酸性α-淀粉酶高产菌株的原生质体诱变选育

[目的]以产酸性α-淀粉酶菌解淀粉芽孢杆菌B-5为出发菌株,通过对B-5原生质体进行紫外线诱变以达到提高产酸性α-淀粉酶活力的目的。[方法]在溶菌酶浓度为20 mg/ml,37℃酶解90 min条件下,原生质体制备率达到94%。然后经紫外线诱变处理,从中筛选水解圈与菌落比值较大者进行发酵,测定酸性α-淀粉酶活力。[结果]从大量突变菌株中筛选得到1株α-淀粉酶活力为267 U/ml的突变菌株UV-329,其产酶活力较出发菌株B-5提高了254.2%。[结论]利用紫外线对解淀粉芽孢杆菌B-5原生质体进行诱变是一种有效的微生物育种方法。     

枯草芽胞杆菌α-淀粉酶高产菌株的选育

以Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ１４１４０为出发菌株，经亚硝基胍反复多次处理和筛选，该菌α－淀粉酶酶活从８０００Ｕ／ｍｌ提高到３４２００Ｕ／ｍｌ，并探讨了一种高效的α－淀粉酶选育方法．另外在摇瓶培养过程中，探讨了培养基碳源、氮源对该菌株产酶特性的影响．     

低温淀粉酶高产菌株的诱变选育

以一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus a myloliquefaciens）A-4为出发菌株,采用紫外线（UV）和亚硝基胍（NTG）诱变,以期筛选出高产低温淀粉酶量诱变菌株;经紫外线诱变、亚硝基胍诱变、紫外线一亚硝基胍复合诱变,所得突变菌株经淀粉酶平板水解圈初筛、再经摇瓶发酵复筛,得高产低温淀粉酶突变株UNA46,其最大产酶量62．13U／mL,是出发菌株A-4的1．96倍;将UNA4-6连续传代6次,低温淀粉酶活性仍可达到第一代的99．7％,试验表明遗传稳定性好。     

淀粉酶高产菌株的诱变选育

以浙江建德筛选得到的芽孢杆菌为出发菌种,对其进行紫外诱变,硫酸二乙酯及两者交替诱变,采用碘淀粉显色法进行初筛,即在淀粉培养基平板上挑取H/C(透明圈直径与菌圈直径的比值)较大的菌株,对这些菌株进行摇瓶复筛,测定发酵液淀粉酶酶活性,获得遗传稳定的菌株B2一株,其酶活性为2.01 U/mL,比原有菌株提高1.31倍.     

1株酸性α-淀粉酶产生菌的鉴定及发酵条件优化

[目的]研究酸性α-淀粉酶高产菌株B-5的发酵特性并对B-5菌株进行细菌鉴定,为进一步挖掘该菌株的应用价值奠定基础。[方法]以B-5菌株为研究对象,通过菌体形态、菌落特征、生理生化特性以及16Sr DNA同源性分析对其进行菌种鉴定。以单因素法和正交试验法对培养基进行优化,确定B-5菌株的最适发酵条件。[结果]通过传统细菌鉴定方法和分子生物学方法将B-5菌株初步鉴定为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。以可溶性淀粉、玉米粉、小麦粉作为碳源时,都有利于B-5菌株产酶,从工业化生产降低成本的角度考虑,选用玉米粉作为发酵产酶的碳源。而以胰蛋白胨作为氮源时产酶活力最高,故选用胰蛋白胨作为发酵产酶的氮源。正交试验结果表明,2%玉米粉和2%胰蛋白胨的培养基组成最有利于发酵产酶,酶活为74.6U/ml。B-5菌株在60h时,发酵液中酶活力达到最高,随着时间的延长,酶活力逐渐降低。[结论]B-5菌株虽然产酶活力还有限,尚不能满足工业化生产的需要,但该菌株的酸性α-淀粉酶性质优异,通过对其菌种的鉴定则可以方便地获取该酸性α-淀粉酶的基因以尝试酸性α-淀粉酶的工程菌生产。     

耐热α-淀粉酶产生菌枯草芽孢杆菌抗噬菌体的选育

[目的]选育出耐热α-淀粉酶产生菌枯草芽孢杆菌抗噬菌体菌株。[方法]从耐热＊淀粉酶产生菌枯草芽孢杆菌菌株HA06的异常发酵液中分离到了2种噬菌体,将其命名为KB011、KB012。以枯草芽孢杆菌HA06为出发菌株,采用噬菌体、紫外线和MNNG复合诱变法选育具有抗性的高产突变株,并对突变株的遗传稳定性和发酵的酶活力进行了考察。[结果]获得了3株抗性株,将其命名为KSB04、KSB08、KSB14,它们在试验浓度下对噬菌体KB011、KB012具有明显的抗性,在整个培养过程中表现正常。而敏感菌株HA06的生长则受到明显抑制,并产生大量的噬菌体,培养液中噬菌体的浓度最高可达10^2pfu／ml以上。抗性株KSB04和KSB14有较好的遗传稳定性,在7次传代后酶活力仍在3500U／ml以上。[结论]获得了遗传稳定且发酵性能与出发菌相似的2株抗性株KSB04和KSB14。     

