植物源病毒抑制剂WCT-Ⅱ控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT-Ⅱ直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体，经枯斑半叶法接种和电镜检测发现，处理后的病毒致病力明显下降，病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象，WCT-Ⅱ对TMV的枯斑抑制率为86．6％；WCT-Ⅱ处理烟草后，其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现，处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明，WCT-Ⅱ不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用，而且能诱导植物产生病程相关蛋白，提高烟草抵抗TMV侵染的能力。     

几种病毒抑制剂对烟草花叶病毒的抑制试验

通过室内生物测定试验,研究了5种常用药剂对烟草花叶病毒(TMV)的治疗、保护和钝化作用,旨在为创制新的烟草病毒病抑制剂提供科学依据.结果表明,金珠蔬美对病毒的活体治疗和保护效果最好,在250 μg/mL时抑制率分别达到66.24％和54.55％,高于其他抑制剂的防效.药剂对IMV活体钝化的效果中,金毒冠氨基寡糖素的抑制...     

植物源病毒抑制剂WCT-II控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT- 直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体,经枯斑半叶法接种和电镜检测发现,处理后的病毒致病力明显下降,病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象,WCT- 对TMV的枯斑抑制率为86.6%;WCT- 处理烟草后,其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现,处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明,WCT- 不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用,而且能诱导植物产生病程相关蛋白,提高烟草抵抗TMV侵染的能力。     

丹皮酚对烟草花叶病毒的抑制作用

从牡丹皮中提纯的丹皮酚结晶(0.6 mg.mL-1)与烟草花叶病毒(Tobacco m osaic virus,TMV)混合10 m in后对TMV枯斑抑制率达80%以上,说明丹皮酚对叶圆片中的病毒复制具有抑制作用;电镜下观察丹皮酚与TMV混合对粒体形态没有影响;丹皮酚与TMV混合后透析病毒可恢复侵染力,表明丹皮酚对病毒没有直接毒害作用;用丹皮酚喷施叶面不影响病毒侵染;低含量丹皮酚可阻碍TMV-CP的体外聚合,对TMV-RNA无体外抑制侵染作用.据此推测,丹皮酚对TMV的抑制作用可能主要是通过其与TMV-CP结合而影响病毒粒体对叶片表面侵染位点的识别,或影响植株体内TMV-CP亚基的体内聚合.     

转烟草花叶病毒复制酶基因烟草的病毒抗性研究

对用根瘤农杆菌双质粒法导入烟草花叶病毒复制酶基因的转基因烟草后代的研究表明：转基因烟草抗烟草花叶病毒和马铃薯Ｘ病毒,但感染马铃薯Ｙ病毒,抗病毒的转基因烟草存在某种机制限制着病毒在植株内的转移,转烟草花叶病毒复制酶基因烟草植株内不产生该复制酶,其抗病毒的确切机制有等进一步研究。     

植物源病毒抑制物WCT-Ⅱ防治烟草花叶病毒的机理初探

植物源病毒抑制物WCT—Ⅱ喷施于接种烟草花叶病毒(TW)的烟草上，与仅接种TWV未经WCT—Ⅱ处理的发病对照相比，烟草叶片中叶绿素含量提高了58．0％，碱溶性胞内几丁质酶和碱溶性胞间几丁质酶活性分别提高27．0％和40．7％，碱溶性胞内和酸溶性胞间 β-1，3-葡聚糖酶活性分别提高22．1％和140．0％。上述研究结果表明，WCT—Ⅱ能启动植物的一系列抗病防御反应，诱导植物产生抗病性。     

三叶鬼针草中黄酮甙对烟草花叶病毒的抑制作用

测试了从三叶鬼针草中提取的黄酮甙对烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)的抑制作用.结果表明:黄酮甙对TMV具有明显的体外钝化作用,其质量浓度为100μg·mL-1时,对TMV的抑制率为91.3%,但对烟草体内病毒复制无显著的抑制效果;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示黄酮甙与病毒外壳蛋白混合的泳带比对照明显滞后,表明黄酮甙可与TMV外壳蛋白结合,透析或萃取可使这种结合解离,使病毒恢复侵染力,说明黄酮甙对病毒无直接杀灭作用;用黄酮甙处理过的普通烟叶片,12h后接种病毒,可阻抑病毒初侵染,延迟病害症状的出现.     

