枣茎段再生体系建立的研究

以‘骏枣’茎段为试验材料,通过组织培养技术的应用,研究影响茎段不定芽再生的主要因素。通过试验,选择出不定芽再生的适宜条件,建立枣茎段的高频再生系统,为基因工程技术在枣上的应用奠定良好基础。试验结果表明：茎段最佳取材阶段为5月中旬;最好的灭菌方法是间歇性灭菌处理;对内生菌抑制效果最好的抗生素是添加480 mg/L青霉素;茎段在培养基中的插入方式以竖直插入培养基方式接种,效果最好;在培养基1/2MS +6-BA 2.0 mg/L + IBA 0.5 mg/L上,不定芽再生效果最好。     

我国玉米茎腐病研究进展

玉米茎腐病是一种世界性土传真菌病害,该病害在我国玉米产区均有发生。近年来,受耕作制度（如保护性耕作、秸秆还田等）的改变和气候变化的影响,生产中使用的高抗茎腐病的玉米品种不多等因素,致使田间病原菌数量增加,我国玉米茎腐病有逐渐加重的趋势。针对玉米茎腐病危害逐年加重的现状,本文系统综述了玉米茎腐病致病菌、发病症状表现、病情分级标准、病害侵染规律、抗性鉴定评价方法等方面的研究进展情况,并提出了玉米茎腐病的防治策略。     

农杆菌介导大豆胚尖转化体系的研究

以大豆"黑农37"胚尖为外植体,利用农杆菌介导法将抗除草剂基因EPSPS转入大豆,并对转化各培养阶段6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)浓度进行了优化。结果表明:在预培养和共培养培养基中加入较高浓度6-BA有利于抗性芽的诱导;1mg/L6-BA和0.2mg/L吲哚丁酸(IBA)配合使用有利于抗性芽的伸长且提高了抗性芽的再生率;将抗性芽添加在1mg/L IBA的培养基中培养7d后转入不加任何激素的培养基中生根快且移栽后成活率高。PCR结果初步证明将EPSPS基因转入到大豆中。     

金钗石斛茎尖培养脱毒和检测

选用金钗石斛（Dendrobium nobile Lindl．）无菌试管苗剥取0．1～0．4mm的茎尖组织，接种在滤纸桥制作成的液体培养基上进行培养，10周后待苗长至2～3cm高时，采用目测症状法、指示植物鉴定法、斑点酶联免疫吸附检测法（DOT—ELISA）和电镜观察法进行病毒检测鉴定。结果表明：无病毒石斛苗可明显表现出叶色浓绿、株高茎粗增加等特点。用酶联免疫法和电镜观察法检测，结果客观、可靠，更加彻底。     

杂交玉米的丛生芽的诱导、植株再生和转化

本文研究了大面积推广的4个玉米杂交品种正大619、农大108、临奥1号和登海l号的丛生芽的诱导和植株再生.在A型诱导培养基上,四个玉米品系芽尖均不能形成丛生芽.在B型诱导培养基上,除登海1号外,正大128、农大108、临奥1号的芽尖能够形成丛生芽和分化苗.结果表明,品系和植物激素的组合对丛生芽和分化苗有显著的影响.利用该组培体系只是成功地对正大619和农大108进行了转化,说明该转化系统仍然有玉米基因型特异性的局限.     

影响细毛山药离体快繁和再生因素的研究

利用植物组织培养技术建立细毛山药茎尖培养和离体再生体系,探索影响山药组培的因素.结果表明:6-BA 2.0mg/L+ NAA 0.5 mg/L能很好的诱导出愈伤组织;将诱导出的愈伤组织接种在KT 2.5 mg/L+ NAA 0.02 mg/L和KT2.0mg/L NAA 0.03 mg/L上都可分化出4～5个芽,且接种在KT 2.0 mg/L+ NAA 0.03 mg/L上分化出的芽可直接长成健壮的植株.KT 1.5 mg/L+ NAA 0.02 mg/L培养基对腋芽有较好的增殖效果,增值系数可达到3.8.将芽接种到KT2.0mg/L+ IAA 0.2 mg/L培养基上可健壮成长,也可作为继代培养基.     

