二倍体草莓‘Ruegen’再生体系的建立乔瑞琪1,金万梅2*,沈元月1

【方法】以二倍体草莓(Fragariavesca)‘Ruegen’叶片为试材,研究生长调节物质浓度和配比、不同暗培养时间、不同类型植物凝胶对其叶片再生的影响,【目的】建立‘Ruegen’草莓叶片再生体系.【结果】结果表明:暗培养7d、以Carrageenan为固化剂利于‘Ruegen’草莓叶片再生;激素配比为TDZ20mg/L+IBA02mg/L时,再生频率较高,不定芽的再生率达到8103%,平均再生芽数达到530个.     

‘京枣39’离体叶片高效再生体系的建立

【目的】‘京枣39’是一种优质的枣鲜食新品种，目前尚无有效的离体再生体系，影响了自根苗的培育和苗木纯度。为了解决枣遗传转化效率低等问题，本研究探究了枣叶片再生的不同影响因素，以期建立高效的叶片再生体系。【方法】以‘京枣39’组培苗叶片为试材，研究了不同接种方式、基本培养基种类、植物生长调节剂种类和浓度配比对离体叶片直接诱导不定芽再生的影响。【结果】正交试验结果表明：叶片正放的接种方式再生率远高于叶片反放，是‘京枣39’叶片再生不定芽的最佳放置方式；基本培养基对‘京枣39’叶片再生的影响要大于植物生长调节剂，且最优培养基为1/2 MS，最佳植物生长调节剂为细胞分裂素6-BA，本研究确立的‘京枣39’组培苗叶片再生的最优体系为1/2 MS+1 mg/L噻苯隆+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L麦芽糖+6 g/L琼脂，再生率可达79.17%，平均每叶片再生不定芽能达到4.67个。进而初探并建立了‘京枣39’组培苗的最佳扩繁体系为：MS+20 g/L麦芽糖+6 g/L琼脂+3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，分枝率高达88%，平均分枝数达2.76枝...     

“晶瑶”草莓叶片再生体系的建立

以草莓"晶瑶"为试材,研究了暗培养时间、培养温度、激素配比、硝酸银浓度、不同植物凝胶等对不定芽再生的影响,建立了"晶瑶"草莓叶片的离体再生体系。结果表明:硝酸银对"晶瑶"草莓叶片再生有抑制作用;暗培养15 d、28℃的培养温度、以Phytagel为凝固剂有利于"晶瑶"草莓叶片再生;TDZ 1.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L是较好的诱导培养基激素配比,此时不定芽的再生率达到76.77%,平均再生芽数达到4.3个。     

‘雪球’海棠组织培养体系的建立与优化

【目的】建立‘雪球’海棠离体植株组织培养快繁体系,并对组织培养体系进行优化。【方法】以‘雪球’海棠当年生茎段为起始接种材料,获得无菌苗,利用无菌苗和试管苗叶片为材料,以MS为基础培养基,采用正交试验研究不同激素及其配比对雪球组培苗扩繁、植株再生和组培苗生根的影响。【结果】用2 g/L HgCl₂处理‘雪球’海棠茎段外植体是较为恰当的消毒及获得无菌苗的方法。在MS+2.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IBA培养基中组培苗的总增殖倍数最高,为9.11,为最适增殖培养基;在MS+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IBA培养基中组培苗的总增殖倍数为6.38,分化的芽生长良好,无玻璃化,为获取叶盘不定芽再生试验用叶片的最适培养基。在MS+0.2 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA培养基（以山梨醇为碳源）中,叶盘不定芽再生效率最高,为60.71%,为不定芽再生最适培养基。‘雪球’海棠生根容易,在1/2 MS+0.2 mg/L IBA培养基中,组培苗培养7 d开始生根,生根率为100.0%。【结论】建立了‘雪球’海棠组织培养体系,明显提高了其繁殖速率,使其生根率可达到100.0%。     

