建立了检测三聚氰胺的间接竞争酶联免疫吸附检测法,检测限为8.5 ng/mL。鸡蛋样品以氨化乙腈提取,正己烷去脂,微孔滤膜过滤后检测;在空白样品中添加不同浓度的三聚氰胺,回收率范围为88.9%～96.1%,变异系数小于11.6%。表明:酶联免疫吸附法,快速、简便且灵敏,可作为鸡蛋或其他动物性食品中三聚氰胺残留的常规筛选方法。