理化因素对白芸豆凝集素生物学活性影响

[目的]研究物理与化学因子对白芸豆凝集素生物学活性的影响,为白芸豆凝集素开发利用奠定理论基础和提供技术参考.[方法]白芸豆（Phaseolus vulgarisL）种子经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换和Sephadex G-100凝胶柱层析得到凝集素（PVL）;然后以不同温度和pH梯度、不同金属离子、不同变性剂处理样品,通过倍比稀释法测定凝集素的生物学活性.[结果]白芸豆凝集素能使兔血红细胞发生凝集,在20～70℃红细胞凝集活性不受影响,当温度达到80℃时凝集素样品仅有25％凝血活性,85℃加热30 min凝血活性全部消失.用EDTA溶液处理后,白芸豆凝集素失去凝血活性,金属离子Mg2＋和K＋能恢复凝血活性,Mn2＋能完全恢复凝血活性,Ba2＋、Cu2＋、Fe3＋、Ca2＋不能使凝血活性恢复.白芸豆凝集素在缓冲液pH低于4.0时凝血活性逐步降低,在pH 3.0时,活性仅有45％;在缓冲液pH高于7.2时活性逐步降低,pH 9.0时凝血活性仅有44％.3种变性剂变性试验中,脲能使凝集素凝血活性降低70％,盐酸胍能降低30％,SDS能降低18％.[结论]白芸豆凝集素具很强的热稳定性和广谱酸碱度适应能力;凝血活性依赖Mn2＋等金属离子,且仅能被变性剂6 mol/L脲部分抑制.在实际应用中,可根据适宜条件控制其物理和化学因素,防止凝集素变性失活.     

理化因素对川泽泻凝集素血细胞凝集活性的影响

[目的]明确温度、pH和金属离子等理化因素对川泽泻凝集素血细胞凝集生物学活性的影响。[方法]川泽泻块茎经研磨、浸取、硫酸铵沉淀、离子交换和亲和层析柱分离纯化得到凝集素(Alisma plantago-aquatica Linn.Lectin, APL),然后用系列温度、pH和金属离子等理化因素处理凝集素样品,应用倍比稀释法检测凝集素凝集人类血细胞活性。[结果]APL对家兔、家鸡、鲤鱼等动物血细胞无凝集作用,能使人ABO 4种类型血细胞发生不同程度凝集,对A型血细胞凝集活性明显高于其他3种血型红细胞。用20～100℃以10℃梯度处理后,川泽泻凝集素在20～40℃凝集活性很强,50℃凝集活性开始降低,在70℃仅具42%的凝集活性,80℃加热10 min完全失活;当pH为低于5.4或高于7.6时,凝集活性逐渐降低,当pH≤3.4或pH≥9.0时,川泽泻凝集素失去血细胞凝集活性;用EDTA透析后凝集素凝集活性基本消失,Ca²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、K⁺等离子能使凝集素凝集活性不同程度恢复。[结论]川泽泻凝集...     

人体表金黄色葡萄球菌超抗原毒素基因型系统分析

采用以4组反应管同时检测18种金黄色葡萄球菌超抗原毒素的多重PCR检测方法,对人体表面分离的金黄色葡萄球菌进行超抗原毒素基因系统分型。结果表明,在人体皮肤、头发及鼻腔中采集的682份样品中共分离到16株金黄色葡萄球菌,鼻腔中检出率最高,为4.35%(10/230);分离株超抗原毒素基因携带率高达81.25%,多数菌株同时携带1种以上基因;肠毒素基因携带率为56.25%,所有携带肠毒素基因的菌株都携带至少1种传统肠毒素,其中sea携带率最高,其次为sec,而see未检出。     

理化因素对大蒜凝集素生物活性的影响

大蒜(Alliumsativum L.)鳞茎经浸取、硫酸铵分级沉淀、离子交换柱和凝胶过滤得到凝集素(Alliumsativum L.Lectin,ASL)样品。ASL能凝集兔血红血球和鸡血红血球,使鱼血红血球发生溶血,其中对兔血红血球的凝集活性最强。大蒜凝集素在70℃以上的温度加热10 min才失活,表明大蒜凝集素有较强的热稳定性。凝集活性最适pH为4.5~6.4,其凝集活性部分依赖于金属离子,且大蒜凝集素的凝集活性能被变性剂所抑制。     