森林草莓‘Hawaii4’高效遗传转化系统的建立

以森林草莓‘Hawaii 4’离体叶片为试验材料,对叶龄、暗培养、植物生长调节剂种类及其配比和抗生素敏感性进行研究,建立森林草莓‘Hawaii 4’高效稳定的遗传转化系统。研究结果显示:49d叶龄的叶片在含有3.0mg/L 6-BA,0.1mg/L IBA的MS培养基上暗培养3d时叶片的再生频率最高,再生频率可达到88%。另外,在农杆菌介导的遗传转化过程中,300mg/L羧苄青霉素具有最适的农杆菌抑制效果;用于阳性植株筛选的卡那霉素,最适质量浓度为20mg/L。通过GFP荧光观察及PCR检测,获得阳性植株的遗传转化效率可达18%。     

‘辽峰’葡萄叶片不定芽再生研究

以‘辽峰’葡萄试管苗叶片为试材,探讨了基本培养基、不同激素组合和暗培养对试管苗叶片不定芽诱导的影响。结果表明,基本培养基、不同激素组合和暗培养对叶片不定芽再生均起着重要的作用,叶片不定芽诱导最佳培养基为1/2 MS+NAA 1.2 mg/L+TDZ 3.0 mg/L,先暗培养14 d后转入光下常规培养,‘辽峰’叶片不定芽再生效果最好,不定芽再生率高达88.09%。     

‘长富2号’红富士苹果离体叶片高效再生不定芽技术研究

以‘长富2号’(Nagafu No.2)红富士苹果试管苗为试材,研究了BA和TDZ组合、不同浓度的TDZ、糖的种类和不同暗培养时间对红富士苹果离体叶片再生不定芽的影响。结果表明:高浓度的TDZ可以有效提高红富士苹果离体叶片再生效率;最适宜叶片再生的糖类为蔗糖,最适宜的暗培养时间为3周,最佳的叶片再生培养基为MS+TDZ 6.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖35 g/L+琼脂6.2 g/L。在上述培养条件下,‘长富2号’红富士苹果离体叶片再生率达到100%,平均叶片再生芽数达到10.6个。     

‘红颜’草莓茎尖组织快繁与病毒检测

【目的】旨在建立‘红颜’草莓组织快繁体系。【方法】以‘红颜’草莓茎尖为试材,用茎尖组织培养法和RT-PCR方法,研究不同培养基对其茎尖萌发率、不定芽增殖、生根率等的影响,并检测常见的5种草莓病毒(草莓轻型黄边病毒、草莓斑驳病毒、草莓镶脉病毒、草莓皱缩病毒和黄瓜花叶病毒)。【结果】适宜‘红颜’草莓初代培养基为MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.2 mg/L+PVP 1 g/L,继代培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+PVP 1 g/L,生根培养基为1/2MS+IBA 0.4 mg/L,移栽基质为草炭、蛭石和珍珠岩(体积比为2∶1∶1)。利用RT-PCR方法检测草莓病毒的脱除效果,脱除率为64.1%。【结论】该试验获得稳定的‘红颜’草莓组织快繁体系,为草莓产业高质量发展提供基础。     

草莓叶片离体再生技术的研究

以红颊、章姬、丰香叶片为试材,对影响草莓叶片不定芽再生的主要因素进行了试验研究,建立了草莓离体叶片的再生体系。试验结果表明,基因型、不同激素种类和配比、叶龄直接影响了草莓叶片再生芽的发生。基因型是影响草莓叶片再生能力的决定因素,叶片四周刻伤处理能有效地提高不定芽的诱导率,适度的暗培养有利于不定芽的发生。叶片愈伤组织的诱导培养基以MS＋TDZ2～3mg/L较理想,芽伸长的理想培养基为MS＋6-BA0.3～0.5mg/L,生根培养基以1/2MS＋I-BA0.3mg/L较适宜,移栽成活率可达90%以上。     

