几种中药粗提物对鸡胚成纤维细胞生长的影响

为筛选抗IBDV方剂的主药,采用组织培养方法,测试了黄芪、连翘等8种中药粗提物在体外鸡胚成纤维细胞(CEF)上的最大安全浓度及其对CEF增殖、存活时间的影响。结果显示,黄芪对CEF基本无毒性作用,最大安全浓度为25mg/ml,而连翘等其余7种中药粗提物则表现出较大的毒性作用,最大安全浓度极低,同时,黄芪对CEF还具有较强的促生长和延长存活时间的作用。因此,筛定黄芪作为抗IBDV方剂的主药。     

siRNA对鸡胚成纤维细胞中GAPDH基因表达的抑制作用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过短双链RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性抑制相应基因表达的新技术。作为研究基因功能的有效手段,该技术已在线虫、果蝇、斑马鱼和鼠等动物中进行了应用。本研究利用体外转录合成的短双链干扰RNA(siRNA),针对鸡的管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH),在鸡胚成纤维细胞中对其表达进行干扰。结果显示siGAPDH能有效阻断GAPDH基因在鸡胚成纤维细胞中的表达,而不相关的siRNA则对该基因的表达没有影响,证明在鸡细胞中也存在RNA干扰现象,为利用RNAi技术对鸡的基因功能研究奠定了一定基础。     

12种藏药对鸡法氏囊病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

藏医藏药有着独特的理论体系,在世界医学中独树一帜,是仅次于中医中药而有系统理论的民族医药.     

鸡胚成纤维细胞培养的组织块贮存时间测试

鸡胚成纤维细胞培养的组织块贮存时间测试王立群，聂晶（东北农业大学生物工程系哈尔滨１５００３０）（哈尔滨市职工医学院）宣世纬（东北农业大学生物工程系哈尔滨）ＴＥＳＴＯＮＤＵＲＡＴＩＯＮＯＦＳＴＯＫＩＮＧＴＩＳＳＵＥＦＯＲＣＵＬＴＵＲＩＮＧＣＨＩＣＫＥＮ...     

聚肌胞诱导鸡胚成纤维细胞和鸡胚及肉鸡抵抗新城疫病毒感染的研究

为探讨多聚核苷酸(聚肌胞)对新城疫病毒(NDV)的抑制作用,本研究通过聚肌胞对感染NDV的鸡胚成纤维细胞、SPF鸡胚和肉鸡进行了病毒抑制试验.结果显示:125和250 靏穖L-1的聚肌胞溶液能明显抑制100倍 TCID50的NDV在鸡胚成纤维细胞上的繁殖;5 mg·mL-1的聚肌胞溶液(每个胚0.1 mL)能明显抑制NDV在SPF鸡胚中的繁殖,减轻NDV对鸡胚生长的抑制作用,降低病毒血凝效价和鸡胚死亡数.聚肌胞对肉鸡抵抗NDV感染试验结果显示,肌肉注射0.01 mg·kg-1的聚肌胞注射液能明显提高治愈率和显效率.但反映细胞活性状态的中性红染色(D570值)随着聚肌胞浓度的增大而变小的结果说明,聚肌胞对鸡胚成纤维细胞的增殖有一定程度的抑制.     

16种四川道地药材对鸡胚成纤维细胞生长的影响

该实验通过MTT法观察丹参、川木香、菊花、川郁金、川黄柏、川佛手、川牛膝、川莪术、川明参、川续断、川麦冬、川白芷、川芎、杜仲、川党参和乌梅等16种四川产道地药材对体外培养的鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全体积质量分数,并观察各种中药提取液对CEF增殖的影响.结果表明以上各种药材的最大安全体积质量分数:川黄柏为3.907mg/L,丹参、川木香、川续断和川党参均为7.813mg/L,菊花为15.625mg/L,杜仲、川佛手、川麦冬、川芎和白芷均为31.25mg/L,川郁金、杜仲、川乌梅和川牛膝均为62.5mg/L,川明参为1 000mg/L.当川郁金在1.954～31.25mg/L,川牛膝在3.907～31.25mg/L,川明参在1.954～500mg/L,川续断在1.954～3.907mg/L,川麦冬在1.954～15.625mg/L,杜仲在1.954～31.25mg/L的体积质量分数范围内可显著促进细胞生长.     

