美洛托宁对猪卵母细胞体外成熟的影响及受体介导机制探究

为了探究美洛托宁对猪卵母细胞体外成熟的影响及其受体介导机制,试验采集健康母猪卵巢中的卵母细胞,采用免疫荧光检测猪卵母细胞MT受体表达情况;在体外成熟培养液中分别加入不同浓度的美洛托宁(0,1×10~(-5),1×10~(-6),1×10~(-7) mol/L),筛选对猪卵母细胞成熟和胚胎发育的最适浓度;根据最佳美洛托宁添加浓度,成熟液中分别添加1×10~(-6) mol/L的美洛托宁、MT受体激动剂、 MT受体颉颃剂和1×10~(-6) mol/L MT受体颉颃剂+1×10~(-6) mol/L美洛托宁,检测美洛托宁及其受体激动剂和颉颃剂对猪卵母细胞成熟和胚胎发育的影响;收集添加1×10~(-6) mol/L的美洛托宁24 h处理组、空白对照组、MT受体颉颃剂处理组、美洛托宁和MT受体颉颃剂组母猪卵母细胞复合物,利用试剂盒检测卵母细胞cAMP和cGMP含量。结果表明:当美洛托宁浓度为1×10~(-6)mol/L时,猪卵母细胞的分裂率和囊胚率均达到最高,分别为76.26%和31.48%,与空白对照组相比差异显著(P0.05);在成熟液中添加1×10~(-6)mol/L美洛托宁和1×10~(-6)mol/L MT受体激动剂,两组细胞极体排出率均较高,与空白对照组相比差异显著(P0.05),1×10~(-6)mol/L MT受体激动剂和1×10~(-6)mol/L美洛托宁的分裂率分别为75.16%和75.33%,囊胚率分别为30.04%和30.36%,与空白对照组相比差异显著(P0.05);在成熟液中添加1×10~(-6)mol/L的美洛托宁可以显著降低cAMP的含量和显著升高cGMP的含量(P0.05)。说明美洛托宁通过与细胞膜G蛋白偶联受体结合,从而抑制了cAMP合成,提高cGMP含量,进而促进猪卵母细胞成熟及早期胚胎发育。     

褪黑素对水牛卵母细胞体外成熟的影响及其受体介导机制的探究

旨在研究外源性褪黑素(melatonin,MT)对水牛卵母细胞体外成熟的影响及其受体介导机制。进行以下试验:1)通过免疫荧光技术检测了水牛卵丘细胞和卵母细胞上褪黑素的两种受体MT1和MT2的表达情况。2)在体外成熟培养液中添加不同浓度褪黑素(0、10^-9、10^-8、10^(-7 )mol·L^-1),观察褪黑素对水牛卵母细胞体外成熟及其随后体外受精胚胎发育的影响。3)根据褪黑素最优浓度,成熟液中添加不同处理组合:未处理组、褪黑素(10^(-8 )mol·L^(-1 )MT)、褪黑素受体拮抗剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU)、褪黑素受体激动剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )IIK7)、同时添加褪黑素受体拮抗剂和褪黑素(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU+10^(-8 )mol·L^(-1 )MT),处理卵母细胞24h后,统计卵母细胞第一极体排出率,并对第一极体的卵母细胞进行ELISA Kit检测,同时,成熟后的卵母细胞分别进行体外受精,并统计其分裂率和囊胚率。结果显示:1)在水牛卵丘细胞和卵母细胞上均发现有褪黑素受体MT1和MT2;2)褪黑素处理的各组卵母细胞成熟率均显著高于0 mol·L^-1组(P<0.05)。随后,各组受精后的分裂率也显著高于0mol·L^(-1 )MT组(P<0.05),而且10^-8和10^(-7 )mol·L^(-1 )MT组的囊胚率显著高于0mol·L^(-1 )MT组(P<0.05);3)褪黑素受体拮抗剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU)组的卵母细胞成熟率、体外受精胚胎分裂率和囊胚率与未添加组相比,差异均不显著(P>0.05);褪黑素受体激动剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )IIK7)组的水牛卵母细胞成熟率、体外受精胚胎分裂率和囊胚率均显著高于未添加组(P<0.05),但与褪黑素组(10^(-8 )mol·L^(-1 )MT)相比差异不显著(P>0.05);同时添加褪黑素受体拮抗剂和褪黑素(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU+10^(-8 )mol·L^(-1 )MT)组的水牛卵母细胞成熟率、体外受精后胚胎的分裂率和囊胚率与未添加组相比,差异不显著(P>0.05)。4)褪黑素处理组的卵母细胞内cAMP的含量显著低于未处理组,而cGMP含量显著高于未处理组(P<0.05)。综上表明,褪黑素通过与细胞膜G蛋白偶联受体MT1和MT2结合,从而抑制了cAMP合成,提高cGMP含量,进而促进卵母细胞成熟及早期胚胎发育。     

