犬瘟热临床表现类型调查及其治疗方法

采取流行病学调查、临床检查、犬瘟热病毒抗原检测试纸方法,对528例确诊为犬瘟热的犬病进行统计分析。结果:肺炎型犬瘟热占59.1%(312/528),肠炎型犬瘟热占37.5%(198/528),脓疱型犬瘟热占1.9%(10/528),神经型犬瘟热占1.5%(8/528)。针对不同临床表现类型,采取犬瘟热单克隆抗体,中西结合疗法、支持疗法和对症治疗,治愈率达96.5%以上。     

用RT-PCR检测病料中犬瘟热病毒的研究

利用RT-PCR技术检测了来自不同地区水貂、狐狸、貉子和老虎病料中是否存在犬瘟热病毒。根据犬瘟热病毒H和N基因核苷酸序列,设计合成2对引物。利用这2对引物分别对14份病料进行了检测。利用H基因引物从7份病料中扩增出761 bp的核酸片段,利用N基因引物也从同样的7份病料中扩增出586 bp的核酸片段。其余病料的检测结果为阴性。2对引物对病料的检测结果一致。     

犬瘟热诊断方法研究进展

概述了犬瘟热的细胞生物学与分子生物学诊断方法。在细胞生物学方面，对犬瘟热的诊断主要依靠病毒分离培养、动物回归实验、病毒电镜形态检查、病毒特异性抗原及其抗体的检查、包涵体检查等。随着分子生物学的发展，对犬瘟热的诊断从细胞水平发展到分子水平，国内外相继建立起CDV核酸杂交和RT-PCR诊断法，这些方法比传统诊断法具有更高的敏感性和特异性，尤其在犬瘟热的发病早期，机体尚未产生免疫应答时RT—PCR诊断法便能够作出早期诊断。     

毛皮动物犬瘟热RT-PCR方法的建立与应用

根据GenBank上发表的犬瘟热病毒（CDV）核衣壳（N）蛋白基因序列，设计合成了1对寡聚核苷酸引物，建立CDV的RT—PCR检测方法。结果表明，该对引物能够从CDV疫苗株和疑似病例RNA反转录产物中扩增出大小为335bp的核苷酸片段，与理论值一致；该方法特异、敏感，检出率高，可用于CDV临床快速检测。     

水貂源犬瘟热病毒的分离鉴定

利用Vero传代细胞从病死水貂肝脏中分离获得1株病毒。该毒株可使培养细胞出现明显的细胞病变(CPE)。以提取病毒感染细胞总RNA为模板进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),结果扩增出的基因片段大小与预期值相符。根据病毒的致细胞病变特征和RT-PCR鉴定结果,确证该毒株为犬瘟热病毒。     

犬瘟热的诊断治疗

犬瘟热感染分布于世界各地,在自然条件下犬瘟热病毒可感染犬,其中1岁以下的犬最为易感,但随年龄的增长而减少。犬瘟热病毒的传染性高,不易清除与治疗。本文以一例患犬瘟热以支气管炎和上呼吸道感染为症状,一例以神经症状为主的犬进行分析,并且对健康犬和病犬的不同预防治疗措施做出了论证。     

犬瘟热的诊断治疗

犬瘟热感染分布于世界各地,在自然条件下犬瘟热病毒可感染犬,其中1岁以下的动物最为易感,但随年龄的增长而减少。犬瘟热病毒的传染性高,不易清除与治疗。本文以一例患犬瘟热以支气管炎和上呼吸道感染为症状,一例以神经症状为主的病犬进行分析,并且对健康犬和病犬的不同预防治疗措施做出了论证。     

间接ELISA检测抗犬瘟热病毒抗体方法的建立

以大肠杆菌表达的犬瘟热病毒(CDV)重组核蛋白(GST-NP)经纯化后作为包被抗原,通过方阵ELISA滴定确定GST-NP的适宜包被浓度为1.31 μg·mL-1,并由此建立检测抗CDV抗体的间接ELISA方法.通过对已知抗CDV阳性血清及抗其他病毒血清的试验,表明所建立的间接ELISA可特异检测动物血清中的抗CDV抗体.另外,通过不同样品的重复试验以及不同批次的检测试验,证明该方法在用于检测CDV抗体时具有很好的重复性和稳定性.     

