毒害艾美耳球虫晚熟系生物学特性研究

本文对毒害艾美耳球虫晚熟系基本生物学特性进行了研究。结果表明，晚熟系的致病性与同等剂量中熟系的相当；繁殖能力高于中熟系，且每羽鸡的排卵囊总量与剂量成正相关，每个卵囊的繁殖能力与剂量成负相关；在同等剂量免疫下，晚熟系的免疫原性好于中熟系；2次免疫后，晚熟系免疫组的保护力与中熟系的相当，攻虫后卵囊繁殖减少率均在99％以上。     

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所，２００２３２）鸡感染球虫后会产生一种抵抗再次感染的免疫反应，这种免疫反应具有种的特异性，即感染某种球虫不能保护抵抗另...     

毒害艾美耳球虫鸡胚培养研究

为了建立毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)的鸡胚培养体系,用毒害艾美耳球虫子孢子分别接种8～11日龄鸡胚以确定最佳接种日龄,用不同剂量子孢子接种同一日龄鸡胚以确定最佳子孢子接种剂量,并在子孢子混悬液中分别加入不同剂量的胰岛素和叶酸以观察对球虫在鸡胚中发育的影响.结果显示,毒害艾美耳球虫子孢子接种9日龄的鸡胚,其卵囊产量(平均每只胚的卵囊量)和卵囊成熟率均为最高,成熟率达到99%;当每个鸡胚接种子孢子1×104个时,其卵囊产量最高;在子孢子混悬液中分别加入胰岛素1 000 U/mL、叶酸0.05 mg/mL,均能明显增加鸡胚中的卵囊产量.本文通过对毒害艾美耳球虫的鸡胚接种日龄、子孢子接种剂量、营养物质添加等因素的研究,初步建立了毒害艾美耳球虫的鸡胚培养体系.     

鸡胚接种毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix的免疫研究

给15、17、19日胚龄的鸡胚经羊膜腔分别接种不同剂量的毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子,出雏后在无球虫环境中笼养,收集2~7日龄间全部粪便,以饱和盐水漂浮法检查卵囊的产生,并于17日龄时以1.2×105个/鸡的同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、病变计分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果表明,孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种后对鸡胚的孵化率无明显影响,所有接种组在出雏后2~7日龄间均能检获后代卵囊,攻虫后各免疫组的相对增重率由攻虫对照的38%~42.9%提高到73.2%~90.5%,病变计分减少率达50%~74.9%,相对卵囊产量为攻虫对照组的28.1%~60.2%,表明以一定剂量的E.necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种鸡胚,可诱导鸡在出雏后笼养条件下对同源艾美耳球虫的免疫保护力;比较不同剂量、不同胚龄的免疫效果,发现在试验设定条件下于17日胚龄接种8×104个子孢子/胚的效果最好。     

鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察

为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的.     

饲料添加中草药抗毒害艾美耳球虫效果观察

选择90只1日龄蛋用公雏,随机分为6组:马杜毒素拌料组(Ⅰ组,添加量5 mg/kg饲料),克球粉拌料组(Ⅱ组,添加量125 mg/kg饲料),中草药处方①组(Ⅲ组,添加量10 000 mg/kg饲料),中草药处方②组(Ⅳ组,添加量10 000 mg/kg饲料),感染不给药组(V组),不感染不给药组(Ⅵ组).于无球虫条件下进行饲养,从1日龄起饲喂混有药物的饲料,除Ⅵ组外,其他各组在18日龄接种1×105个毒害艾美耳球虫孢子化卵囊,根据各组存活率、相对增重率、病变记分、血便记分和抗球虫指数观察药物的疗效,结果表明:Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅳ组有低效抗球虫作用,Ⅲ组有中效抗球虫作用.     

雏鸡感染毒害艾美耳球虫后的体液免疫

采用SPA菌体花环法、间接ELISA法和免疫组织化学法检测毒害艾美耳球虫（E．necatrix）感染雏鸡后，其血液免疫球蛋白含量、B细胞和免疫器官抗体生成细胞数量的动态变化。结果发现：①E．necatrix感染雏鸡后10d血液B细胞数量和IgG、IgM、IgA含量均开始增加，16～18d达到峰值；②感染雏鸡法氏囊、脾脏等免疫器官的抗体生成细胞数量于7～21d不同程度增加，14～18d达最高峰。结果表明，雏鸡体液免疫在抵抗E．necatrix感染中也发挥重要作用。     