鸡胚成纤维细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建和鉴定

构建鸡胚成纤维细胞(CEF)T7噬菌体表达型cDNA文库,为筛选和研究CEF上病毒受体分子奠定基础。提取纯化CEF的mRNA,反转录合成双链cDNA,补平末端,连接EcoRⅠ/HindⅢ接头,双酶切,凝胶过滤层析除去小于400bp的cDNA片段,合成双链cDNA定向与T7噬菌体左右臂连接,体外包装后建成cDNA表达文库。测定文库大小、重组率,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小。结果表明,构建的cDNA文库滴度为2.2×107pfu/mL、扩增后滴度为3.5×1010pfu/mL,重组效率达98%、插入片段多在0.4～3kb之间,平均插入片段长约1.3kb。表明所建文库具有很高的质量,从而为筛选目的cDNA克隆奠定了基础。     

siRNA干涉禽流感病毒PA基因在鸡胚成纤维细胞中的表达

用阳离子脂体质转染试剂将人工合成的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)转染鸡胚成纤维细胞(CEF).结果表明,针对禽流感病毒(AIV)H5N1亚型核蛋白(NP)基因的siRNA能在AIV感染后1,2,3 h显著抑制NP基因的表达,表达水平分别降低3,1.4和2.5倍.     

马立克氏病毒感染致鸡胚成纤维细胞4号染色体上微卫星不稳定性研究

应用微卫星技术对感染马立克氏病毒5 d后的32个鸡胚成纤维细胞(CEF)4号染色体上的20个微卫星标记进行PCR扩增,扩增产物采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染检测.试验结果显示:20个微卫星标记有18个表现出不同程度的微卫星不稳定性,其中ABR0622发生率最高,为37.50%;MCW0174、ADL0266和ABR0382的发生率较高,均为31.25%.在32组样品中有30个检测到微卫星不稳定性,其中11号样品发生率最高,为45.00%,其次是3号样品为35.00%.结论:CEF感染马立克氏病毒后出现微卫星不稳定性现象.     

利用雉鸡胚成纤维细胞制造鸡马立克氏病疫苗的研制与应用

采用经检测无鸡新城疫、鸡痘、鸡马立克氏病、鸡支原体、鸡沙门氏菌、禽白血病等致病性微生物感染的11日龄雉鸡胚、10日龄普通京白鸡胚以及SPF胚制成鸡胚成纤维细胞，然后接种火鸡疱疹病毒(HVTFc-126)制成冻干疫苗各50万羽份。将以上3种鸡胚疫苗同时进行蚀斑计数、特异性检测和安全检验，发现除普通鸡胚苗轻度污染外源病毒外，其它各项检验均符合标准，而且雉鸡胚苗保护率高于普通京白鸡胚苗20％以上，低于SPF胚苗10％左右。     

紫苏叶注射液的制备

[目的]提取紫苏叶中有效成分迷迭香酸,研究紫苏叶注射液的制备工艺及质量控制,为血液流变学药物的开发和临床应用提供试验依据。[方法]以紫苏叶粗粉(40μm)为原料,热水浸提,酸化处理,制备成紫苏叶水提物;以乙酸乙酯为溶剂萃取水提物中迷迭香酸,旋转蒸干乙酸乙酯制成粗品;调节pH值,分离纯化后制备成紫苏叶注射液。采用高效液相色谱法(HPLC)检测注射液中迷迭香酸的含量,根据《中国药典》(2005年版)规定检测注射液的鞣质、树脂、草酸盐含量是否超标,测定该注射液的稳定性、刺激性、溶血性、凝集性、LD50和热源性等。[结果]注射液中迷迭香酸含量为2.81 mg/ml,LD50为406.82 mg/kg,其他检查指标均符合药典规定。[结论]试验所制备的紫苏叶注射液质量稳定,符合注射要求。     

紫苏叶注射液的制备(英文)