乙酸乙酯沙蚕提取物对金黄色葡萄球菌抑菌活性研究

为探讨沙蚕体内生物活性物质的抑菌活性,采用乙酸乙酯溶剂对沙蚕体内生物活性物质进行提取,提取物对金黄色葡萄球菌进行药敏试验。结果表明,乙酸乙酯沙蚕提取物对金黄色葡萄球菌均有一定的抑菌活性,其最小抑菌浓度(MIC)为0.195 mg/ml。     

金黄色葡萄球菌px-1 DNA芯片的制备及检测

提取金黄色葡萄球菌px—1总DNA经酶切后,与载体质粒Puc18链接,并转化E.coli DH5α,从而构成金黄色葡萄球菌px—1的基因文库。用PCR方法扩增基因文库,所得PER产物点于芯片上,从而制各px—1DNA芯片。分别提取不同盐浓度培养的px—1的总RNA,把不同盐浓度培养的px—1的总RNA反转录为DNA,用Cy3,CY5分别标记反转录的DNA。通过杂交检测芯片,并获得杂交图像。     

乌桕根皮醇提物对金黄色葡萄球菌耐药菌株的抗菌活性

目的:金黄色葡萄球菌的耐药性严重制约了感染者的治愈效果,从中草药中发现新抗菌药物具有重要的实际价值。方法:通过对乌桕根皮60%和95%乙醇提物各萃取部位的对耐药金黄色葡萄球菌抑制活性研究。结果:乙酸乙酯部位和正丁醇部位对耐药金黄色葡萄球菌具有抑制活性。样品浓度为1mg/ml时,抑菌直径在4～5mm之间。结论:显示了乌桕根皮的研究价值。     

金黄色葡萄球菌毒力因子研究进展

本文简述了金黄色葡萄球菌各类细胞毒素、细胞毒性酶、超抗原外毒素的特点,以及毒力因子的调控系统,以期为金黄色葡萄球菌食物中毒和致病性相关研究与预防提供理论基础与借鉴。     

细菌素Subticin 112对金黄色葡萄球菌 CVCC 1885的体内外抑菌活性

   【目的】研究枯草芽孢杆菌素（Bacillus subtilis bacteriocin）Subticin112在体内外对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CVCC 1885的抑菌活性（bacteriostatic activity）,为Subticin112的临床应用提供理论依据。【方法】体外抑菌：取相同有效质量的Subticin112、土霉素、青霉素、万古霉素、新霉素、链霉素和庆大霉素等分别溶于等体积的无菌生理盐水中,然后采用琼脂扩散法比较相同浓度的上述药物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性。体内抑菌：将体重为18-22 g的SPF级KM雄鼠120只分成6组,分别为空白对照组、阴性对照组、土霉素治疗组、低浓度Subticin112治疗组、中浓度Subticin112治疗组和高浓度Subticin112治疗组。试验开始后,各组小鼠每隔8 h分别灌胃0.4 mL不同浓度的上述药物或无菌生理盐水,3次灌胃结束后,各组小鼠分别腹腔注射0.5 mL绝对致死剂量（absolute lethal dose, LD100）的金黄色葡萄球菌或无菌生理盐水。试验结束后测定死亡率、促炎性细胞因子水平、腹腔液金黄色葡萄球菌浓度并制作病理组织切片进行观察。【结果】体外抑菌：与抗生素相比,相同浓度的Subticin112对金黄色葡萄球菌具有很好的抑菌活性,其中与万古霉素和新霉素相比,Subticin112对该致病菌的抑制活性更好,且差异极显著（P＜0.01）,而与其它抗生素相比抑菌活性相当,差异不显著（P＞0.05）。体内抑菌：试验结束后,阴性对照组小鼠死亡率为100%,低浓度Subticin112治疗组为30%,其它组小鼠均无死亡;与阴性对照组相比,药物治疗组小鼠的促炎性细胞因子（IL-1β,IL-6和TNF-α）水平均有下降,差异显著（P＜0.05）,药物治疗组小鼠腹腔液中的金黄色葡萄球菌浓度也均有下降,差异极显著（P＜0.01）,且呈明显的量效关系;病理切片显示阴性对照组肝脏和脾脏具有明显的病变,而药物治疗组病变轻微或无病变。【结论】可以得出细菌素Subticin112在动物体内外对金黄色葡萄球菌CVCC 1885均具有较好的抑菌活性,具备开发为新型抗菌药物的潜力。     

