团头鲂促肾上腺皮质激素释放激素受体基因序列特征及表达分析

促肾上腺皮质激素释放激素受体(corticotropin-releasing hormone receptor,CRHR)是鱼类下丘脑–垂体–头肾调控轴上的重要应激调节因子。本研究通过c DNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆出团头鲂(Megalobrama amblycephala)CRHR1 m RNA全长序列,应用生物信息学方法对其序列特征进行解析;同时采用荧光定量PCR技术分析了团头鲂CRHR1的组织分布图谱及外源性皮质醇注射模拟应激处理下团头鲂CRHR1 m RNA的表达变化。研究结果表明,CRHR1 m RNA序列开放阅读框(open reading frame,ORF)为1290 bp,编码429个氨基酸。团头鲂CRHR1氨基酸序列与鲤科鱼类的CRHR1氨基酸序列同源性最高;该受体具有7次横跨膜结构和氨基端激素受体结构域。CRHR1在垂体中表达量最高,其次为下丘脑,在心脏、肝、脾等组织中表达丰度较低。经外源性皮质醇注射后,实验组血糖和血清皮质醇显著高于对照组,在处理2 h后达到峰值;实验组血清ACTH水平与对照组差异总体不显著,但呈现先升高后下降。应激处理后,CRHR1转录水平在4种组织中的表达变化存在差异;垂体中CRHR1在早期出现明显的表达抑制,在下丘脑中则呈现先缓慢升高后缓慢下降的趋势,而心脏和头肾中CRHR1在早期则表现出表达迅速上调而后缓慢下降的趋势。本研究进一步丰富了CRHR在鱼类研究方面的基础资料,为鱼类应激调控提供了理论基础。     

团头鲂Toll样受体Ⅱ基因的克隆与表达分析

为了研究团头鲂(Megalobrama amblycephala)TLR2(ma TLR2)在抗嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染中的作用,本实验克隆了ma TLR2基因的c DNA全长。结果显示:ma TLR2基因c DNA的全长包括2923 bp,编码792个氨基酸。预测得到的ma TLR2的结构域包括一个信号肽、氨基端的亮氨酸重复基序(LRRs)、跨膜结构域(TM)和一个胞内的Toll/白介素(IL)-1受体区(TIR)。在嗜水气单胞菌感染后,团头鲂头肾中,TLR2的表达量在6 h时显著升高。TLR2下游相关的炎症细胞因子TNF-α的表达量也显著上调。结果表明ma TLR2在嗜水气单胞菌感染团头鲂后的免疫应答中起到了重要作用。     

团头鲂的微卫星亲子鉴定

本试验选用8个高质量多态性的微卫星标记对团头鲂(Megalobrama amblycephala)选育世代F1、F2、F3、F4和团头鲂"浦江1号"的357个子代进行了亲子鉴定,主要方法是通过Cervus 3.0.7计算机模拟软件依次进行等位基因频率分析、模拟分析和亲子分析,根据LOD值大小判定亲子关系。结果表明在团头鲂混养家系中,微卫星位点的平均等位基因数为35,平均观测杂合度为0.867,平均期望杂合度为0.94,平均多态信息含量为0.935,最终所有子代准确地找出对应的父母本,亲子鉴定准确率为100%,证实微卫星标记在团头鲂亲子鉴定中的应用价值。     

Growth differentiation factor 9 of Megalobrama amblycephala: molecular characterization and expression analysis during the development of early embryos and growing ovaries

Growth differentiation factor 9 (GDF9) is a member of the transforming growth factorβ superfamily and plays an essential role during follicle maturation in mammals. In the present study, the full-length complementary DNA (cDNA) of gdf9 was obtained from Megalobrama amblycephala. The cDNA sequence is 2,061 bp in length with an open reading frame of 1,287 bp encoding 428 amino acid residues. The deduced amino acid sequence shared identities of about 42–86 % with the homologues of other vertebrates. During the early development of embryos, the gdf9 mRNA was detected in zygote with significantly high level and declined sharply by 47 and 87 % at 4 hours post-fertilization (hpf) and 6 hpf and even to an undetectable level through advancing stages. Expression analysis based on quantitative real-time PCR revealed that gdf9 mRNA was mainly expressed in ovary, but much lower levels were also found in some nonovarian tissues. Within the follicle, gdf9 mRNA was localized both in the oocytes and the follicle layer cells by in situ hybridization. During the ovarian cycle, gdf9 mRNA significantly decreased after the previtellogenic stage and became to increase again after the fully grown stage. The results imply that Gdf9 may play critical physiological functions in M. amblycephala early embryonic development and reproduction.     

