黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响

笔者探讨黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响,结果表明:采用硝酸还原酶法黄芪多糖(900μg/mL)组细胞分泌NO量在1 h和3 h时极显著高于对照组(P<0.01),在6 h显著高于对照组细胞(P<0.05);黄芪多糖(450μg/mL)组细胞分泌NO量在1 h和6 h时显著高于对照组(P<0.05),在3 h与对照组差异不显著(P>0.05)。黄芪多糖可引起大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO分泌量的升高。     

黄芪多糖及黄芪甲苷干预对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症的作用

【目的】考察黄芪提取物黄芪甲苷(Astragalus Ⅳ,AS-Ⅳ)及黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)干预对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞(Bovine mammary epithelial cells,BMECs)炎症的作用及对炎症细胞中β–酪蛋白表达的影响。【方法】使用APS、AS-Ⅳ干预LPS诱导的BMECs，检测细胞炎症因子、氧化因子、凋亡因子、β–酪蛋白的变化。【结果】CCK-8筛选发现，1 g/L APS及50、75、100 mg/L AS-Ⅳ为刺激BMECs的最适质量浓度，0.5 mg/L LPS刺激BMECs 24 h后成功建立炎症细胞模型。AS-Ⅳ、APS可显著抑制炎症细胞中乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)的表达，缓解炎症状态下细胞膜的持续损伤；显著抑制炎症细胞中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的表达，缓解细胞的氧化损伤；显著抑制炎症细胞中IL-6、IL-8和TNF-α炎...     

中药有效成分诱导肺微血管内皮细胞表达IFN-γ的研究

以体外培养的RPMVECs(rat pul monary microvascular endothelial cells,RPMVECs)为模型,采用双夹心ELISA法和MTT法,研究了绿原酸、连翘酯苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素诱导RPMVECs表达IFN-γ(inferteron-γ)的影响以及对PMVECs的毒性。ELISA检测结果表明,加入质量浓度为5,10,20,50,100μg/mL的5种中药成分刺激细胞16 h后,在培养细胞上清液内均能检测到IFN-γ,其中绿原酸、黄芩素组IFN-γ的表达量随药物浓度增大而减少;连翘酯苷组IFN-γ的表达量均较多;黄芩苷、汉黄芩素组均在10μg/mL时IFN-γ的表达量达到峰值,随后IFN-γ的表达量随浓度增大而减少。MTT检测结果显示,各浓度的黄芩苷、黄芩素对PMVECs均有一定程度的抑制作用,而连翘酯苷对PMVECs均有增殖作用,绿原酸、汉黄芩素的细胞毒性则随药物浓度而发生变化。     

黄芪药渣中黄芪甲苷含量的测定

[目的]测定黄芪药渣中黄芪甲苷的含量。[方法]用高效液相色谱法,HPLC条件：Agilent Zorbax XDB-C18（4.6 mm×150.0 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-水（35∶65,V/V）,流速1.0 m l/m in,检测波长203 nm,柱温30℃,进样量10μl。[结果]黄芪甲苷在0.23~2.3μg/m l范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为99.00%,RSD值为2.00%（n=9）,黄芪药渣中黄芪甲苷含量为0.74 mg/g。[结论]该方法快速、简便,黄芪药渣仍有较大的再利用价值。     

HPLC-ELSD法测定中药复方黄芪注射液中黄芪甲苷的含量

采用HPLC-ELSD法测定中药复方黄芪注射液中黄芪甲苷的含量,以Waters SunFire C18(4.6mm×250 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-水(32∶68)为流动相,流速1 mL/min,蒸发光散射检测器,漂移管温度为55℃,载气流速1.0 L/min.结果表明,黄芪甲苷含量在0.060 ～1.150 mg/mL(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率为98.74％,RSD =1.41％(n=9),精密度高,重现性好.供试品中黄芪甲苷含量为1.588～1.788 μg/mL,HPLC-ELSD法测定复方黄芪注射液中黄芪甲苷含量的方法简易可行,可作为该制剂的质量控制方法.     

黄芪多糖脂质体对罗非鱼免疫功能和

【目的】证实脂质体形式的黄芪多糖能否提高其药效、减少药物剂量。【方法】选用体重40.99±8.84 g的尼罗罗非鱼200尾,随机均分为5组,设为空白对照组、黄芪多糖组（200 mL/kg）及黄芪多糖脂质体高剂量组（400 mL/kg）、中剂量组（200 mL/kg）、低剂量组（100 mL/kg）;分别于试验第10、20和30 d测定罗非鱼脾脏指数、一氧化氮（NO）水平、溶菌酶（LZM）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化物酶（POD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及总抗氧化力（T-AOC）。【结果】与空白对照组相比,黄芪多糖脂质体对罗非鱼脾脏指数、LZM活性的影响不显著（P＞0.05）,但能显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）提高罗非鱼血浆NO水平及SOD、POD、GSH-Px活性;黄芪多糖脂质体提高罗非鱼机体免疫功能与抗氧化能力的效果优于黄芪多糖,且整体上呈中、低剂量的效果优于高剂量。【结论】黄芪多糖脂质体能提高罗非鱼免疫功能和抗氧化能力,效果优于黄芪多糖,且可降低其使用剂量和提高生物学利用度。     