明水梨叶片不定芽再生体系的建立

以‘明水’梨(Akemizu)叶片为外植体,研究了不同基本培养基,不同浓度噻重氮苯基脲(TDZ)和吲哚丁酸(IBA)的组合,不同暗培养时间以及不同浓度的硝酸银(AgNO3)对梨叶片不定芽再生的影响。试验结果表明,在NN69+TDZ 1.5mg/L+IBA0.2 mg/L+AgNO31.0 mg/L中暗培养25 d后,叶片不定芽再生率最高,达到71.8%。     

玫瑰叶片直接再生及其影响因素

以‘唐白’、‘紫枝’、‘唐红’和‘朱龙游空’4个玫瑰品种为试材研究不同的外植体、暗培养时间和激素组合对玫瑰不定芽直接诱导和植株再生的影响。结果表明:4个玫瑰品种在不定芽诱导培养基上黑暗培养10~15d转入光照培养15~20d,而后转入含有0.5mg/L BA和0.01mg/L NAA的MS培养基光下培养,再生效果最好;不同外植体间存在显著差异,未展开小叶的再生能力最好;不同基因型之间存在显著差异,‘唐白’在添加1.0mg/L TDZ、0.05mg/L NAA的1/2MS培养基中再生率最高,达到70.6%;‘紫枝’和‘唐红’在添加1.5mg/L TDZ、0.05mg/L NAA的1/2MS培养基中再生率最高,分别为47.9%和36.5%;‘朱龙游空’在添加1.0mg/L BA、0.3mg/L TDZ和0.05mg/L NAA的1/2MS培养基中再生率最高,达到60%。黑暗培养对不定芽分化有一定的促进作用,但不利于不定芽再生,‘唐白’、‘紫枝’和‘朱龙游空’的最佳暗培养时间为10d,而‘唐红’的最佳暗培养时间为15d。另外,4个玫瑰品种在添加有IBA 0.5mg/L的1/2MS培养基上生根率最高。     

豌豆离体再生体系建立及遗传稳定性研究

【目的】提高速豌豆诱伤组织和不定芽的诱导率,建立豌豆高效离体再生体系.【方法】以半无叶型豌豆品种‘陇豌1号’和蔓生型豌豆品种‘S3008’的茎段为外植体,研究不同基因型、培养基激素配比对愈伤组织诱导、分化的影响.【结果】‘陇豌1号’茎段愈伤组织诱导率和分化率较高,分别达到88.7%和76.7%,‘S3008’茎段最高愈伤组织诱导率和分化率分别为86.7%和74.7%.诱导愈伤组织最适培养基是MS+2mg/L TDZ+0.2mg/L 2,4-D;诱导不定芽形成的最适培养基为MS+2mg/L TDZ+1mg/L 6-BA,平均不定芽数为4.3;在不定芽诱导生根培养基(1/2MS+20g/L蔗糖+1.5mg/L ABT)上,生根率为74.0%,移栽后再生植株成活率达86.0%.两个豌豆品种都能得到再生植株且繁殖系数高.【结论】本培养体系适宜豌豆离体再生.通过染色体分析,再生植株染色体数和供体亲本材料一致,初步表明再生植株遗传稳定.     

大白菜真叶高频再生体系的建立

【目的】建立大白菜真叶高效再生体系。【方法】选择‘06J28’、‘92S105’、‘06J30’、‘06J31’4种不同基因型大白菜作为试验材料,以刚长出第2片真叶的大白菜幼苗的第1片真叶为外植体,研究不同激素(6-BA、NAA、TDZ)组合、外植体切割与接种方式以及不同基因型对真叶不定芽再生的影响。【结果】在MS+4.0mg/L 6-BA+0.14mg/L NAA培养基上培养时,‘06J28’真叶不定芽再生率和再生系数达到最大分别为87.63%和2.62;在MS+0.3mg/L TDZ+0.14mg/L NAA培养基上培养时,‘06J28’真叶不定芽的再生率和再生系数分别为80.73%和1.89,表明TDZ的作用与6-BA相似。在真叶柄基部和下胚轴交接处横切,保留完整真叶作为外植体为最佳切割方式,以真叶柄的下端竖直向下插入培养基为最佳接种方式。在供试的4种基因型材料中,‘06J28’真叶的再生率最高,达87.63%;‘92S105’的再生系数最高,达3.76。【结论】建立了大白菜真叶高效再生体系,为大白菜转基因研究奠定了基础。     