烟草抗烟草花叶病毒基因N的研究

烟草的N基因是一个较为理想的抗烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV)基因，它和TMV之间的互作是植物和病毒互领域里一个经典的系统。烟草N基因已经分离，TMV基因组结构和功能已经研究得很清楚。这为进一步研究两者的互作奠定了基础，本文介绍了这一领域取得的最新进展用存在的问题。     

番茄花叶病毒移动蛋白基因转化烟草及在转基因烟草中的表达

从提纯病毒抽提基因组RNA，并通过RT－PCR扩增番茄花叶病毒（ToMV)移动蛋白（MP）基因。经克隆测序后插入植物表达载体PBI121的35S启动子下游，通过PCR及酶切筛选分别获取正、反向插入的克隆，通过三亲交配导入农杆菌，叶盘转化法转化普通烟草。卡那霉素筛选获得一系列抗性小苗，对其进行PCR检测，Southern、Northern点杂交，Western-blot检测，获得能正义、反义表达ToMV MP基因的转基因植株。     

纳米银对烟草病毒的体外抑制作用

为弄清纳米银对烟草病毒病是否具有抑制作用,采用半叶接种法,研究了纳米银对烟草病毒的体外防抑作用.结果表明:微波纳米银对TMV、CMV和PVY 3种单一病毒的体外抑制效果显著,电解纳米银对CMV和PVY的单一病毒的体外抑制效果显著.在3种病毒的复合侵染试验中,微波纳米银对TMV-CMV体外复合侵染的抑制效果显著,电解纳米...     

几种病毒抑制剂对烟草花叶病防效试验

为了筛选较好的病毒抑制剂,用8%宁南霉素1600倍液、20%盐酸吗啉呱600倍液、0.5%氨基酸寡糖素600倍液、20%吗胍.乙酸铜700倍液进行田间药效试验,结果表明20%吗胍.乙酸铜700倍液具有较好的防治效果。     

抗黄瓜花叶病毒RNAi载体的构建及烟草的转化

[目的]构建抗黄瓜花叶病毒RNAi载体,并将载体转入烟草.[方法]采用RT-PCR方法,扩增黄瓜花叶病毒NS04加工番茄分离物的RNA2基因组的序列选取CMV RAN2基因组中的复制酶片段作为靶序列,构建pBi35SCR2真核表达载体,并对表达载体时行鉴定;通过农杆菌介导的方法将表达载体转入烟草,用PCR的方法检测载体是否转入.[结果]系统进化树分析结果表明,RNA2中编码CMV-2a的序列与中国浙江的DQ412731 分离物有较高核苷本乡酸及氨基酸同源性,分别达到98.0%和96.5%;RCR结果表明,试验成功构建了pBi35SCR2真核表达载体,并成功将表达载体转入烟草[结论]试验获得的转基因烟草可作为后期攻毒试验的材料,并为研究加工番茄抗黄瓜花叶病毒奠定了基础. Abstract： [Objective] Aimed to construct RNAi vector resistant to cucumber mosaic virus and transferred this vector into tobacco.[Method]RT-PCR method was used to amplify cucumber mosaic virus NSO4 and process RNA2 gene sequen of tomato isolates.The analysis results of phylogenetic tree demonstrated that the sequence in RNA2 encoded CMV-2a had 98.0% and 96.5% homology with nucleotide and amino acid of DQ412731 isolate of Zhejiang,China.The replicase fragment in CMV RAN2 gene was taken as target sequence to construct pBi35SCR2 eukaryotic expression vector,then the expression vector was identified.Through agrobacterium-mediated method,the expression vector was transferred into tabacco and PCR method was used to check the transfer.The PCR results demonstrated that the experiment had successfully construct eukaryotic expression vector of pBi35SCR2 and the expression vector was successfully transferred into tabacco. [Conclusion] The obtained transgenic tobacco could be used as challenge test material in following experiment and provided foundation for studying processing tomato resist cucumber mosaic virus.     

