抗猪伪狂犬病毒免疫球蛋白(Ig)研制试验与检测结果

本试验用配有佐剂的伪狂犬病毒抗原,按特定基础免疫与强化免疫程序接种关中毛驴,用两次盐析法沉淀提取抗猪伪狂犬病毒Ig,其中对提纯工艺所涉及的PH值,温度,硫酸铵浓度等进行探索比较,继之对单位体积内的蛋白浓度,酶标抗体效价和稀释度进行了标化,同时对质量检测进行了平行性分析,本实验以陕西关中毛驴作为免疫反应供浆动物;研制用于预防和治疗抗猪伪狂犬病免疫球蛋白(Ig)生物制剂获得理想结果犤1-4犦。经8省(区)、市试用后,深受用户和兽医防疫部门的一致好评和欢迎。     

抗猪伪狂犬病毒免疫球蛋白（Ig）研制试验与检测结果

本试验用配有佐剂的伪狂犬病毒抗原，按特定基础免疫与强化免疫程序接种关中毛驴,用两次盐析法沉淀提取抗猪伪狂犬病毒Ig，其中对提纯工艺所涉及的PH值，温度，硫酸铵浓度等进行探索比较，继之对单位体积内的蛋白浓度,酶标抗体效价和稀释度进行了标化，同时对质量检测进行了平行性分析，本实验以陕西关中毛驴作为免疫反应供浆动物；研制用于预防和治疗抗猪伪狂犬病免疫球蛋白(Ig)生物制剂获得理想结果^[1-4]。经8省(区)、市试用后，深受用户和兽医防疫部门的一致好评和欢迎。     

抗猪伪狂犬病毒免疫球蛋白（Ig）研制试验与检测结果

本试验用配有佐剂的伪狂犬病毒抗原，按特定基础免疫与强化免疫程序接种关中毛驴，用两次盐析法沉淀提取抗猪伪狂犬病毒Ig，其中对提纯工艺所涉及的pH值，温度，硫酸铵浓度等进行探索比较，继之对单位体积内的蛋白浓度，酶标抗体效价和稀释度进行了标化，同时对质量检测进行了平行性分析，本实验以陕西关中毛驴作为免疫反应供浆动物；研制用于预防和治疗抗猪伪狂犬病免疫球蛋白（Ig)生物制剂获得理想结果。经8省（区）、市试用后，深受用户和兽医防疫部门的一致好评和欢迎。     

关中驴抗猪瘟病毒IgG制备工艺及质量监控研究

本实验用配有佐剂的猪瘟病毒抗原，按特定基础免疫与强化免疫程序接种关中毛驴，用两次盐析法沉淀提取抗猪瘟病毒IgG，其中对提纯制备工艺所涉及的pH值，温度，硫酸铵浓度等工艺进行探索比较。继之对单位体积内的蛋白浓度，酶标抗体效价和稀释度进行了标化，同时对质量监控进行了平行性分析。本实验以陕西关中毛驴作为免疫反应供浆动物；研制用于预防和治疗猪瘟的抗病毒免疫球蛋白（IgG)生物制剂获得理想结果。经6省，市，区试用后，深受用户和兽医防疫部门的一致好评和欢迎。     

关中驴对6株动物病毒抗原的免疫应答试验

以关中驴为试验动物 ,用猪瘟病毒(HCV )、犬细小病毒 (CPV )、兔瘟病毒(RHDV)、鸡新城疫病毒 (NDV)、伪狂犬病毒(PRV)等病毒进行免疫 ,检测所产生的抗体效价 ,并与猪、鸡、兔、犬、及猫等动物进行比较。试验结果表明 ,关中驴与对照动物产生的抗体效价一致 ,证明了关中驴可替代其它动物用于生物制品研究     