团头鲂双向选育效应研究

报道１９８６￣１９９９年团头鲂正向选育和逆向选育的两种截然不同的效果。正向选育采用混合选育法,每代从鱼苗到亲鱼的总选择率约为万分之四,选留健壮的较大个体,第五代成鱼阶段的平均日增重率比对照系（原种）提高２９．１％,即选育效应每代平均为＋５．８％。逆向选育为全兄妹近交,后代随机留养,近交系第三代成鱼阶段的平均日增重率比对照系（原种）降低１６．６％,即选育效应每代平均为－５．５％;近交系每第四代当年苗种阶段畸形率高达２．８％,越冬成活率比对照系低２８．４％,比选育系低４８．３％;选育系的越冬成活率比对照系提高３８．４％。本研究证明,科学的良性选育可大大提高养殖性能;近亲交配可导致养殖性能的迅速降低,必须严加防范。     

团头鲂黑素皮质素3型受体基因克隆及表达分析

黑素皮质素3型受体(MC3R)系统与动物摄食行为以及能量调控密切相关。为丰富鱼类MC3R相关基础研究,探索鱼类摄食行为与能量调控机制,本研究克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)mc3r基因,采用分子生物信息学和相对荧光定量PCR方法分别对氨基酸序列保守结构域、组织表达分布和禁食条件下的表达变化等开展分析研究。结果显示,团头鲂mc3r基因编码区全长984 bp,编码327个氨基酸,与现有报道的MC3R氨基酸序列高度相似,具有典型的7次跨膜结构域。组织表达图谱分析表明,mc3rmRNA在下丘脑、垂体、肝脏和卵巢有相对较高的表达。禁食试验结果显示,下丘脑和垂体中的转录变化与周期性摄食信号相关,其中下丘脑mc3r mRNA在禁食72 h和14 d的表达显著上调(P0.05),垂体mc3r mRNA在禁食72 h和禁食72 h后恢复投喂6 h表达量显著升高(P0.05),而肝脏中mc3r mRNA在禁食48 h和14 d的表达量显著上调(P0.05)。此外,对血液皮质醇和血糖的监测结果显示,两者均在禁食14 d有显著变化,其中皮质醇水平显著高于对照组(P0.05),而血糖水平显著低于对照组(P0.05)。综合本研究结果表明,MC3R在鲤科鱼类中具有高度相似的氨基酸序列和结构域;在组织中的转录表达变化与食物摄取有明显相关性,对调控鱼体摄食行为和能量代谢具有重要作用。     

池塘主养团头鲂技术的研究

完全用颗粒饲料主养团头鲂鱼种、商品鱼在新疆是近几年的事 ,新疆兵团水产技术推广总站 ,连续三年对团头鲂鱼种及商品鱼的养殖进行了研究 ,累计试养面积近三百亩。 2 0 0 0年的一个高产鱼池 ,面积 6 5亩 ,养殖 137天 ,共净产团头鲂 4 10 4公斤 ,亩净产团头鲂 6 31 4公斤 ,鲫、鲤鱼 80 0公斤 ,亩平均单产 12 3 1公斤 ,鲢鱼 30 0公斤 ,平均亩产 4 6 2公斤 ,各种鱼亩总净产 80 0 7公斤。该年秋季以上几种鱼的平均批发价格为 :团头鲂 2 0元 /ｋｇ ,鲤、鲫鱼5 0元 /ｋｇ ,鲢鱼 2 0元 /ｋｇ ,合亩净增值 :13336 0元 ,现将该池的养殖情况总结…     

青鱼与团头鲂池塘混养技术

近年来,常规鱼类养殖的效益一直在低位徘徊,武汉市东西湖区的养殖户却走出一条独具特色的高效养殖之路,值得学习和借鉴。此地的养殖户充分发挥地域优势,依托武汉市白沙洲水产批发市场的流通渠道,发展了以大规格青鱼和团头鲂混养、一次     

团头鲂败血症的防治研究

<正> 团头鲂(Megalobrama amblyocephala yih)又名武昌鱼,是近几年来从南方引进到东北地区的名贵养殖鱼类。目前仅沈阳地区养殖团头鲂的面积就有六七百公顷,并收到较好的经济效益。但是,随着团头鲂养殖的迅速发展,病害的问题越来越突出。几年来,我们对沈阳地区养殖团头鲂的患病情况进行了调查和研究,通过对团头鲂患病体采用病毒学的方法进行病毒初步分离以及细菌学实验方法分离病原体(Bacterial septicemia),并对该病原体进行了研究和不同的药物对比实验,取得了较好的效果,使该病的发生和蔓延得到了很好的控制。     