犬瘟热病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

研究根据GenBank发表的犬瘟热病毒（CDV）F基因保守区设计合成一对特异性引物,建立检测CDV RT—PCR方法。结果表明,该方法扩增的产物与预期大小相符,时犬腺病毒、犬细小病毒和狂犬病病毒的扩增结果均为阴性;对倍比稀释的CDV cDNA进行检测,其敏感度可达100 TCID50：对30份CDV疑似病例检出的阳性率为100％,而犬瘟热抗原检测卡检出CDV的阳性率为90％。证明建立的RT—PCR方法特异性强、敏感性高,可用于CDV的检测及分子流行病学调查。     

犬瘟热病毒研究进展

从犬瘟热病毒的生物学特性、主要基因组及结构肽、在细胞上的繁殖、检测方法、免疫及防治研究进展方面进行了综述,并在此基础上对今后的研究方向进行了探讨.     

犬瘟热病毒反转录—聚合酶链反应检测方法的建立及初步应用

根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出最佳扩增条件。结果以此对引物进行 PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬 I型腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验证实 ,此法能扩增出稀释 1 0 0 0倍的 CDV强毒细胞培养物 ( 1 0 5 .1 TCID5 0 /0 .1 ml)的反转录产物 ,其敏感性远高于电镜负染和荧光抗体染色法。经初步应用表明 ,此法可用于犬瘟热的临床诊断和实验研究。     

犬瘟热病毒甘肃株的分离和N蛋白基因遗传进化分析

采用Vero细胞从甘肃2008-2009年疑似犬瘟热感染病犬体内分离到8株病毒,通过RT-PCR方法扩增M蛋白基因初步鉴定所获得毒株均为犬瘟热病毒(CDV)。进一步通过RT-PCR方法扩增分离株的N蛋白基因,并进行序列分析。结果表明,8株分离株均为CDV,它们之间N蛋白基因的核苷酸同源性和推定的氨基酸同源性分别为98.4%~99.7%、98.3%~99.6%;8株CDV分离株的N蛋白基因和TN、A75/17相应序列的核苷酸同源性分别为98.5%~99.5%、97.0%~98.0%,推定的氨基酸同源性分别为98.3%~99.2%、98.7%~99.8%;8株CDV分离株N蛋白基因和疫苗株(Onderstepoort和Snyder Hill)的相应序列的核苷酸同源性和推定的氨基酸同源性分别为93.0%~94.0%、96.8%~98.3%。根据N蛋白基因所建立的遗传系统发育树可知这8株CDV分离株与TN的亲缘关系较近,而与疫苗株处于不同的分支上。说明从甘肃分离的CDV野毒株和TN由同一毒株演化而来,与疫苗株亲缘关系较远。     

犬瘟热病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

[目的]建立一种犬瘟热病毒(CDV) RT-nested PCR检测方法.[方法]根据CDV弱毒株Onderstepoort 的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计套式引物,进行特异性、敏感性、重复性实验.[结果]特异性试验表明,该方法可以特异扩增出CDV NP基因片段,但从RNA病毒狂犬病病毒(RV),DNA病毒犬细小病毒(CPV)以及正常Vero细胞中均未扩增出该条带.敏感性试验表明,RT-PCR可以扩增10-3稀释度的病毒RNA,而建立的RT-nested PCR可以扩增10-6稀释度的病毒RNA,后者的敏感性明显高于前者.重复性实验表明,不同情况下的3次重复实验,结果相同.用RT-nested PCR对石河子地区疑似感染CDV的病料进行检测,结果表明,该研究建立的RT- nested PCR不仅能有效的检测CDV感染,而且能够检测不同组织的样品.[结论]建立的RT-nested PCR检测方法,适用于动物CDV的快速诊断和流行病学调查.     