两株抗猪伪狂犬病毒的单克隆抗体制备与鉴定

采用猪伪狂犬病毒(PRV)ZJ01株纯化病毒免疫BALB/c小鼠,利用融合细胞技术和间接ELISA抗体筛选技术,制备并获得2株能稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株2B3和5C10,其中,2B3单抗为Ig G2a亚类,5C10为Ig G1亚类,轻链均为κ链。间接免疫荧光检测结果表明,2株单克隆抗体均能与PRV发生特异性反应。Western-blot结果表明,2B3单抗针对PRV g C蛋白,5C10单抗针对PRV g E蛋白。本研究为建立快速检测伪狂犬病毒感染的免疫学方法奠定了基础。     

沈阳某猪场伪狂犬病流行病学调查及免疫效果评估

采用猪伪狂犬病毒抗体检测试剂盒,对沈阳某使用gE基因缺失疫苗免疫的生猪养殖场进行猪伪狂犬病毒抗体检测,同时使用PCR方法对猪伪狂犬病毒gE基因进行筛查,对该场的疫苗免疫效果及病毒隐性感染情况进行评估。结果表明,该场猪伪狂犬病毒隐性感染率为11.5%;疫苗免疫效果母猪最佳,哺乳仔猪次之,育肥猪再次。建议该场根据试验结果调整免疫程序,并对隐性感染病猪及时进行淘汰、净化。     

膜分离法纯化浓缩猪伪狂犬病疫苗毒的效果

本研究使用不同孔径的陶瓷(有机)膜过滤器,对不合格的猪伪狂犬病毒细胞收获液(病毒含量≤104TCID50/mL)滤除杂蛋白、超滤浓缩、除菌处理得到纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液;然后对纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液分别进行杂蛋白去除率检验与无菌检验、病毒含量测定、安全检验、效力检验;将检验合格的纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液添加保护剂冻干,并对纯化浓缩的猪伪狂犬病冻干活疫苗进行以上各项检验,以及进行免疫猪体内抗体消长变化的检测。结果表明:纯化的猪伪狂犬病疫苗杂蛋白去除率平均达到68.3%以上,病毒含量≥105TCID50/mL,效力检验合格;免疫猪体内抗猪伪狂犬病毒抗体增长幅度比同时期未纯化的常规疫苗显著,其中免疫至84 d时中和抗体效价平均高达40.35稀释倍数左右,比常规疫苗中和抗体效价平均高出14.22稀释倍数。此项研究为畜禽疫苗的纯化提供一定的参考。     

一颗耀眼的科技创新的新星——第四军医大学动物保健品研制中心新型产品连创佳绩

第四军医大学动物保健品研制中心利用四军大的高精尖设备与先进技术 ,发挥关中毛驴这一自然资源扰势 ,采用新型工艺和独特保护剂 ,认真实践与创新 ,研制出科技含量较高的科研新产品“犬用多联活疫苗”和精致浓缩型“犬、猫、猪、羊、兔、鸡、鸭、鹅、鸽、鸵鸟等 1 0多种动物用抗多病免疫球蛋白”,成果产品“犬五联活疫苗”已申请国家专利 ,专利号为 :95 1 0 6 744· 3。鸽用抗多病免疫球蛋白 ( Ig G)专利申请号为 :991 1 0 85 8· 2犬、猫用抗多病免疫球蛋白 ( Ig G)专利申请号为 :991 1 0 85 9· 0猪用抗多病免疫球蛋白 ( Ig G)专利申请…     

猪伪狂犬病毒PCR检测方法的优化

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种疱疹病毒性疾病,在世界大部分地区都是地方性家畜流行病。而且猪伪狂犬病与其他猪传染病不易区分,因此,建立一个特异性强的检测方法对于其诊断具有重要意义。实验是在实验室已经建立伪狂犬病毒单项PCR检测方法的基础上,对扩增条件进行优化后对其特异性进行了验证。结果发现,优化后的方法特异性好,只有猪伪狂犬病毒扩增为阳性,其余DNA病毒:猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅰ型(PCV1)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)均呈现阴性。因此,本研究方法可以为今后实验室检测猪伪狂犬病毒提供参考。     