团头鲂良种雌核发育群体的建立及其遗传变异

为了巩固经15年选育而成的团头鲂良种－浦江一号的成果，并建立纯系以供进一步研究和开发，1999年和2000年，先后对团头鲂选育系三龄鱼（F5）和二龄鱼（F6）进行了雌核发育（抑制第二次成熟分裂）研究。利用UV照射遗传失活的鲤鱼精子诱导，采用冷,凶制团头鲂第二体排出；探索了适合团头鲂二龄及三龄鱼卵的休克温度、起始时间和持续时间，结果发现：二龄鱼和三龄鱼诱导起始时间均在受精后3min效果最好，而在体温度和持续时间上稍有差异，其中三龄鱼在0－2℃冷休克处理30min、二龄鱼在4－6℃冷休克处理20min效果较好。2年期间，建立了源于选育系3尾雌亲鱼的3个雌核发育群体，共获得正常的雌核发鱼后代1000余尾。RAPD分析发现，选育系群体具有引物S8扩增的1100bp条带，而雌核发育群体具有引物S18扩增的860bp条带；雌核发育群体内遗传相似度显著高于选育系群体，其遗传距离仅为选育系群体内遗传距离的54％。     

团头鲂促甲状腺激素β亚基基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法（RACE）克隆团头鲂（Megalobrama amblycephala）脑下垂体中促甲状腺激素β亚基（TSHβ）基因，并对其基因结构和系统进化进行分析。该基因cDNA序列全长614bp；5’端非翻译区100bp；3’端非翻译区61bp；开放阅读框架（ORF）453bp，共编码150个氨基酸。其编码的氨基酸序列与鳙鱼（Aristichthys nobili5）、鲤鱼（Cyprinus carpio）、金鱼（Carassius auratus）、斑马鱼（Daniorerio）、鲑鱼（Salmo salar）、虹鳟（Oncorhynchus mysiss）、欧洲鳗鲡（A．nnguilla）的相似性分别为：99．3％、92％、92％、82％、62．6％、62．6％和56％。核苷酸序列分析显示，团头鲂与鳙鱼相似性最高，为98．23％；与欧洲鳗鲡相似性最低，为48．7％。说明唧亚基在长期的进化中相当保守。在所比较的9种鱼类该基因ORF氨基酸序列中都含有定位相同的12个半胱氨酸残基，它们在成熟肽中形成6个二硫键，这对保证促甲状腺激素的空间结构，维持促甲状腺激素的生理功能起着重要的作用。该基因的成功克隆不仅为TSHβ的分子进化和相似性比较研究提供了新的资料，而且对进一步研究该基因的功能、表达具有重要的意义。     

水库网箱养殖团头鲂试验

诸城市石门水库属中型山区水库,常年养鱼面积100hm^2,最大水深14m,水源充足,水质清新无污染,发展网箱养鱼有得天独厚的条件。为了充分利用水域资源优势,提高水库渔业养殖的综合效益,我们于2003年在水库中进行了网箱养殖团头鲂试验。     

采用标记方法比较不同群体团头鲂的生长情况

以电子标记和剪鳍标记方法分别对4个相同数量、不同群体的团头鲂鱼种进行标记,放入同一池塘进行养殖,并测定其初始及试验结束时的生长指标,以研究不同群体团头鲂生长性能差异.试验结果表明:团头鲂"浦江1号"3个群体间生长速度的差异不显著(P＞0.05),但均极显著大于普通鲂(P＜0.01);生长速度的顺序为:09z2鲂＞09z1鲂＞自产鲂＞普通鲂."浦江1号"3个群体间体长/体高的比值差异不显著(P＞0.05),但普通鲂体长/体高的比值极显著大于09z2鲂(P＜0.01),显著大于自产鲂和09z1鲂(P＜0.05).体型性状对团头鲂鱼种的生长有一定影响,体型优良的团头鲂生长优势明显.采用电子标记法和剪鳍标记法的试验结果一致,且这两种标记方法均对团头鲂鱼种的生长无显著影响.     

团头鲂 HSP70 cDNA 的克隆、序列分析以及热应激对其 mRNA 表达的影响

采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)分离、克隆出团头鲂(Megalobrama amblycephala)肝脏热休克蛋白70(HSP70)基因全长cDNA序列,共2 224 bp,包括135 bp5'非翻译区、1 932 bp阅读框以及157 bp 3'非翻泽区[不包括Poly(A)].阅读框共编码643个氨基酸,分子量计算值为70.53 kD,理论等电点为5.25.该HSP70基因在翻译区不含内含子,符合诱导型HSP70的特征.团头鲂HSP70氨基酸序列中含有HSP70家族的3个签名序列以及细胞质特异性调控基序EEVD等.同源性分析表明,团头鲂HSP70氨基酸序列与斑马鱼等脊椎动物的相似性高达84.0%以上,与无脊椎动物果蝇的相似性也高达73.4%.生物信息学分析显示,团头鲂HSPTO基因所编码的蛋白质以亲水性区域为主,具有丰富的B细胞抗原位点,无信号肽,无跨膜区域,为非分泌型蛋白;同时还含有众多的蛋白激酶C磷酸化位点、N-肉豆蔻酰化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号转导与调控中发挥重要作用.该蛋白含有2个部分重叠的双向核定位序列,二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主,空间结构包括N端ATPase功能域和C端多肽结合功能域.应用实时定量PCR研究高温(34℃)应激对团头鲂HSP70 mRNA表达的影响.结果表明,在热应激过程巾肝脏HSP70 mRNA水平呈先升高后下降的变化趋势,说明该基因的表达受热应激调控,本实验克隆的序列为诱导型HSP70 cDNA.     