耐高温α-淀粉酶航天诱变菌株H-HTAA-340的选育及耐高温α-淀粉酶的研制

以美国引进的耐高温α－淀粉酶HTAA—340菌株为出发菌株,利用空间各种诱变因素对其进行航天诱变处理,成功地选育出一株性能优良的H－HTAA－340菌株。该菌株用于工业化生产比出发菌发酵单位平均提高了13％。对发酵、提取工艺进行了革新,降低了生产成本,缩短发酵周期30小时,高效回收了产品,提高了产品质量和档次,同时还对耐高温α－淀粉内的辞学特性进行了试验研究,为该酶应用提供理论依据。     

枯草芽孢杆菌B47高产拮抗物质菌株的紫外诱变选育

[目的]为选育对西瓜枯萎病病菌具更强抑制作用的新菌株。[方法]对从番茄茎内分离获得的内生枯草芽孢杆菌B47菌株进行连续2次紫外线诱变,并对诱变菌株的遗传稳定性和生理生化特性进行测定。[结果]筛选获得3株抑菌活性高于B47菌株的诱变菌株F303、F304、F305,经10代传代培养后,3株诱变菌株对西瓜枯萎病病菌的抑菌活性都有所下降,但F305的抑菌活性下降最小,遗传稳定性最好,在同等条件下其抑菌圈直径仍比野生菌株B47大5 mm。诱变菌株F305在36 h内处于对数生长期,在36~96 h内处于稳定期;最适宜生长温度为35℃;在浓度为1%~10%的钠盐中皆能生长,但以浓度为1%时生长最好,该菌株的生理生化反应与野生菌株B47的反应一致。[结论]该研究为利用B47菌株进行工厂化生产拮抗性物质产品和探讨防治西瓜枯萎病的新方法奠定了基础。     

利用紫外线和EMS诱变选育高产枯草芽孢杆菌

以豆豉溶栓酶产生菌株蜡状芽胞杆菌LD-8567为出发菌株,通过紫外线和甲基磺酸乙酯（EMS）的复合诱变选育高产枯草芽孢杆菌．用正交试验法优化EMS的诱变条件,得到最佳诱变条件,即在1mL体系中,EMS用量20μL,诱变时间20min,菌液浓度1×10^8个·mL-1,最终经过初筛和复筛得到了1株产酶活性较高的菌株,对该菌株连续传代发酵培养5代,发现其产酶能力稳定,酶活力保持在16351U·mL-1左右．     

蛋白酶高产菌株的紫外诱变选育

［目的］提高地衣芽孢杆菌B7的产蛋白酶能力。［方法］采用福林酚法测定酶活力,通过诱变育种试验和遗传稳定性试验选育出遗传性能稳定的蛋白酶高产菌株。［结果］紫外线照射时间为2 min,菌落的总致死率为62.47%。371株菌株的HC值变化小于5%,53株菌株的HC值正变大于5%,76株菌株的HC值负变大于5%。正变大于10%的12株菌株的HC值是出发菌株的1.18-1.34倍。所有变异株的蛋白酶活力均显著高于出发菌株,其中菌株B720和B749的蛋白酶活力达50 U/ml,比出发菌株提高了40%以上。经过复筛得到菌株B7 49,诱变前后其最高酶活分别为33.97和50.29 U/ml。遗传稳定性试验中菌株B749的蛋白酶活力变化小于10%。［结论］该试验成功选育出的遗传性能稳定的蛋白酶高产菌株B749可用于发酵法制备大豆肽。     

枯草芽孢杆菌α-淀粉酶基因的克隆及表达

采用鸟枪法克隆到了枯草芽孢杆菌α－淀粉酶基因,试验证实,已报道的α－淀粉酶的基因大小为２ｋｂ左右,因此回收３￣７ｋｂ的目的片段较适宜,对质粒去磷可防止自连,并能显著提高外源片段的连接效率,采用扩大酶连的方法有助于酶连产物的进一步提高,高效感受态比普通感受态构建基因文库效率要高２个数量级。高效,快捷的鉴定α－淀粉酶的筛选培养基是克隆α－淀粉酶基因必不可少的条件。     

一株碱性高温α-淀粉酶产生菌的分离鉴定及其酶学性质初步研究

[目的]从乌鲁木齐地区啤酒厂、面粉厂、酱醋厂等地采集的酒渣、麸皮和酱渣中筛选淀粉酶产生菌.[方法]筛选采用可溶性淀粉培养基和K-KI染色;酶活测定采用硝基水杨酸法;菌株鉴定使用法国梅里埃细菌自动鉴定仪.[结果]得到9株酶活较高的淀粉酶产生菌,其中1株编号为A-1的菌株酶活最高达28.17 U/mL,生理生化反应鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus.subtilis );并对其酶学性质研究表明,该淀粉酶的最适温度为90℃,最适pH为8.0,最适碳源为玉米粉,最适氮源为黄豆粉.[结论]该菌株为碱性高温淀粉酶产生菌.     