影响猪卵母细胞体外成熟的相关物理性因素

猪的研究是生物新技术中新的热点和经济增长点,猪的体外成熟是体外受精、性别控制、克隆及转基因等许多新技术成功与否的前提和关键,有许多物理方面的因素影响到猪的体外成熟。     

影响猪卵母细胞体外成熟的因素

猪卵母细胞体外成熟培养为胚胎体外生产、体细胞克隆等研究领域提供了大量廉价实验材料。本文就影响猪卵母细胞体外成熟的因素及其研究进展作简要综述。     

猪卵母细胞体外成熟培养的研究进展

猪卵母细胞体外成熟作为一种很重要的胚胎生物技术,具有重要的理论和实际意义。本文综述了猪卵母细胞体外成熟培养的发展历程、体外培养影响因素以及优化策略,为猪卵母细胞成熟培养提供参考依据。     

不同激活方法对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

研究了猪体外成熟卵母细胞的电激活、离子霉素激活和乙醇激活的方法。3种不同激活方法筛选试验表明,猪卵母细胞电激活最佳参数为电场强度130V/min,脉冲时程80μs的1次脉冲激活,即130V/mm-80μs-1次,其囊胚(发育)率为18.92%±8.48%(P>0.05);离子霉素激活的最佳条件为15μmol/L、激活时间40min,其囊胚率为21.27%±8.54%(P>0.05);乙醇激活最佳参数以9%乙醇激活处理3min,囊胚率为13.33%±7.64%。进一步对比试验表明,电激活和离子霉素激活处理的囊胚率和囊胚细胞数无显著差异(P>0.05),电激活的卵裂率明显高于乙醇激活(P<0.05),而囊胚率和细胞数差异不显著(P>0.05)。     

猪卵母细胞体外成熟的研究进展

综述了猪卵母细胞体外成熟的分子机理和影响因素,以期为后续工作奠定基础.     

猪卵母细胞体外成熟的研究

研究了培养时间和激素对猪卵母细胞体外成熟的影响.结果表明:以NCSU-23为基础培养基的成熟培养液对卵母细胞分别培养36h、40h、44h、48h, 在培养44h后,成熟率最高为81.4%; 不同激素培养,成熟培养液培养22h后置于无激素培养液中继续培养22h的成熟率最高;添加性腺激素培养的成熟率显著高于不添加性腺激素的(P<0.05).     

影响猪卵母细胞体外成熟的因素

猪卵母细胞体外成熟培养为胚胎体外生产、体细胞克隆等研究领域提供了大量廉价实验材料。本文就影响猪卵母细胞体外成熟的 因素及其研究进展作简要综述。     

影响猪卵母细胞体外成熟的因素

就影响猪卵母细胞体外成熟的因素, 如卵巢获取、卵母细胞来源、卵丘细胞、培养时间、培养条件基础培养基、激素、血清和卵泡液等, 及其研究进展进行了综述。     

猪卵巢卵母细胞的收集和体外成熟培养

实验对猪卵母细胞的采集和体外成熟培养(IVM)以及培养液进行研究。结果表明，在卵母细胞的采集过程中，机械破碎法平均每个卵巢所获得的A、B级细胞数(7.00，20.50)要显著多于抽吸法(1.48，2.73)(P＜0.05)。但抽吸法中平均每个卵巢所用的时间(1.05min)却显著少于机械破碎法(15.6min)(P＜0.05)。NCSU-23与TCM-199两种培养液对卵母细胞体外成熟率无显著差异(P＞0.05)。添加10μg／LrpGH比20μg／LrpGH更有利于卵母细胞的成熟(71.5％，45.5％)，两者差异显著(P＜0.05)。     