三角鲂与团头鲂鱼体营养成分比较分析

对三角鲂与团头鲂鱼体常规养分、氨基酸、脂肪酸和微量元素的组成和含量进行了比较分析。结果表明:三角鲂肥满度极显著低于团头鲂(P<0.01),去内脏比显著高于团头鲂(P<0.05),比肝与肠脂比两指标极显著低于团头鲂(P<0.01);三角鲂肌肉水分和粗蛋白含量显著高于团头鲂(P<0.05),肌肉粗脂肪含量显著低于团头鲂(P<0.05);三角鲂肌肉中必需氨基酸含量、半必需氨基酸含量和氨基酸总量均高于团头鲂肌肉中含量,但两者之间三指标差异均不显著;三角鲂肌肉含高不饱和脂肪酸量较多,其不饱和脂肪酸占脂肪酸总量的比值明显高于团头鲂;三角鲂肌肉中微量营养元素含量与团头鲂肌肉无显著差异(P>0.05)。     

团头鲂性腺发育不同时期组织学观察及Kiss2／Kiss2r基因表达分析

Kiss基因（Kisspeptin）及其受体Kissr基因（Kiss receptor）组成的系统参与下丘脑-垂体-性腺轴功能的调节,在脊椎动物青春期启动的过程中发挥重要作用。该研究通过组织切片技术观察了团头鲂（Megalobrama amblycephala）卵巢和精巢的不同分期,进一步采用荧光定量PCR技术分析比较了团头鲂Kiss2和Kiss2r基因在雌、雄性腺不同时期对应的脑、垂体、性腺组织中的表达量。组织切片观察明确鉴别出团头鲂卵巢和精巢发育Ⅰ期至Ⅵ期的性腺组织结构,基因荧光定量PCR分析结果表明Kiss2/Kiss2r系统主要是通过增加团头鲂卵巢发育Ⅱ期时脑和垂体的表达量以及Ⅲ期精巢的表达量来发挥生殖启动作用。     

淤泥湖、梁子湖、鄱阳湖团头鲂mtDNA序列变异及遗传结构分析

测定了淤泥湖、梁子湖及鄱阳湖团头鲂(Megalobrama amblycephala)共53尾样本的线粒体DNA(mtDNA)控制区序列。结果显示:在获得的411 bp长度控制区序列中,检测到3个突变位点、5个单倍型。遗传多样性分析显示,3个种群的遗传多样性水平比较低,且淤泥湖种群最低。分子方差分析(AMOVA)表明,淤泥湖种群与其它两个种群有明显遗传分化,但梁子湖与鄱阳湖种群间未出现分化。     

温度、pH值对团头鲂肝胰脏主要消化酶活性的影响

蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性直接影响动物对食物的消化作用。通过设置不同的pH和反应温度,来确定团头鲂蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的最适活性。结果表明,在不同温度条件下,测定团头鲂淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶的最适温度为50℃、50℃和40℃。团头鲂淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶最适pH分别为7.0,5.5和7.2。     

团头鲂血清抗草鱼出血病病毒活性成分的稳定性

团头鲂血清被强酸或强碱处理后 ,其抗草鱼出血病病毒活性完全丧失 ;而pH分别为 4 0和 8 0的弱酸性和弱碱性环境对其抗病毒活性没有影响 ;1 0mmol/L的 β - 2 -巯基乙醇与团头鲂血清作用 2h后 ,其抗病毒活性略有增加 ;而中性盐 (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀团头鲂血清后 ,其病毒中和指数下降约 95 %。     

光合细菌对团头鲂细菌性败血症的防治

研究了光合细菌(PSB)对团头鲂细菌性败血症的防治效果。试验1设预防组、治疗组1、治疗组2,对照组和空白组,用注射病原菌法感染试验鱼;试验2设PSB处理组和对照组,用浸泡病原菌法感染试验鱼。结果显示:在试验1中,对照组死亡率90%~100%,PSB处理的各试验组为70%~90%;试验2中PSB浸泡组的平均死亡率20%,对照组85%。