金黄色葡萄球菌分离株的菌膜测定及其影响因素

采用96孔细胞培养板法,对10株不同来源的金黄色葡萄球菌分离株的菌膜形成能力进行调查,并研究外部环境因素对金黄色葡萄球菌菌膜形成的影响。首先以金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC6538为模式菌株,确定了亲水性细胞培养板、培养48 h为适宜的菌膜体外培养条件。在此条件下测定了10株分离株的菌膜形成量,并研究了不同培养温度（25~46℃）和不同营养条件（葡萄糖和氯化钠）对菌膜形成的影响。结果显示,体外培养条件下,金黄色葡萄球菌普遍可以形成菌膜,10株菌中仅1株为菌膜阴性,不同菌株菌膜形成能力差异较大;较高的培养温度有利于菌膜的形成,有3株菌在46℃时菌膜形成量达到最大;0.5%葡萄糖和1%氯化钠的添加可显著改变各菌株的菌膜形成,葡萄糖倾向于促进临床分离株菌膜形成量的增加,而氯化钠倾向于促进食品分离株菌膜形成量的增加。这一结果,可以为实际环境中菌膜的预防及控制提供指导和方向,同时也说明金黄色葡萄球菌的菌膜形成存在着不同的调控模式。     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布与时序性表达

【目的】研究食源性金黄色葡萄球菌各血清型肠毒素基因的分布,并进一步分析其时序性表达规律。【方法】针对51株各类食品中分离的金黄色葡萄球菌菌株,应用PCR技术对11种葡萄球菌肠毒素进行基因分型;提取细菌总RNA,以ftsZ和ropB作为内标基因,使用反转录荧光定量PCR研究各肠毒素基因在细菌生长周期中的表达水平变化。【结果】除see、ses和set外,其余8种肠毒素基因在51株食源性金黄色葡萄球菌菌株中均有检出,且sei和seg的检出率最高（27.45%）。各肠毒素基因在mRNA水平的时序性表达规律基本一致,均在对数后期达到峰值,随后快速下降。以内标基因为参照,同一菌株中不同肠毒素基因的相对表达量以及不同菌株中同一肠毒素基因的相对表达量均差异较大。【结论】本文系统研究了肠毒素基因在食源性金黄色葡萄球菌中的分布,并探究了肠毒素基因的时序性表达规律,对金黄色葡萄球菌毒力机制研究与食品质量安全控制具有参考意义。     

蛇附子对肉鸡细胞因子及免疫器官发育的影响

为研究蛇附子对肉鸡免疫功能的影响,选用150只7日龄三黄肉鸡,随机分为5组(Ⅰ—Ⅴ组),每组30只鸡。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮;Ⅴ组在基础饲粮中添加10 mg/kg的盐酸左旋咪唑;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础饲粮中添加0.5%、1%、2%的蛇附子。分别在给药5 d、10 d、20 d后测定肉鸡血清中细胞因子白介素1(IL-1)、白介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、肿瘤坏死因子γ( TNF-γ)含量及免疫器官指数。结果显示,日粮中添加蛇附子可以提高肉鸡血清IL-1、IL-4、TNF-α、TNF-γ的含量和免疫器官指数。其中, IL-1、IL-4以添加1%的蛇附子在给药20 d后提高幅度最大,分别较对照组提高了56.99%( P<0.05)和74.60%( P<0.05)。 TNF-α、TNF-γ以添加2%的蛇附子组提高幅度最大, TNF-γ在给药10 d后较对照组提高了99.50%(P<0.05),TNF-α在给药5 d后提高了60.02%(P<0.05)。脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数以添加1%的蛇附子组提高幅度最大,脾脏指数、胸腺指数在给药20 d 后提高116.67%( P <0.05)、27.27%(P<0.05);法氏囊指数在给药10 d后较对照组提高了60.00%(P<0.05)。可见,蛇附子具有提高肉鸡免疫功能的作用。     