转基因杜仲再生体系的优化

为了提高杜仲不定芽的获得率及生根率,选用B5、MS和WPM 3种培养基,以杜仲下胚轴为外植体,利用农杆菌介导pGM 626-Act1-EuDIR3和pSH 737-35S-EuDIR1遗传转化杜仲,并将浸染后的各外植体分别接种于3种不同培养基上,观察记录各培养基上外植体的生长情况,通过GUS染色检测和PCR验证统计得到阳性芽数。结果表明:转化质粒在B5、MS和WPM培养基上的平均出芽率分别为(14.79±6.20)%、(7.68±2.37)%和(4.05±0.64)%,相较于MS和WPM培养基,B5培养基上的愈伤组织生长旺盛,色泽鲜艳呈绿色,质地紧密脆嫩,平均出芽率显著高于另外2种培养基,但是WPM培养基的生根率显著高于另外2种培养基,WPM和B5培养基的生根率分别为53.85%和3.57%,在MS培养基上的阳性芽并未生根。因此,在杜仲遗传转化过程中,B5培养基更适合诱导不定芽,WPM培养基利于不定芽生根。本研究优化了转基因杜仲再生体系,为杜仲基因功能研究提供技术支持。     

马铃薯不同品种块茎再生体系的建立和优化

为建立最佳的马铃薯块茎再生体系,本研究分别以‘夏坡蒂’、‘费乌瑞它’以及‘克新1号’的试管薯和大田薯为试验材料,采用控制变量法对马铃薯块茎再生体系进行筛选,以获得其培养基最佳激素浓度配比,并对不同来源马铃薯块茎不定芽分化率进行对比。结果表明,‘夏坡蒂’、‘费乌瑞它’和‘克新1号’愈伤组织的最佳诱导培养基组合分别为MS+1 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L GA3+1 mg/L ZT、MS+1 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L GA3+2 mg/L ZT和MS+1 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3+2 mg/L ZT。‘夏坡蒂’与‘费乌瑞它’的不定芽最佳分化培养基组合为MS+1 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3+2 mg/L ZT;‘克新1号’的最佳分化培养基组合为MS+1 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L GA3+2 mg/L ZT。试管薯的块茎不定芽分化率显著高于大田薯。     

黑农51子叶节和胚尖再生体系的建立及优化

为建立一个高效的大豆再生体系用于大豆的遗传转化,选用黑农51的子叶节和胚尖作为外植体,建立了黑农51的子叶节和胚尖再生体系,并研究了6-BA和IBA对大豆再生的影响。结果表明,黑农51子叶节最适芽诱导培养基为MSB5+1.0 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L IBA,最适生根培养基为MSB5+1.0 mg/L IBA;胚尖最适芽诱导培养基为MSB5+0.4 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA,最适生根培养基为MSB5+2.0 mg/L IBA。黑农51子叶节再生体系的出芽率、出芽数、芽伸长数和生根率四个指标均高于胚尖再生体系,更适合作为遗传转化的受体材料。     

棉花离体根尖培养体系的建立

从培养基成分着手,研究了影响棉花离体根尖培养的各种因素,以建立棉花离体根尖培养体系。研究结果表明,棉花根尖培养的培养基为MS大量元素+1／2MS微量元素+100mg·L     

番茄再生体系优化以及ProDH干扰载体的遗传转化

【目的】为了进一步探究番茄再生体系,对番茄再生体系进行优化,并利用筛选出的最优体系,将脯氨酸脱氢酶的干扰表达载体进行遗传转化,抗生素筛选获得再生植株。【方法】以44号和65号番茄品种为试验材料,外植体的选择有下胚轴和子叶,以MS为基本培养基,加入不同浓度比的6-BA和IAA,筛选合适的浓度比,来提高遗传转化率。【结果】结果表明：最适的愈伤培养基为MS + 2 mg?L-1 6-BA + 0.2 mg?L-1 IAA,最适分化培养基为MS + 2.0 mg?L-1 6-BA + 0.1 mg?L-1 IAA,最适生根培养基为MS + 0.2 mg?L-1 IAA;最适培养基浓度下,子叶的出愈率、分化率和生根率较下胚轴分别高25%、42%和20%,所以外植体选择子叶为宜,而在两个品种间也有差异,65号番茄总体比44号番茄再生率高。【结论】利用筛选出的最优再生体系,将脯氨酸脱氢酶的干扰表达载体对65号番茄遗传转化,获得抗性植株,以期为番茄抗寒性分子育种提供更多基础材料。