农杆菌介导的桑树瞬时表达体系构建及miRn51与其靶基因的表达分析

微小RNA(miRNA)是一类内源性非编码的单链小RNA,对植物的生长发育起着重要调控作用。建立高效的桑树瞬时表达体系是研究桑树miRNA及其靶基因功能的有效手段。将川桑(Morus notabilis)基因组中克隆的miRn51前体序列连接到PLGNL载体上,构建了PLGNL-35S-miRn51重组质粒,通过农杆菌介导其在桑树叶片中瞬时表达。采用GUS组织化学染色、多酚氧化酶活性检测以及荧光定量PCR等方法,分析不同缓冲液、重组农杆菌注射菌液浓度、转化时间、桑树品种等试验条件对农杆菌介导的桑树叶片瞬时表达体系转化效率、miRn51及靶基因表达水平的影响,当采用1号缓冲液和菌液D(600 nm)=0.6的重组农杆菌进行瞬时转化时,转化桑树叶片3 d后miRn51的表达量最高,其靶基因Mn PPO2的表达水平受到明显抑制,不同桑树品种对瞬时表达体系的瞬时表达效率有一定影响。以上结果表明,建立的农杆菌介导的桑树瞬时表达体系能简便、有效、快捷地验证桑树miRNA对其靶基因的调控作用。     

根癌农杆菌介导的少孢节丛孢菌遗传转化体系研究

根癌农杆菌介导的遗传转化法(ATMT)是一种丝状真菌常用的遗传转化手段,但目前还不能有效地应用于少孢节丛抱菌的转化.构建由PgpdA启动子调控mgfp-gus基因的真菌表达载体pCAM-BIA1304'-PgpdA并转入农杆菌中,利用ATMT技术对少孢节丛孢菌进行转化.结果显示,农杆菌AGL-1介导的转化在共培养时间为...     

农杆菌介导禾本科植物遗传转化的研究进展

农杆菌介导的遗传转化是目前禾本科植物进行转基因的有效手段,高效遗传转化体系建立的关键是优化T-DNA导入的各因素。文中主要从农杆菌菌株及载体、植物受体的选择、侵染与共培养、抗生素及添加剂的筛选等方面详细阐述了农杆菌介导植物遗传转化的主要影响因素,为实践操作提供了理论依据。     

影响根癌农杆菌转化效率的因素综述

根癌农杆菌介导转化法是植物基因工程的重要方法,但其转化效率受多种因子的影响,包括化学物质、物理方法、外植体遗传特性等,涉及农杆菌与植物互作的各个阶段。将这些影响因子及其功能进行简要综述,以期为优化农杆菌介导植物遗传转化流程提供帮助。     

甘露醇及AgNO3对根癌农杆菌介导的多年生黑麦草遗传转化的影响

多年生黑麦草是优良的牧草和草坪草.农杆菌介导多年生黑麦草遗传转化非常困难.为了建立稳定的多年生黑麦草遗传转化体系,本研究以品种"多福"种子成熟胚为外植体诱导愈伤组织,携质粒pCAMBIA2301的根癌农杆菌EHA105介导,进行遗传转化.在预培养及共培养基中添加0.1 mol/L甘露醇或5 mg/L硝酸银,并分析了二者...     

桑树遗传转化的受体细胞及其再生

以近15年来国内外桑树遗传转化研究为主线,结合植物基因工程的研究动态,从分子生物学和细胞组织学方面阐述了桑树受体细胞与根癌农杆菌的相互作用和TDNA在感染细胞中的转移过程。用植物形态发生的基本原理分析了叶盘转化细胞再生的主要方式,并对植物细胞的感受态、农杆菌完成贴壁反应的先决条件、TDNA的穿壁通道进行了阐述。     

农杆菌侵染条件对柱花草遗传转化效率的影响

在前期建立的柱花草高效组织再生体系基础上,进一步以柱花草热研5号的下胚轴为受体材料,以 GUS基因为报告基因,研究了农杆菌介导的柱花草遗传转化的几个影响因素,包括根癌农杆菌菌液浓度、浸染时间和共培养时间等对农杆菌介导的柱花草遗传转化效率的影响。结果表明,以柱花草下胚轴为外植体,在农杆菌菌液浓度(OD₆₀₀)为0.4~0.6,农杆菌浸染时间为15 min和共培养3 d的条件下,愈伤的转化效率为72%。愈伤组织进一步经过分化、生根和炼苗等过程后,对转化植株进行GUS染色和PCR检测,结果表明外源基因已成功整合到柱花草基因组中。本研究结果对柱花草遗传转化和关键基因功能研究具有重要的参考价值。     