毒害艾美耳球虫纯种卵囊收集鉴定及致病性测定

鸡球虫是养鸡业的一大疾病 ,严重阻碍着我国养鸡业的发展。在各种鸡病中 ,球虫病的发生率最高 ,占 1 /6～ 1 /5。Rose和 Long( 1 980 )报道英国养禽业因球虫病每年损失 5 5 0万英镑 ,其中一半是药物费用 ;在美国损失可能达到 5 0 0 0万英镑。 Rose和Long( 1 985 )保守地估计全世界养禽业每年球虫造成的损失为 5亿美元左右 ,其中 2 .5亿美元用于药费支出 [1]。中国是养鸡大国 ,养鸡数量居世界之首 ,但由于集约化程度低 ,饲养环境差 ,保健系统不完善因素的影响 ,球虫病所造成的损失 ,可能高于世界平均水平。球虫病所造成的经济损失至少 5 0 …     

毒害艾美耳球虫山西株的分离和鉴定

为了鉴定造成太谷区某鸡场57日龄蛋鸡死亡的鸡球虫种类,明确其生物学特性,本试验采用饱和食盐水漂浮法和单卵囊分离技术从病死鸡粪便中分离纯化得到1株球虫;将分离球虫口服接种SPF鸡,观察并测定卵囊最短孢子化时间、裂殖体寄生部位和大小、卵囊寄生部位和大小、潜隐期、死亡率、增重情况、肠道病变记分等指标,了解该虫株的生物学特点并初步鉴定其类型,随后采用序列特征性扩增区域(SCAR)标记技术进一步确定虫株类型。结果显示,分离虫株的裂殖体寄生于空肠,平均大小为(63.17±7.66)μm×(47.12±6.91)μm,卵囊仅盲肠可见,平均大小为(19.92±0.20)μm×(19.27±0.11)μm,虫株潜隐期为152 h,最短孢子化时间为18 h,接种5.0×10⁴个卵囊/羽和1.1×10⁵个卵囊/羽的分离虫株可分别造成40%和50%的实验鸡死亡,相对增重率下降至31.61%和20.87%,病变记分分别达到3.9和4.0;SCAR标记扩增显示,分离虫株与毒害艾美耳球虫(E.necatrix)的同源性达97.1%,命名为E.necatrix-CN-SX-...     

大量制备毒害艾美耳球虫配子体方法的研究

鸡经嗉囊接种毒害艾美耳球虫孢子化卵囊148 h后,从鸡小肠中段分离成熟的第二代裂殖子;经外科手术方法,将第二代裂殖子直接注入鸡盲肠内,使第二代裂殖子同步发育至配子体;手术后30 h剖检鸡,刮取盲肠黏膜,随后依次通过透明质酸酶消化、滤膜过滤、红细胞裂解、Percoll密度梯度离心等步骤,分离、纯化毒害艾美耳球虫配子体。结果显示,通过本方法分离、纯化的配子体纯度高、数量多,可用于基因转录组学、蛋白质组学、免疫学和疫苗等方面的研究。     

和缓艾美耳球虫早熟系选育及其生物学特性研究

按照Jeffers建立的艾美耳属球虫早熟系选育方法，对和缓艾美耳球虫涿州株(Eimeria mitis Zhuozhou strain，EmiZ)进行了早熟选育。经石歧杂肉仔鸡15次传代之后，EmiZ潜在期由96h缩短至77h，缩短了19h。选育出的和缓艾美耳球虫涿州株早熟系(Eimeria mitis Zhuozhou strain precocious line，EmiZP)在致病性与繁殖力上均较母株弱，但保留了母株的免疫原性。经EmiZP免疫的石歧杂肉仔鸡，可抵抗母株EmiZ的攻虫。对选育的早熟系EmiZP进行放松选择传代10代，其潜在期、排卵囊高峰、卵囊产量和致病性均保持了早熟系的特征，说明所选育的EmiZP已在遗传上保持了稳定。     

堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)早熟株与毒株的繁殖力和致病性比较试验

对经15代选育的堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)北京株的早熟株与其毒株的繁殖力和致病性进行了比较研究，证实早熟株的潜隐期比毒株缩短27h，繁殖力有所下降；对致病性的研究显示，早熟株感染后对鸡只增重的影响较小，而且肠道病变记分亦较毒株下降。由此认为，该早熟株符合球虫早熟株的基本生物学特性，适宜用于鸡球虫病早熟苗的制作。     