产淀粉酶芽孢杆菌高产菌株的筛选

试验选用10株芽孢杆菌,对其产淀粉酶的能力进行了测定,测定方法分初选（染色法）和复选（3,5-二硝基水杨酸显色法）两步。结果表明,其中9株菌具有产淀粉酶能力,以编号为Pab03、Pab02的两株枯草芽孢杆菌的产酶活性最高,在未优化发酵条件的前提下,酶活力分别达到31．331和21：521U,作为新型的消化酶饲料添加剂显示出广阔的应用前景。     

紫外辐照对产α-ALDC枯草芽孢杆菌的诱变效应

采用紫外诱变(波长260nm,功率15w)对一株产α-乙酰乳酸脱羧酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS059菌株进行诱变处理。结果表明,在紫外辐照时间为50s时,诱变效果较好。从正突变菌株中反复筛选,得到两株产酶量较高的菌株BS059-15和BS059-22,比原出发菌株的酶活分别提高了107.62%和162.25%。经过连续传代试验,证明其遗传性状稳定,为可遗传变异。     

地衣芽孢杆菌WB-11菌株耐高温α-淀粉酶的酶学特性

从地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis )中分离到一α 淀粉酶组分 ,经PAGE及SDS PAGE检测为电泳均一的纯酶蛋白。该酶最适反应温度为 95℃ ,5 0和 70℃条件下酶活性稳定 ,90℃保温 30min残余酶活力为 2 8 9%。该酶最适作用pH为 6 0～ 6 5 ,在pH 5 0～ 8 0内稳定。酶的相对分子质量为 6 5 90 0 ,等电点 6 94 ,对可溶性淀粉的Km 值为 0 4 1mg·mL-1 。Ca2 + 、Mn2 + 、Cu2 + 、Co2 + 及Ba2 + 对酶具有激活作用 ,其中Ca2 + 激活作用最显著 ,且以 4～ 8mmol·L-1 浓度为最适。Ca2 + 还能显著提高酶的热稳定性 ,4mmol·L-1 Ca2 + ,90℃保温 30min ,酶的残余活力提高至 83%。     

枯草芽孢杆菌86315α-淀粉酶的研究 Ⅱ.分离提纯、性质及动力学

采用壳聚糖絮凝、淀粉吸附、乙醇沉淀等步骤,从枯草芽孢杆菌86315发酵液中提取了α-淀粉酶,然后用Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-纤维素柱层析进一步提纯,得到DISC-电泳一条带的α-淀粉酶制剂。用SDS-PAGE测出其分子量为54000。用等电聚焦测出其p~1为5.2。动力学实验表明:最适温度60℃;最适pH5.6;对可溶性淀粉的Km值是3.0mg/ml;Ca~(2+)、Mg~(2+)、Ba~(2+)对α-淀粉酶活性稍有激活作用;Mn~(2+)不影响酶活性;Fe~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)、Ag~(1+)、甲醛、EDTA以及戊二醛都明显抑制酶活性。该酶在50℃以下是稳定的,pH稳定范围是5.6～8.8,对60％乙醇有高度的稳定性,易被尿素变性。     

耐酸性α-淀粉酶的研究进展

概述了耐酸性α-淀粉酶的产生菌的来源、先进的粗酶分离纯化技术以及酸性α-淀粉酶的特性,介绍了国内外获得高产酶菌株的研究进展并阐述了耐酸性α-淀粉酶的应用潜力和开发前景。     

紫外线诱变高产黄原胶菌株

文章探索黄单胞菌的紫外线诱变和紫外线-亚硝酸钠复合诱变条件;经紫外线照射时间为40S,照射距离为40cm的低照射剂量诱变,再进行亚硝酸钠复合诱变,获得一株正变菌株46-7菌株,该46-7菌株摇瓶发酵的黄原胶产量达到2.33g/L,比出发菌株增产5.9%。     

紫外线对枯草芽孢杆菌生产菌株的诱变与筛选

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种革兰氏阳性菌,具有种类多、分泌蛋白能力强、安全性好等优点,是一种重要工业酶和工业制剂的菌种,被广泛应用于医药、食品、农业、饲料、造纸和纺织等多种领域。为了进一步提高枯草芽孢杆菌的发酵能力,采用紫外线照射的方法诱导筛选高产菌株。对通过紫外线诱导提高枯草芽孢杆菌产淀粉酶、蛋白酶、α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,简称α-ALDC)、3-羟基丁酮(Acetoin)和葡萄糖-1-磷酸(Glucose-1-phosphate,简称G-1-P)能力的条件进行了比较。