[Objective] To extract the effective component rosmarinic acid from Folium perillae,study preparation technology and quality control of rosmarinic acid injection and provide test basis for hemorheological drug development and clinic application.[Method]The coarse powder of Folium perillae(40 μm)was lixiviated with hot water and acidized to make aqueous extracts.Rosmarinic acid from the aqueous mixture was extracted with Ethyl Acetate.And Et Ac was evaporated to obtain primary product.The injection was purified by pH adjustment.Concentration of rosmarinic acid in the injection was detected by high performance liquid chromatography(HPLC).Contents of tannin,resin and oxalate were eliminated according to the Chinese Pharmacopeia(2005 edition).Stability,irritation,haemolyticus,LD50 and thermogenic substance of this injection were also detected.[Result]The content of rosmarinic acid in Folium perillae injection is 2.81 mg/ml,and the content of LD50 was 406.82 mg/kg.This injection was consistent with the stipulation of Chinese Pharmacopeia(2005 edition).[Conclusion]The preparation technology of this experiment was reasonable.The stable qualities of the prepared injection meet the injection requirement.     

鸡胚胎代用蛋壳及异体胚盘移植孵化的研究

对鸡胚胎蛋壳培养的研究结果显示 :( 1 )在± 4 5°的转角下 ,不同体积的代用蛋壳的胚胎发育率 ,普通蛋代用蛋壳前 6d的胚胎发育率 ( 48.5% )显著高于双黄蛋代用蛋壳 (平均 2 2 .7% ) ,但是 ,双黄蛋代用蛋壳的孵化率 ( 8.3 % )显著高于普通蛋代用蛋壳。普通蛋代用壳无小鸡孵化 ,说明普通蛋壳对于移植等量鸡胚后期的发育空间不够。( 2 )双黄蛋作为代用壳时 ,可以不添加任何物质。( 3 )换蛋壳培养鸡胚胎 ,转蛋角度± 4 5°比± 3 0°的效果要好。异体胚盘移植结果显示 :同一动物间的同功物质具有通用性 ,异体胚盘移植鸡胚可以继续发育。     

潮阳草鸡胚胎成纤维细胞的体外培养

以潮汕地区地方优质鸡种——潮阳草鸡胚胎组织为材料,采用组织块贴壁培养法进行了成纤维细胞的体外的原代培养和传代培养.结果表明,实验在体外成功培养了成纤维细胞,并进行了传代和冷冻保存,复苏后细胞的存活率仍达到90％以上,为潮阳草鸡的育种在细胞学方面提供了一定的科学依据.     

红芪多糖注射液鸡胚接种抗鸡新城疫病毒研究

用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药红芪多糖注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用。结果表明,中药红芪多糖注射液对鸡胚无毒性作用。红芪多糖注射液与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城病毒在鸡胚中增殖。     

小鼠胎儿和牛睾丸成纤维细胞的冷冻保存

研究了冷冻保护液、平衡时间、降温速度、解冻液以及解冻方式对冷冻小鼠胎儿成纤维细胞和牛睾丸成纤维细胞活力的影响。结果表明,对小鼠胎儿成纤维细胞和犊牛睾丸成纤维细胞进行冷冻,冷冻液Ⅱ（０．４％ＢＳＡ）＋１．５ｍｏｌ／Ｌ乙二醇＋０．１ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的ＰＢＳ液）的冷冻效果优于冷冻液Ⅰ（１０％的ＮＢＳ＋１０％ＤＭＳＯ的ＤＭＥＭ液）。用冷冻液Ⅱ对小鼠胎儿成纤维细胞和犊牛睾丸成纤维细胞进行冷冻,平衡时间可从２．     

鸡胚脑垂体及脑上腺的组织发生

鸡胚漏斗的原基最早发生于前脑底壁,后移行于间脑底壁,漏斗的管壁最后分化成垂体的神经部。拉克氏囊的原基最早发生于原口顶壁呈直管状,后分化成分支管泡状及滤泡状,滤泡壁由嗜酸及嗜碱性细胞组成,滤泡间有嫌色细胞及窦状隙形成垂体的远侧部。部分嫌色细胞转移到漏斗基部形成垂体的结节部。最后部分嫌色细胞团又移行组成垂体的中间部。鸡胚脑上腺的原基最早发生于间脑背面,由短管状分化成管泡状及滤泡状,滤泡壁由复层柱状纤毛上皮组成。最后被膜伸入实质分成许多小叶,每小叶有1～2个滤泡腔,直至出壳结构类似。