马杜霉素对柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)超微结构的影响

将马杜霉素按 0 .0 0 0 5 %的比例混入饲料 ,作用于鸡体内柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella) ,透射电镜观察 ,发现裂殖体变小 ,内含裂殖子的数目减少 ,裂殖子膨胀变为椭圆 ,裂殖子间 (带虫空泡内 )微管结构模糊、膨胀 ,裂殖体中有髓鞘样结构出现 ;细胞膜外突和细胞质分离形成空隙 ,细胞膜有破损、结构模糊 ;细胞质出现空泡化 ,内部出现附加体和髓鞘样结构 ;少数细胞核的外膜外突和内膜分离 ,有的部位的核膜模糊、破损。裂殖子顶体结构发生异常变化 ,棒状体消失 ,微线数目减少或者消失。线粒体表现为形态改变 ,肿大变圆 ,或者变为马蹄形 ,内膜和嵴脱落 ,内部形成空泡、膜状结构、螺旋状或者髓样结构 ,线粒体的嵴与长轴平行排列 ,且贯穿线粒体。作者推测 ,抗生素类抗球虫药的作用机理可能是 ,通过使虫体结构的完整性受损 ,抑制虫体的物质代谢及能量代谢等生理机能 ,达到杀死虫体或者抑制虫体生长、发育和繁殖的目的。     

一毒害艾美耳球虫田间分离株耐药性分析

用鸡体实验法,以相对卵囊产量(ROP)、病变记分减少率(RLS)、最适抗球虫百分数(POAA)和抗球虫指数(ACI)等4项指标,分析了一株毒害艾美耳球虫对复方磺胺氯吡嗪钠(20％磺胺氯吡嗪钠+4％二甲氧苄啶)、血痢宁(磺胺氯吡嗪钠可溶性粉)、贝尔球康(又称鸡球虫散,含青蒿、仙鹤草、何首乌、白头翁、肉桂等)、百球清(妥曲珠利)、马杜球败(马度米星铵预混剂)等5种抗球虫药的耐药性.结果显示:该株毒害艾美耳球虫对百球清无耐药性,对复方磺胺氯吡嗪钠和血痢宁有轻度耐药性,对贝尔球康无耐药性或轻度耐药性,对马杜球败有完全耐药性.提示该养殖场应停止使用马杜拉霉素,改用妥曲珠利或贝尔球康,但必须进行轮换用药或联合用药,以延长药物的使用寿命.     

海南霉素钠预混剂对鸡毒害艾美耳球虫的效力试验

为评价海南霉素钠预混剂对鸡毒害艾美耳球虫的疗效,采用人工感染的方式,选用180只鸡健康雏鸡,随机分为5组,每组30只。除不感染不给药组外,每组鸡均经嗉囊感染毒害艾美耳球虫孢子化卵囊2×10^4个。受试药物与对照药物均经混饲给药,海南霉素钠浓度为7.5mg/kg,莫能菌素浓度为100mg/kg,地克珠利浓度为1mg/kg,给药持续时间为10d,期间动物均自由采食。结果显示:海南霉素钠预混剂在防治爆发性球虫病时有良好效果,综合其对鸡人工感染毒害艾美耳球虫的临床症状(血便)、病变损害和卵囊的控制及增重等影响,海南霉素钠预混剂按推荐剂量7.5mg/kg连续使用10d,对鸡毒害艾美耳球虫有较好的疗效。     

毒害艾美耳球虫初次感染对雏鸡外周血液免疫功能的影响

应用免疫SPA菌体花环、间接ELISA及细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法对毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)初次感染雏鸡外周血液的T、B细胞数量及其对ConA或PMA的增殖功能和IgG、IgM、IgA含量的动态变化进行了较全面系统的研究。结果发现,E.necatrix初次感染雏鸡外周血液的T、B细胞数量及其相应增殖功能、血清中上述三种免疫球蛋白含量均不同程度地高于未感染的对照雏鸡,表明E.necatrix初次感染雏鸡外周血液的细胞免疫和体液免疫功能均明显提高。     

马杜霉素对不同虫株柔嫩艾美耳球虫超微结构的影响

鸡体内用5mg/kg马杜霉素作用于柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella)敏感虫株和抗药虫株，比较裂殖生殖阶段超微结构的差异。敏感株型裂殖体体积变小，所生成裂殖子的数目变小，裂殖子膨胀，裂殖子间（带虫空泡内）微管膨胀，结构模糊，有髓鞘样结构出现；限制膜外突和细胞质分离形成空隙，膜结构模糊，有破损；细胞浆空泡化，出现附加体和髓鞘样结构；少数细胞核的外膜外突和内膜分离，有的部位的核膜模糊、破损。首次发现裂殖子顶体结构发生异常变化，棒状体消失，微线数目减少或者消失；线粒体表现为形态改变，嵴脱落，内部形成空泡、膜状结构和髓鞘样结构，线粒体的嵴与长辆平行排列，且贯穿线粒体。抗药虫株没有发现异常变化。推理抗生素类抗球虫药的作用机理为破坏虫体结构和抑制虫体的生理机能两个方面；球虫对该类药物产生抗药性的机制是基因突变和药物选择的结果。