甘露醇及AgNO_3对根癌农杆菌介导的多年生黑麦草遗传转化的影响

多年生黑麦草是优良的牧草和草坪草.农杆菌介导多年生黑麦草遗传转化非常困难.为了建立稳定的多年生黑麦草遗传转化体系,本研究以品种"多福"种子成熟胚为外植体诱导愈伤组织,携质粒pCAMBIA2301的根癌农杆菌EHA105介导,进行遗传转化.在预培养及共培养基中添加0.1 mol/L甘露醇或5 mg/L硝酸银,并分析了二者对转化的影响.经巴龙霉素筛选、PCR及GUS组织染色检测表明,共获得了转基因植株38株.添加O.1mol/L甘露醇或5 mg/L AgNO3或O.1 mol/L甘露醇+5 mg/L AgNO3,转化效率分别为对照的1.96,1.59和2.95倍.结果表明,在根癌农杆菌介导的多年生黑麦草愈伤组织遗传转化中,在预培养和共培养基中添加甘露醇或AgNO3能提高转化率,且当二者共同添加时可显著提高.     

根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系的建立与优化

以“中苜1号”紫花苜蓿7日龄无菌苗子叶和再生无菌苗的叶片为材料，建立了适用于农杆菌介导的转基因组织培养体系，并对MsNHX1基因进行转化。转化优化条件为：“中苜1号”紫花苜蓿7日龄无菌苗子叶、再生无菌苗叶片，用农杆菌菌液（A600=0.6）侵染6min，然后在培养基上铺一层灭菌滤纸培养7d后清洗，建立了苜蓿快速有效的遗传转化体系。     

大豆球蛋白基因表达载体的构建及对桑树的遗传转化

为探讨植物转基因技术在桑树品质改良上的应用途径,构建了含大豆球蛋白亚基（ＡｌａＢｌｂ）基因的表达载体,将其转入根癌农杆菌后,用农杆菌介导法转化桑树叶盘与茎尖,经卡那霉素抗性筛选培养,再生形成了不定芽及试管幼苗,ＰＣＲ检测证实ＡｌａＢｌｂ亚基基因已转入桑树。     

农杆菌介导的桑树遗传转化条件的研究

本实验探讨了多种因子对桑树遗传转化的影响,结果表明:菌株LBA4404 比C58Cl转化效率高;不同外植体转化效率有差异,以叶盘、茎尖和愈伤组织为受体转化频率分别为8.7% 、5.6% 和2.8% ;农杆菌菌液浓度、感染时间、共培养时间等对桑树叶盘转化效率有一定影响;AgNO3 对遗传转化具有明显的促进作用。     

农杆菌介导的药百合鳞片遗传转化体系的建立

本试验以药百合鳞片高频再生体系为基础,研究了农杆菌介导的药百合鳞片遗传转化的几个影响因素。结果表明,预培养5 d有利于转化;共培养3 d并且添加100 μmol/L乙酰丁香酮有利于提高转化频率并抑制了农杆菌的过度生长;在侵染阶段添加150 μmol/L乙酰丁香酮,农杆菌侵染液pH 值5.7、光吸收值0.8,侵染时间10 min为最佳遗传转化体系。再生植株经gus基因的瞬时表达检测及hpt基因PCR检测证明载体已成功整合到药百合基因组中。     

口蹄疫病毒抗原决定簇融合基因转化苜蓿

摘要：通过农杆菌的介导,以携带O型和A型口蹄疫抗原决定簇融合基因O21 O14 A21 HBcAg的植物表达载体转化苜蓿(Medicago sativa)愈伤组织,并再生得到抗性植株。试验建立了苜蓿甘农1号愈伤组织再生系统;优化了农杆菌介导的苜蓿遗传转化系统;获得抗性再生植株4棵;GUS报告基因在转化的愈伤组织中得到瞬时表达;抗性植株PCR检测结果证实目的基因已经成功整合到苜蓿基因组中。     

菊苣高效遗传转化体系的建立

研究了影响农杆菌GV1301菌株介导的菊苣遗传转化的几种因素,建立了菊苣高效遗传转化体系,获得了转基因抗性苗.结果表明,采用菊苣叶片,经预培养和共培养2 d,农杆菌浸泡时间为5～7 min,卡那霉素20 mg/L,头孢霉素600 mg/L,最高转化频率达7.1%,经PCR检测,目的基因已整合到菊苣基因组中.     