植物激素和光暗培养条件对卷丹百合再生体系的影响

【目的】探究植物激素和光暗培养条件对卷丹百合（Lilium lancifolium Thunb）再生体系的影响,为卷丹百合种质资源开发和大面积推广种植打下基础。【方法】以卷丹百合鳞片为外植体,分析培养基中不同植物激素［NAA、6-BA、2,4-D、噻苯隆（TDZ）和毒莠定（PIC）］配比及光（光照时间14 h/d）、暗（全天黑暗）培养条件对卷丹百合鳞片愈伤组织诱导、增殖及不定芽再生的影响,建立卷丹百合组培高效再生体系。【结果】与不添加任何激素的对照（CK）相比,添加激素的培养基均能显著提高卷丹百合鳞片愈伤组织的诱导率（P<0.05）,其中TDZ 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L组合的效果最佳,暗培养条件下其愈伤组织诱导率达65.57%;在TDZ 0.4 mg/L+2,4-D 0.05 mg/L的培养基中暗培养20 d后,再转入TDZ 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L的培养基中继续暗培养40 d,愈伤组织增殖倍数最高,可达2.45倍。6-BA与NAA组合比6-BA与PIC组合更利于诱导不定芽的产生,芽再生倍数最高的培养基为6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.1mg/L,暗培养条件下其再生倍数最高可达6.08倍。与光培养相比,暗培养更利于愈伤组织诱导和增殖,但在愈伤组织诱导不定芽阶段,长时间暗培养不利于芽的生长,暗培养20 d后转移至光培养条件下继续培养40 d,生成的不定芽色泽鲜绿,叶片伸展,长势旺盛,利于壮苗和生根。【结论】卷丹百合组织培养的不同阶段受不同种类和浓度的植物激素组合影响;暗培养条件更利于愈伤组织的诱导和增殖,暗培养结合光培养条件最适合不定芽的再生和分化。     

库尔勒香梨离体叶片再生体系的建立

【目的】建立库尔勒香梨叶片诱导再生的稳定高效再生体系。为梨的遗传转化研究奠定基础。【方法】以库尔勒香梨离体培养的继代30 d左右的无菌苗叶片为材料,1/2 MS为基本培养基,用 TDZ与 IBA或 NAA分别组合设计配方,研究不同生长调节剂质量浓度组合对不定芽诱导过程中愈伤组织形成率和不定芽形成率的影响,选取最优配方附加不同质量浓度的AgNO₃,获得不定芽再生的最佳培养基。用IBA和NAA分别组合设计生根生长调节剂的配比,根据生根率、平均生根数以及平均生根长度筛选最适宜生根的生长调节剂的配比,建立生根的培养体系。【结果】库尔勒香梨叶片诱导不定芽再生的最佳培养基为1/2 MS+TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+AgNO₃ 0.5 mg/L,愈伤组织诱导率100%,不定芽形成率84.92%。最适宜香梨再生苗生根的培养配方为1/2 MS + 0.5 mg/L IBA + 0.9 mg/L NAA,结合前期暗培养7 d,生根率可达100%,平均生根条数为5.66,平均根长度为 2.8 cm。【结论】建立了库尔勒香梨的再生体系。     

