不同抗冻剂和冷冻—解冻方法对绵羊胚胎冷冻效果的研究

<正> 前言 到目前为止,国外研究绵羊胚胎冷冻并获得活的后代的有:Moor,N.W.(1976);Willadsen,S.M.(1977);Willadsen,S.M.(1976)。牛、羊胚胎冷冻一解冻后,存活率的变化幅度很大,多数移植成活并发育至产出活仔畜的数量约占全部冷冻胚胎数的35％。 哺乳动物胚胎冷冻过程中,不同抗冻剂配合使用不同的冷冻—解冻方法,对冷冻胚胎解冻后的存活率有明显的影响。目前很多学者对抗冻剂及冷冻和解冻方法进行了大量     

不同精液冷冻程序对杏花鸡精液冷冻效果的影响

本试验选择BPSE(Blesville Poultry Semen Extender)作为精液稀释液,以二甲基乙酰胺(dimethylacetamide,DMA)和乙二醇(ethylene,EG)2种试剂作为抗冻剂,分别以不同的质量浓度进行组合,对杏花鸡精液冷冻保存的平衡时间、冷冻方式和解冻温度以及时间等影响精液冷冻效果的关键因素进行了研究。结果如下:(1)质量浓度分别为4%DMA和6%EG的抗冻剂对精液保护效果较好,精子冻后活力分别为0.466和0.464,两者之间差异不显著;(2)选择质量浓度为6%EG为抗冻剂,平衡8 min后的精子活力最高,为0.542;(3)在(2)的基础上,选用颗粒冷冻和细管冷冻2种方式冷冻,分别在水浴锅里以40℃、55℃、70℃3个温度解冻。结果表明,用颗粒冷冻在55℃水浴锅里解冻的精子活力最高,为0.482;(4)采用颗粒冷冻和细管冷冻2种方式对新鲜精液冷冻解冻后与新鲜精液一起进行人工授精,捡蛋入孵后统计受精率,细管冷冻、颗粒冷冻以及鲜精的受精率为0、0和92.52%。结论:在本试验中,以6%EG为抗冻剂,在5℃下平衡8 min,用颗粒冷冻的方法在55℃恒温水浴箱内解冻可以使解冻后的精子达到最大的存活率;授精试验效果不佳,表明该程序虽然可以使精子存活,但是对精子有损害作用。     

海藻糖对牛未成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响

【目的】研究胞外冷冻保护剂海藻糖对玻璃化冷冻-解冻后牛未成熟卵母细胞形态、活性线粒体分布和核成熟的影响。【方法】将未成熟卵母细胞随机分为新鲜组、不同浓度海藻糖(0.25、0.5和1 mol/L)组和0.5 mol/L蔗糖组共5组。新鲜组作为玻璃化冷冻的对照组,海藻糖和蔗糖组均采用两步法进行玻璃化冷冻和解冻处理。在冷冻的第1步不添加海藻糖和蔗糖,在冷冻的第2步和解冻的第1步分别添加对应浓度的海藻糖和蔗糖,在解冻的第2步海藻糖和蔗糖浓度均减半。解冻后,统计卵母细胞形态正常率;用JC-1染色检测卵母细胞的活性线粒体分布区域和荧光强度;体外成熟培养24 h后,统计卵母细胞的核成熟率。【结果】玻璃化冷冻组卵母细胞的形态正常率和核成熟率均显著低于新鲜组卵母细胞(P<0.05),0.5 mol/L海藻糖组卵母细胞形态正常率和核成熟率均显著高于0.5 mol/L蔗糖组及0.25和1 mol/L海藻糖组(P<0.05);0.5 mol/L海藻糖组卵母细胞的活性线粒体均匀分布在细胞膜内侧区域,在绿光和蓝光下分别呈现强的红色荧光和黄绿色荧光,且荧光强度高于其他玻璃化冷冻组卵母细胞,但仍低于新鲜组...     

肌醇类冰晶抑制剂和海藻糖对山羊精子冷冻保存效果的影响

为进一步降低冷冻解冻过程对山羊精子的理化损伤,本试验系统检验了肌醇类冰晶抑制剂(SIB)和海藻糖对山羊精子的冷冻保护效果。采用假阴道法采集6只云南黑山羊精液,离心洗涤去除精浆后和冷冻稀释液混合,经4℃平衡、液氮气相预冻后直接投入液氮保存。解冻后检测精子活力、顶体、质膜以及低渗耐受性。同时采用透射电镜(TEM)观察冷冻对精子超微结构的影响。结果表明:1,4-环己二醇(1,4-CHD)和海藻糖处理组精子活力(41.35%±8.14%和43.59%±6.23%)、顶体完整性(62.73%±7.62%和64.29%±7.81%)和低渗耐受性(40.29%±7.41%和39.79%±6.58%)均显著高于对照组(35.97%±6.21%、55.46%±8.91%和34.17%±5.68%,P0.05),且海藻糖可以有效抑制冷冻解冻过程导致的精子凋亡。流式分析结果表明,1,4-CHD不能降低冷冻对山羊精子质膜完整性和磷脂酰丝氨酸(PS)分布的损伤,但是海藻糖可以显著降低冷冻解冻过程中对山羊精子质膜的损伤。电镜结果表明,冷冻对精子质膜和顶体等结构损伤严重,解冻后部分精子质膜发生肿胀、脱落或断裂等现象。而且,顶体外膜存在脱落现象,顶体内容物发生部分甚至完全泄漏。电镜结果进一步证实海藻糖对冷冻精子质膜的保护效果要优于1,4-环己二醇。总之,肌醇类SIB和海藻糖可以降低山羊精子的冷冻损伤,但相对于海藻糖而言,肌醇类SIB并不能降低冷冻对山羊精子质膜的损伤。     