农杆菌介导红三叶草遗传转化体系的建立

以红三叶草品种‘Altaswede’作为受体材料,以GUS基因为报告基因,研究了影响农杆菌介导红三叶草遗传转化的几种因素以及几种侵染方法对提高转化效率的影响。建立了农杆菌介导的红三叶草快速高效遗传转化体系,并获得了转基因抗性苗。研究结果表明,以上胚轴为外植体,在OD600值为0.6的菌液中侵染20 min,真空度6×10-2Pa处理9 min,共培养5 d后转入含卡那霉素50 mg/L的分化培养基中,4周后60%的外植体分化出不定芽并生根成苗。PCR分子检测表明有80%的植株为GUS阳性,转化率约为50%。     

农杆菌携带柞蚕抗菌肽基因转入桑树的研究

人工合成柞蚕抗菌肽Ｄ基因通过根癌农杆菌Ｔｉ质粒载体转入桑树叶盘，获得基因转化工程苗。柞蚕抗菌肽对桑树青枯病假单孢菌有明显杀菌作用。人工合成柞蚕抗菌肽基因导入农杆菌感染桑树叶盘并诱导成苗。经卡那霉素筛选，胭脂碱电泳检测及抗菌肽基因探针进行印迹点杂交，确认抗菌肽基因转化桑苗成功，为培育抗青枯病品种打下基础。     

百脉根农杆菌快速高效遗传转化体系的建立

以百脉根品种“里奥”作为受体材料,以GUS基因为报告基因,研究了影响农杆菌介导的百脉根遗传转化的几种因素及表面活性剂(PEG 4000)、真空处理和乙酰丁香酮对提高转化效率的影响,建立了农杆菌介导的百脉根快速高效遗传转化体系,并获得了转基因抗性苗。结果表明,以子叶(带叶柄)为外植体,在OD600为0.5的菌液中,加入150 mg/L的PEG 4000,真空度6×10-2Pa,抽真空12 min,共培养3 d,转入含卡那霉素50 mg/L和羧苄青霉素300 mg/L的分化培养基中,约20 d后,50%的外植体分化不定芽,生根成苗。PCR初步检测表明有83%的植株为GUS阳性,转化率约为42%。     

根癌农杆菌介导的苜蓿遗传转化体系的建立

苜蓿基因型是限制遗传转化的关键因素之一。从13份苜蓿材料中筛选出一份具有高频再生潜力的基因型一公农1号,并以该品种为受体转化Na^＋／H^＋逆向转运蛋白基因,优化了遗传转化条件,建立了农杆菌介导的苜蓿遗传转化系统,获得了大量的转基因植株,分子检测证实目的基因已经整合到苜蓿基因组中。     

4种常用的植物转基因技术简介

1农杆菌介导法农杆菌介导法是最早应用、最实用有效并且具有最多成功实例的植物转基因方法。目前，用于植物转基因介导的农杆菌是根癌农杆菌和发根农杆菌。某些根癌农杆菌和发根农杆菌分别含有大小为200～800碱基对的结构和功能相似的n质粒和Rj质粒。Ti质粒和Ri质粒含有3个功能区，     

农杆菌介导多年生黑麦草遗传转化体系的建立

AVP1基因能够提高植物的抗盐性,通过农杆菌介导AVP1基因转化多年生黑麦草,并建立了较为成熟的遗传转化体系。研究表明,将预培养4d的黑麦草胚性愈伤组织经OD600为0.6左右的农杆菌菌液在负压下侵染6min,共培养3d,用250mg/L的羧苄青霉素(Carb)脱菌,附加150μmol/L的乙酰丁香酮(AS),然后转接到含75mg/L潮霉素(Hpt)的筛选培养基上进行筛选培养的转化体系效果最佳。