规模猪场猪伪狂犬病的诊断实例

天津某规模猪场发生妊娠母猪流产、产死胎及部分仔猪发病的情况,为确诊病原,分别对流产胎儿的组织和母猪血清进行了实验室检测。流产胎儿的组织经PCR或RT-PCR检测,猪伪狂犬病毒(PRV)为阳性,猪圆环病毒(PCV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为阴性。经猪伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测胎儿组织为阳性,检测母猪血清中猪伪狂犬gE抗体为阳性;用病毒的分离培养试验分离到了猪伪狂犬病毒,根据临床症状、抗原抗体检测及病毒的分离培养试验确诊该猪场存在猪伪狂犬病毒野毒感染。     

云南省临沧地区猪伪狂犬病血清流行病学调查

为了解云南省临沧地区猪伪狂犬病病毒(PRV)的感染情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA),对临沧部分地区规模化猪场和散养户饲养猪的190份血清样品进行了猪伪狂犬病病毒gB抗体检测。结果显示,临沧地区规模化猪场和散养户的猪伪狂犬病毒gB抗体阳性率为73.16%,其中规模化猪场为81.82%,散养户猪群为16%。从检测结果来看,临沧地区存在猪伪狂犬病毒感染,应加大免疫力度。     

某猪场猪伪狂犬病免疫程序优化对比试验

为了探究保育猪不同伪狂犬病免疫程序的免疫效果,笔者采取4种不同免疫程序进行试验,即4组猪群于35日龄首免和70日龄二免:A组分别免疫接种伪狂犬病弱毒疫苗和灭活疫苗;B组分别接种伪狂犬病灭活疫苗和弱毒疫苗;C组均接种伪狂犬病灭活疫苗;D组分别接种伪狂犬病弱毒疫苗,接种方式和剂量均按照说明书进行。于试验前(25日龄)和试验后(100日龄)应用ELISA法分别检测不同组别的猪群伪狂犬病毒g E和g B抗体水平水平,确定阳性率差异。结果显示:免疫程序A和B可以均能有效控制猪群伪狂犬病野毒的进一步流行,降低猪群的死亡率,但免疫程序B无法使猪群伪狂犬病得到净化,而免疫程序C和D均无法抑制伪狂犬病毒野毒的流行。因此,选择免疫程序A对于防控与净化伪狂犬病毒的发生与流行效果最好。     

云南省某规模化猪场不同日龄猪伪狂犬病病毒抗体的检测

为了评估云南省某猪场猪群的猪伪狂犬病毒野毒感染及免疫状况,试验随机采集该猪场的不同日龄猪的血清80份,采用猪伪狂犬病病毒gE(PRV-gE)抗体检测试剂盒和猪伪狂犬病病毒gB(PRV-gB)抗体检测试剂盒同时进行猪的狂犬病抗体检测,以掌握不同日龄猪伪狂犬病毒野毒的感染情况并制订适合该猪场的猪伪狂犬病免疫程序。结果表明:该场不同日龄猪PRV-gE抗体全部为阴性,无野毒感染; PRV-gB抗体阳性率均为100%,PRV-gB抗体水平相对较稳定。说明该猪场的免疫程序较为合理。     

猪伪狂犬病基因缺失灭活疫苗(JS-2012-△gI/gE株)的制备及免疫效力评价

本研究将猪伪狂犬病毒双基因缺失毒株(JS-2012-△g I/g E株)用0.15%的甲醛灭活后,与赛彼科公司MONTANIDE ISA201VG佐剂进行乳化,制备成猪伪狂犬病灭活疫苗。为了评价灭活疫苗的免疫效力,15头14日龄的健康仔猪(猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒Ⅱ型抗原和抗体均为阴性)随机分成3组,每组5头。第一组猪颈部肌肉接种猪伪狂犬病灭活疫苗(JS-2012-△g I/g E株)每头2 m L,接种后28 d,第一组和第二组同样方式同等剂量接种猪伪狂犬病灭活疫苗(JS-2012-△g I/g E株),第三组猪作为对照。第二次免疫后d 28,三组实验猪均滴鼻接种PRV JS-2012第5代强毒,每头105.0TCID50/2 m L。攻毒后0~14 d,每日测量体温并记录临床症状。通过抗体检测和保护效率来评价猪伪狂犬病灭活疫苗(JS-2012-△g I/g E株)免疫效力。结果表明,两次免疫(第一组)PRV g B抗体水平明显高于一次免疫(第二组),两次免疫提供了更好的保护效力。     