菊花2个品种高效再生体系的建立

以地被菊花2个品种‘铺地金’和‘北林红’的叶片为外植体,以MS为基本培养基,以不同浓度配比的6-BA,NAA为生长调节物质进行离体培养,直接分化出不定芽获得再生植株.试验表明:‘铺地金’叶片外植体再生的最适培养基为MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 1.0 mg/L,再生率高达96%,其叶柄在此培养基上的再生率为90%;‘北林红’再生的最适宜培养基为MS 6-BA 1 mg/L NAA 0.5 mg/L,再生率为96%,但其茎段和叶柄在此培养基上不能高效再生.‘铺地金’腋芽增殖的最佳培养基为MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.01 mg/L,每腋芽外植体平均增殖不定芽数达到5.5个.‘北林红’腋芽增殖的最佳培养基为MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.05mg/L和MS 6-BA 0.5mg/L NAA 0.01mg/L,腋芽外植体平均增殖不定芽数达到6.3个和5.6个,二者之间的差异不显著.     

真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片再生体系的初步建立

【目的】初步建立真梅系梅花叶片的再生体系,为真梅系梅花良种培育及叶盘法基因转化等研究奠定基础。【方法】以真梅系梅花‘三轮玉蝶’叶片为试验材料,通过正交试验对外植体处理方法以及愈伤组织诱导、分化和生根培养基进行筛选,探讨真梅系梅花叶片再生的影响因素。【结果】选用梅花‘三轮玉蝶’1年生枝条基部的叶片,背面向上接种并黑暗培养,有益于愈伤组织形成。在培养基1/2MS+TDZ 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L中,叶片愈伤组织诱导率可以达到85.04%;愈伤组织转接在培养基1/2 MS+TDZ 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L中,分化率可达46.44%;分化出的不定芽在添加6-BA 0.5mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 0.3mg/L的1/2MS培养基上诱导生根效果较好,生根率达88.29%。【结论】明确了处理方法和部分外源激素对梅花‘三轮玉蝶’叶片愈伤组织形成的影响,初步建立了梅花‘三轮玉蝶’叶片再生体系。     

‘Damas1869’李离体叶片不定芽再生影响因素分析

以‘Damas1869’李试管苗幼嫩叶片为试材,对影响离体叶片再生的培养基种类、激素浓度、叶片放置方式、暗培养时间、琼脂用量等关键因素进行研究。结果表明:F14培养基再生效果最好,明显优于MS和WPM培养基;最佳激素配比为4.0 mg/L TDZ+0.5 mg/L IBA,用4.5 g/L琼脂配制偏软的再生培养基,叶片近轴面向下接触培养基,暗培养5 d后转光下培养有利于提高离体叶片的再生效率,再生率可保持在73.5%左右,平均每叶再生3~5个芽。     

黑莓‘Kiowa’叶柄离体直接再生体系的建立

以黑莓品种‘Kiowa’无菌苗叶柄为外植体,研究了培养基类型、暗培养时间、着生位置、激素种类配比和生根条件等对叶柄不定芽诱导的影响,建立了叶柄直接再生体系。结果表明,把‘Kiowa’试管苗继代培养30～40 d后,取自上而下第1～2叶位的叶柄为外植体,接种在MS或1/2MS上,暗培养14 d或21 d叶柄的再生效果较好。‘Kiowa’叶柄不定芽再生的适宜培养基为MS+CPPU 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L,不定芽再生率达87.46%,平均叶柄再生芽数目达4.42。芽增殖以MS+6-BA 0.5 mg/L+IAA 0.1 mg/L效果最好,增殖系数达5.19;再生植株生根以1/2MS+NAA 0.03 mg/L最佳,生根率达91.67%,平均生根条数为4.00。     

‘丰香’草莓叶片再生体系的建立

以草莓(Fragaria ananassa Duch.)主栽品种‘丰香’叶片为外植体,就不同质量浓度生长激素对叶片外植体成活率、愈伤组织、不定芽的诱导率和再生芽生根培养的影响进行了研究,并建立了再生体系.结果表明:MS+1.5 mg/L噻苯隆(Thidiazuron,TDZ)+0.4 mg/L吲哚乙酸(3-indolebutyric acid,IBA)培养基最适于叶片不定芽分化,再生芽在1/2MS+0.1 mg/L IBA培养基上生根效果最好.