猪胚胎体外培养影响因素的研究

以孤雌激活胚胎为研究对象,对猪胚胎体外培养过程中的相关影响因素进行了探讨。体外成熟的猪卵母细胞经孤雌激活后,用添加0.5%牛血清蛋白(BSA)的NCSU-23(北卡罗来纳州立大学-23)培养基培养的囊胚率(36.7%)极显著高于添加5%、10%和15%胎牛血清(FCS)的NCSU-23(11.8%,18.5%和10.3%,P0.01)。在NCSU-23中添加一定比例的TCM-199(10%,25%和50%),虽然对猪卵母细胞孤雌激活后的分裂率无显著影响(89.6%vs87.0%,83.4%和82.6%,P0.05),但囊胚发育率随着TCM-199比例的增加而显著下降(30.1%vs25.0%,11.1%和1.1%,P0.05)。结果表明:培养液中添加BSA的猪胚胎体外培养效果优于添加FCS;猪胚胎的体外培养不需要成分复杂的培养液。     

猪卵母细胞体外成熟的影响因素

卵母细胞是胚胎工程和发育生物学的重要组成部分,它是体外受精、性别控制、克隆及转基因等技术成功与否的前提和关键。本文初步探讨猪卵母细胞体外成熟的影响因素。     

叶酸对猪卵母细胞体外成熟的影响

将体外收集的猪卵母细胞随机分成对照组和试验组(0、1、10、50μg/L),研究叶酸对猪卵母细胞GVBD率、成熟率和孤雌激活发育潜能的影响。结果表明,10μg/L叶酸能有效的促进GVBD发生、成熟率和激活胚的发育能力,与对照组相比具有上升趋势,其中成熟率显著提高(P0.05)。当叶酸质量浓度为50μg/L时,GVBD率、成熟率和激活胚的发育能力呈下降趋势,其中GVBD率(P0.05)和成熟率(P0.01)显著低于其他处理组。综上所述,叶酸能提高猪卵母细胞体外成熟效果,在本研究中以添加10μg/L叶酸效果最明显。     

亚牛磺酸对猪胚胎体外培养效果的影响

为了探讨亚牛磺酸的浓度对猪胚胎体外培养效果的影响,试验以孤雌激活胚胎为研究对象,将NCSU-23中的亚牛磺酸浓度从原来的5 mmol/L降低到2.5,1.0,0.5 mmol/L,检测猪卵母细胞激活后的分裂率和囊胚发育率.结果表明:各种浓度亚牛磺酸处理后的分裂率和囊胚发育率(30.7%、27.6%、22.8%、26.5%)差异不显著(P>0.05);但不使用亚牛磺酸则导致囊胚发育率极显著下降(30.7%vs1.4%,P<0.01).结果说明亚牛磺酸是猪胚胎培养液必不可少的重要成分,但其浓度可下调至0.5mmol/L.     

猪卵巢卵母细胞体外成熟体系研究进展

猪卵母细胞体外成熟培养中存在的问题是如何进一步提高卵母细胞的采集效率、急待解决的问题是成熟率不高和成熟质量差的问题。综合论述了猪体外受精技术所包含的猪卵母细胞体外成熟(IVM)培养和受精卵的体外培养两项密切相关的技术与方法，以及完善现有的成熟体系及成熟过程。     

猪卵母细胞的体外培养及死活鉴别

卵母细胞的体外培养主要着重两方面的研究,一方面研究和摸索各种培养基的理化条件对细胞的影响,寻找适合的培养基,另一方面以研究细胞的发育为主要目的,John,J.Eppig研究了几种培养系统中鼠卵母细胞的发育,Anderson和Epstein et al,指出,颗粒细胞对于卵母细胞的培养是不可缺少的。Lorrane Leibfried报道了培养过程中卵泡液和颗粒细胞对猪卵母细胞的成熟没有抑制作用。在不含血清的Dul-     

猪卵泡卵母细胞的体外成熟与体外受精

本试验对猪卵泡卵母细胞不同体外成熟培养时间、不同精子获能时间、不同精卵共孵育时间对体外受精的影响进行了研究。结果表明,体外成熟培养44 h左右,精子获能时间在1～2 h之间,精卵共孵育时间在6～8 h之间,受精后卵裂率最高。