猪伪狂犬病毒Bartha株与变异株疫苗免疫后中和效价比较试验

通当前由于伪狂犬病毒变异株在全国流行,引起人们对疫苗选择的关注,产生是否换用疫苗的不同看法。为了给生产提供疫苗选择的参考,本研究选用某进口猪伪狂犬病毒(PRV)Bartha株疫苗和某国产PRV变异株疫苗,分别免疫15头仔猪,经2次免疫后第3周采血清,检测血清中和效价,并对结果进行统计分析。结果显示,变异株疫苗免疫后中和效价明显高于该进口Bartha株疫苗。     

实时荧光定量PCR法检测猪伪狂犬病毒灭活疫苗抗原含量的研究

本研究根据GenBank公布的猪伪狂犬病毒gB基因保守序列设计引物和TaqMan探针,采用实时荧光定量PCR方法检测猪伪狂犬病毒灭活疫苗的抗原含量,并对方法的特异性和敏感性进行验证.结果显示:该方法灵敏度可达102 TCID50/mL,只对猪伪狂犬病毒有特异性扩增曲线,其他4种对照病毒均为阴性;检测猪伪狂犬病毒灭活疫苗...     

间接ELISA检测羊伪狂犬病抗体的研究

利用差速离心纯化MDBK细胞增殖伪狂犬病毒 (PRV)为抗原 ,建立间接ELISA检测伪狂犬病抗体方法。选用抗原最佳包被浓度为 1∶80 0(4μg/mL) ,酶标兔抗山羊IgG最佳稀释浓度为 1∶80 0 ,作用时间为 60min,封闭物采用 4 %明胶 ,抗原抗体最佳作用时间为 60min。根据建立的最佳反应条件检测伪狂犬病毒油乳剂灭活苗、氢氧化铝凝胶灭活苗、基因缺失油乳剂灭活苗接种山羊后的抗体消长规律。试验表明间接ELISA检测PRV抗体具有快速、敏感、特异等特点 ,适合于大量样品的检测 ,也便于畜群免疫效果的检测和免疫程序的制定     

猪圆环病毒2型抗体胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立便捷、快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)抗体的免疫层析方法,本研究利用G蛋白标记胶体金制备金标垫,以PCV2病毒样颗粒(VLPs)和兔Ig G分别作为检测线与质控线组装胶体金试纸条。检测结果显示,该试纸条与A型塞内卡病毒(SVA)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)等猪其它病毒抗体阳性血清无交叉反应,仅对PCV2抗体阳性血清具有高度的特异性;对PCV 2阳性血清最低检测限为1∶6 400稀释度,敏感性较高;批内、批间变异系数CV均小于5%,重复性较好。试纸条在4℃保存6个月,其特异性和敏感性无明显变化。对采集的100份临床血清样品进行检测,该方法与标准ELISA的总符合率为98%。表明本研究建立的PCV2抗体的胶体金免疫层析检测方法具有敏感、特异、稳定等特点,可以做为评价PCV2疫苗免疫效果及其感染筛查的检测方法。     

伪狂犬病毒在潜伏感染猪体内的组织分布

潜伏感染是猪伪狂犬病防治和净化工作中的重要障碍之一。本研究用伪狂犬病毒（PRV）gG-/LacZ＋标记毒株感染经过PRV灭活疫苗免疫的PRV阴性仔猪,建立了猪伪狂犬病毒潜伏感染动物模型,再用地塞米松激活PRV在猪体内的潜伏感染。运用免疫组织化学SABC染色法研究了PRV在潜伏感染猪和潜伏感染激活猪体内部分组织的分布情况。结果显示,阳性细胞主要分布在神经系统的大脑、小脑、脑干、三叉神经和视神经以及非神经系统的扁桃体、肺和肾等部位。阳性细胞数量随着攻毒后时间的发展呈现减少的趋势,而注射地塞米松后,阳性细胞数量在上述组织中显著增加。