犬瘟热病毒的分离与鉴定

[目的]分离与鉴定犬瘟热病毒(CDV)的石河子流行株。[方法]对临床症状疑似犬瘟热和血清学(ELISA)检测为阳性的自然发病犬,取其淋巴结为病料,接种于非洲绿猴肾细胞系(Vero),进行病毒的分离;用RT-PCR检测感染CDV分离株特异性核酸。[结果]病料接种Vero细胞产生明显的细胞病变(CPE),用RT-PCR技术可扩增出CDV特异性核酸,扩增出的基因片段与预期设计的长度相同,所扩增的CDV分离株H基因片段与CDV C54标准强毒株核苷酸同源性为98.4%。[结论]该研究成功分离并鉴定了CDV石河子流行株,为犬瘟热(CD)的确诊提供了依据。     

犬瘟热病毒分离技术研究进展

由犬瘟热病毒感染引发的犬瘟热是多种动物共患的重要传染疾病。病毒分离技术是对该疾病诊断和病原研究方面的必要手段和基础。目前,多种不同动物来源的原代细胞、传代细胞及稳定表达犬瘟热病毒受体——信号淋巴细胞激活因子的细胞系在犬瘟热病毒分离研究中均得到广泛应用。综述当前犬瘟热病毒分离技术的研究进展,并对不同分离方法优缺点进行比较分析。     

犬感染犬瘟热病毒后抗体的产生规律及检测方法

由犬瘟热病毒引起的犬瘟热(Canine distemper,CD)疾病,是造成犬及部分食肉目动物的一种具有高度传染性和高死亡率的疾病。犬瘟热病毒感染犬产生抗体的规律在临床上具有非常重要的意义。幼犬在出生后约35 d就失去了母源抗体的保护,需要人工对其进行预防免疫,以获得针对该病毒的特异性抗体。犬瘟热病毒在进入机体后,引起以胸腺依赖性的B2细胞所介导的体液免疫为主,初次免疫应答产生的Ig M稍多于Ig G,再次免疫应答时记忆性B细胞发挥着主要的作用,在很短时间内使得特异性Ig G抗体达到较高水平,且在机体内维持很久的时间。通过掌握Ig M和Ig G抗体产生的量及变化规律,可以诊断疾病发生的过程,为疾病的治疗和预防提供诊断依据。     

犬瘟热病毒株的分离鉴定及遗传变异分析

[目的]分离鉴定吉林地区一株犬瘟热病毒,为犬瘟热的防治提供依据。[方法]应用Vero细胞从疑是患犬瘟热藏獒脏器组织中分离病毒,并进行分子病毒学鉴定,进一步对该犬瘟热病毒株的血凝素蛋白（H）基因序列进行分析。[结果]确定该犬瘟热分离株为A-sia-Ⅰ型犬瘟热,命名为ZA10-JL。[结论]对进一步研究犬瘟热,预防以及流行病学调查都有重要的参考作用。     

貉抗犬瘟热病毒高免血清的制备

在貉饲养场打皮前期,采用犬瘟热弱毒苗对貉群进行3次加强免疫。打皮时同时采血和分离血清,使用双抗和过滤方法对血清进行除菌处理后冷冻保存备用。以中和试验来检测血清中的犬瘟热病毒中和抗体效价,并对所制备的高免血清进行无菌检验和安全试验。结果表明:加强免疫组血清中犬瘟热中和抗体效价1∶102.53±0.16,而对照组的抗体效价为1∶101.61±0.12;无菌检验未发现血清有任何细菌,安全试验显示皮下注射的幼貉没有任何明显的不良反应。