壳寡糖衍生物对烟草花叶病的田间防效试验

测定了壳寡糖、宁南霉素、水杨醛壳寡糖希夫碱、5-溴水杨醛壳寡糖希夫碱、水杨醛壳寡糖希夫碱膦酸酯、5-溴水杨醛壳寡糖希夫碱膦酸酯对烟草花叶病的抑制效果,结果表明:这些药剂对烟草花叶病毒(TMV)均具有一定的诱导抗病效应,其中以5-溴壳寡糖希夫碱膦酸酯药剂的防治效果较好。     

壳寡糖的诱导抗性及对TMV的体外钝化研究

以摩擦接种法和半叶枯斑记数法调查了壳寡糖诱导枯斑寄主对TMV侵染的抑制率.试验结果表明,被壳寡糖诱导后的烟苗病斑率减少42.8%,被诱导植株的病斑小;壳寡糖在活体外对TMV粒子有钝化作用;壳寡糖钝化病毒液处理植株在1～5个小时内处理的病斑数比对照的减少80%左右,但其钝化作用在一定时间内有效,体外钝化处理超过15 d后钝化效果消失.壳寡糖液浓度为0.5×10～5 μg/ml以内,对病毒有明显的钝化作用,病斑率降低94.9%～77.6%,当浓度低于0.9×10～6μg/ml时,对病毒的体外钝化作用消失.     

3.95%病毒必克可湿性粉剂防治烟草花叶病毒病试验

[目的]探讨3.95%病毒必克对烟草花叶病毒病的防治效果。[方法]以白肋烟KY26为供试品种,以清水为对照,分别用3.95%的病毒必克500倍液和700倍液,3.95%病毒必克500倍液＋10%吡虫啉可湿性粉剂1000倍液处理烟草花叶病毒病,研究3.95%病毒必克对烟草花叶病毒病的防治效果。[结果]3.95%病毒必克500倍和700倍液对烟草花叶病毒病都具有一定的防效,病情指数与对照有显著差异,其中3.95%病毒必克500倍液的效果最显著,病情指数由对照的26.1降至7.2,发病率由50.2%下降到23.3%,防治效果为72.4%;用3.95%病毒必克500倍液＋10%吡虫啉可湿性粉剂1000倍液处理后,其防治效果高于3.95%病毒必克500倍液,为76.6%。[结论]该研究为烟草花叶病毒病的有效防治奠定了基础。     

茶山海棠叶提取物对烟草花叶病毒活性的抑制效果

为烟草花叶病毒植物源农药的研发提供参考,采用半叶枯斑法测定茶山海棠叶提取物对烟草花叶病毒活性的影响。结果表明:茶山海棠叶的乙醇提取物,石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇和水相的液-液萃取物对烟草花叶病毒(TMV)活性均具有显著体外钝化效果;当各提取物浓度为10mg/mL时,其对TMV的抑制率为100.00%~64.13%;茶山海棠叶各提取物对TMV的初侵染抑制率为47.57%~18.62%,增殖抑制率为25.56%。     

抗黄瓜花叶病毒RNAi载体的构建及烟草的转化

[目的]构建抗黄瓜花叶病毒RNAi载体,并将载体转入烟草。[方法]采用RT-PCR方法,扩增黄瓜花叶病毒NS04加工番茄分离物的RNA2基因组的序列。选取CMVRAN2基因组中的复制酶片段作为靶序列,构建pBi35SCR2真核表达载体,并对表达载体进行鉴定;通过农杆菌介导的方法将表达载体转入烟草,用PCR的方法检测载体是否转入。[结果]系统进化树分析结果表明,RNA2中编码CMV-2a的序列与中国浙江的DQ412731分离物有较高核苷酸及氨基酸同源性,分别达到98.0%和96.5%;PCR结果表明,试验成功构建了pBi35SCR2真核表达载体,并成功将表达载体转入烟草。[结论]试验获得的转基因烟草可作为后期攻毒试验的材料,并为研究加工番茄抗黄瓜花叶病毒奠定了基础。     

8种农药防治烟草花叶病的田间药效试验

采用病毒必克、病毒清、抗毒丰、倍达、宁南霉素、氨基寡糖素、克威特灵、超敏蛋白8种药剂,分别在烟草苗期、大田期进行田间药效试验,结果表明:8种药剂对烟草花叶病均有一定的防治效果,其中氨基寡糖素、克威特灵、超敏蛋白的防效相对较好,平均防效分别为55.64%、53.75%、50.81%,且防效较稳定,具有一定的推广应用价值。