精液解冻时抗冻剂的保护特性

在养牛业中已广泛利用公牛的冷冻精液,但还需要经常研究和改进精液解冻的方法。冷冻保存精液的效果不仅与冷冻有关,也与解冻有关。研究最适宜的解冻条件,是提高精子质量的重要问题,因为,在解冻时精子细胞也容易受损伤。已有的文献一般只报道抗冷冻剂在冷冻过程中的保护作用。本研究是为了弄清用不同抗冻剂保存的冻     

海藻糖对冻藏渤海对虾抗冻保水的影响

研究取渤海对虾作为原料,分别以肌原纤维蛋白表面疏水性、盐溶性蛋白含量、解冻损失率和Ca~(2+)-ATP酶活性作为检测的指标。结果表明,试验中加入40、60及80 g/L海藻糖的对虾虾仁在冻藏6周后,对虾解冻损失率有明显的下降且可有效减缓Ca~(2+)-ATP酶活性的降低。60 g/L质量浓度的海藻糖溶液可有效降低肌原纤维蛋白表面疏水性和盐溶性蛋白含量。添加海藻糖能有效提高对虾肌原纤维蛋白的抗冻性及保水性,综合考虑,添加60 g/L海藻糖溶液时对虾抗冻性及保水性效果最好。     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术对于动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流具有重要意义,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年,英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功。此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。然而,在胚胎冷冻和解冻过程中都存在许多会使胚胎受到损伤的因素,如:抗冻保护剂的毒性,冷冻损伤,细胞内冰晶的形成,破裂损伤,渗透压引起的膨胀。因此,使用不同的冷冻和解冻法应避免或减少胚胎受到损伤,以提高胚胎解冻后的存活率。1抗冻保护剂和冷冻溶液在哺乳…     

现场条件下几种绵羊冻精稀释液的冻精效果比较

在现场条件下进行绵羊精液冷冻。采用国内常用的四种稀释液：１、葡萄糖,柠檬酸钠;２、乳糖,葡萄糖,柠檬酸钠;３、乳糖;４、乳糖,葡萄糖。４种稀释液均以甘油为抗冻剂,１、２和４组采用１步稀释法,３组采用２步稀释法,然后进行细管冷冻。并进行鲜精、平衡后和解冻后的活力检查。３组和４组精解冻后活率为０．４,并用于现场生产。     

不同储藏温度和时间对长白猪肌肉pH、失水率及脂质氧化的影响

研究测定了长白猪屠宰后12h肌肉pH的下降速度、极限值和肌间脂肪氧化速度,及不同储藏温度和时间对肌肉pH值、失水率及脂质氧化的影响。结果表明:屠宰后0～5h长白猪肌肉pH值下降速度较快,9～12hTBA值变化速度较快。4℃条件下,储存时间对长白猪肌肉pH影响不显著,对滴水损失影响极显著,TBA值影响显著;-20℃冷冻条件下,储存时间对长白猪肌肉pH、TBA影响显著,对解冻失水率影响不显著。温度对pH值和TBA值的影响不明显,对滴水损失和解冻失水率有极显著的影响。通过回归分析,长白猪肌肉滴水损失和解冻失水率随pH升高而降低;-20℃条件下TBA值随pH升高而升高。     

山羊胚胎冷冻保存技术研究

本研究探讨了不同抗冻保护剂、不同冷冻方法、玻璃化液(EFS40)中添加FCS和BSA,以及冷冻前细胞松驰素B处理对山羊胚胎冷冻保存效果的影响。结果表明,山羊胚胎常规冷冻时以1.5 mol/L EG为抗冻保护剂的保护效果最好,解冻后胚胎发育率为70.59%,孵化率为58.82%;玻璃化冷冻细管法和OPS法以EFS40为保护液的冷冻效果较好,其解冻后胚胎的发育率分别为67.57%和52.94%;EFS40中添加BSA的冷冻保护效果显著地高于不添加其他成分的EFS40;山羊胚胎冷冻前用细胞松驰素B处理,能提高冷冻保存的效果。