牛肉中金黄色葡萄球菌的复核鉴定研究

[目的]采用2种方法复核检出牛肉中金黄色葡萄球菌阳性结果,确保检测结果的准确性。[方法]按照GB 4789.10—2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》方法前增菌、选择性分离培养、革兰氏染色和血浆凝固酶试验鉴定金黄色葡萄球菌,应用SN/T1870—2007《食品中致病菌检测方法实时PCR法》对疑似阳性结果进行了进一步验证和复核。[结果]经过2种方法验证可疑菌落,该批牛肉中检出金黄色葡萄球菌。[结论]分离并鉴定牛肉中金黄色葡萄球菌可疑样品时,可采用不同方法进行验证和复核,该方法可提高检测结果的准确性,可用于畜禽肉中致病菌的检测。     

大豆异黄酮对金黄色葡萄球菌的抑菌机制研究

 【目的】研究大豆异黄酮（Soybean isoflavone,SI）的抑菌机制。【方法】本试验利用呼吸代谢抑制实验和4',6-二脒基-2-苯基吲哚（4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）荧光染色对大豆异黄酮的抑菌机制进行研究。【结果】呼吸代谢抑制实验结果表明,当SI的终浓度为0.8 mg?ml-1时,可显著抑制金黄色葡萄球菌苹果酸脱氢酶的活性,SI组苹果酸脱氢酶的比活性与对照组相比降低了74.97%。DAPI染色结果显示,DAPI可以和金黄色葡萄球菌内的核酸结合,经过SI作用28 h后,菌体内的核酸含量呈明显下降趋势,其中DNA的荧光强度减少了33.53%,RNA减少了39.82%。【结论】SI具有有较强的抑菌活性,其抑菌机制是通过抑制细菌的呼吸代谢和核酸的合成等方面实现的。     

电解水对金黄色葡萄球菌生物被膜的影响

为了阐明不同性质的电解水在控制金黄色葡萄球菌生物被膜中的作用,本研究分别使用酸性、碱性和中性电解水处理生物被膜,并测定处理前后生物被膜生物量、活性、活菌数和构造的变化。结果表明,酸性电解水能够有效杀死生物被膜中的菌体,但不能有效去除生物被膜;其有效氯含量与杀菌作用呈正相关。碱性电解水能够有效去除生物被膜,其pH值直接影响去除能力。中性电解水的作用与酸性电解水相似。不锈钢表面的生物被膜用碱性、酸性和中性电解水处理10min后,活菌数从7.5lgCFU/cm2分别减少至5.3,2.3和3.2lgCFU/cm2。电解水有潜力成为生物被膜杀菌剂和去除剂。     

冻融作用对土壤理化及生物学性质的影响综述

冻融作用是作用于土壤的非生物应力,是自然界中最为平常的过程,对土壤物理、化学和生物学性质均产生重要影响。综述了冻融作用对土壤团聚体稳定性、温室气体排放、养分含量及有效性、微生物量及微生物活性的影响。冻融作用对土壤酶活性与养分有效性的影响将成为今后研究的焦点。     

金黄色葡萄球菌GapC基因的克隆和表达

为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)GapC蛋白,应用PCR方法扩增出S. aureus菌株BMSM855/23-1的gapC基因,随后将其克隆到pMD18-T载体上.重组克隆pMD-T/gapC经测序后,与GenBank上已发表的序列进行对比分析.然后,将gapC基因插入到pQE-30质粒,构建重组质粒pQE30/gapC.重组质粒转化大肠杆菌E.coli M15(pREP4),IPTG诱导后,SDS-PAGE鉴定GapC融合蛋白的表达.结果表明成功扩增并克隆了S.aureus gapC,该菌株的gapC基因与GenBank上S. aureus BM10株的核苷酸序列一致性为99.3%,推导氨基酸序列一致性为99.4%.SDS-PAGE结果表明,GapC蛋白在E. coli M15(pREP4)中获得表达.     

金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布的研究

为了研究g型肠毒素基因(SEg)i、型肠毒素基因(SEi)在金黄色葡萄球菌菌株中的分布状况,本试验以分离自人化脓组织、生牛乳等8种不同来源的371株金黄色葡萄球菌菌株作为研究对象,利用PCR技术对肠毒素基因的分布进行检测。结果表明:267株金黄色葡萄球菌检出含有肠毒素基因,总检出率为71.97%。其中SEg基因的总检出率为67.93%,SEi基因的总检出率为57.68%。各来源间金黄色葡萄球菌肠毒素的检出率不同,且同一来源的菌株其SEg和SEi的检出率也不同,表明不同来源以及不同肠毒素的基因型在金黄色葡萄球菌中的分布存在差异。