HPLC-ELSD法测定肾衰康口服液中黄芪甲苷的含量

测定肾衰康口服液中黄芪甲苷含量。采用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷的含量。色谱柱：Diamonsil-C18柱（4.6×250 mm,5μm）;流动相：乙腈-水（30：70）;流速：1mL/min;漂移管温度：105℃;载气流速：2.5L/min。黄芪甲苷进样量在0.4μg～4μg范围内呈现良好的线性关系（r=0.999 5）,平均回收率为98.85%,RSD为1.65%（n=6）。本法简便、准确,可作为该制剂的质量控制方法。     

HPLC法测定不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量

[目的]比较不同产地黄芪中黄芪甲苷含量的大小。[方法]采用高效液相-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）测定黄芪中黄芪甲苷的含量,色谱柱为Agilent C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm, 5μm）;流动相为乙腈-水（40∶60）;流速为1.0 mL/min;柱温为30℃;进样量为5μL。ELSD检测器漂移管温度为100℃;载气压力为200 kPa。[结果]不同产地黄芪中黄芪甲苷含量分别为甘南0.147%、陇西0.117%、岷县0.205%、山西0.182%、张掖0.067%、武威0.045%、庆阳0.097%、渭源0.114%、内蒙古0.087%、新疆0.046%。[结论]不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量差异较大,4个黄芪主产省（自治区）中甘肃产的黄芪中黄芪甲苷含量最高,山西、陕西产的黄芪中黄芪甲苷含量相对较高,新疆产的黄芪中黄芪甲苷含量较低。同一省份中陇西、甘南、岷县、庆阳、渭源县产黄芪中黄芪甲苷的含量较高,而武威和张掖产黄芪中黄芪甲苷的含量偏低。     

高效液相色谱法分析和制备黄芪中的黄芪甲苷含量

[目的]本试验利用高效液相色谱法分析和制备黄芪水煎液中的黄芪甲苷并通过质谱对收集到的组分进行鉴定.[方法]分析型色谱条件为色谱柱为EcliPseXDB-C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm)柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,柱温25℃,流速0.8 mL/min,检测波长254 nm,进样量20μL.制备型色谱条件为色谱柱为Hypersil C18(20 mm×300 mm,10μm)柱,流速10 mL/min,进样量2 mL,其他同分析型色谱.质谱分析法为电喷雾离子化(electrospray ionization,ESI)源,源电压3.5 kV,正、负离子检测,鞘气(N2)流速80a.u.,辅助气(N2)流速15 a.u.,碰撞气体为氦气,毛细管温度350℃,毛细管电压±5V.采用全离子扫描方式,扫描范围50～2 000 m/z.[结果]经分析型色谱得标准曲线回归方程为A=0.1717 C+0.4657,r=0.9996,在0.01～0.2 mg/mL范围内线性关系良好.制备型色谱方法得到的峰型较好,峰间隔适当,能够将相邻组分分离.收集保留时间为26 min的组分,经分析型色谱和ESI-MSn鉴定该组分为黄芪皂甙Ⅳ (astragaloside Ⅳ),即黄芪甲苷,且纯度可达95％.[结论]该方法精密度高、稳定性可靠、重现性好、加样回收率高,收集到的成分准确,纯度高,适用于黄芪中黄芪甲苷的分析和制备.     

响应面分析法优化黄芪多糖的提取工艺

为黄芪的进一步开发利用提供参考,选取黄芪多糖提取时间、提取温度和料液比3个因素进行二次回归正交组合设计试验,对其提取工艺参数进行优化研究。结果表明:在提取时间为56 min、温度为84℃、水体积为276 mL的条件下,黄芪多糖提取最大预测值为8.979μg/mL,实际提取值8.945μg/mL,两者基本相符。利用优化工艺参数提取黄芪多糖时,具有最大的提取产量。     

黄芪多糖对犬血清免疫球蛋白、IFN-γ水平及分泌型IgA表达的影响

旨在研究黄芪多糖对犬血清中免疫球蛋白和γ干扰素水平及分泌型IgA表达的影响。将18只1岁龄健康比格犬随机分为3组,每组6只,分别为对照组、低剂量组(基础日粮+以生药计w=1%的黄芪多糖)和高剂量组(基础日粮+以生药计w=2%的黄芪多糖),试验期14d。在第0、7、14天采集血清,用ELISA法检测血清中免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)及γ干扰素(IFN-γ)水平。第14天时,全部犬解剖,采集十二指肠、空肠中段和回肠,用RT-qPCR法检测IgA mRNA相对表达量,免疫组化法(IHC)检测肠黏膜SIgA蛋白的表达情况。结果显示,与对照组相比,黄芪多糖组犬血清中IgA、IgG、IgM和IFN-γ水平显著升高,犬肠黏膜SIgA蛋白表达量显著升高。表明黄芪多糖能显著提高犬血清中IgA、IgG、IgM和IFN-γ水平,促进犬小肠IgAmRNA和SIgA蛋白表达,提高机体免疫力。     

黄芪多糖和枯草芽孢杆菌代谢产物在PK-15细胞上对TGEV的影响

为了研究黄芪多糖和枯草芽孢杆菌代谢产物在PK-15细胞上对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的影响,在TGEV感染PK-15细胞时分别加入枯草芽孢杆菌代谢产物、黄芪多糖以及联合物,采用MTT法检测其病毒抑制率,荧光定量PCR法检测枯草芽孢杆菌代谢产物及黄芪多糖联合后对TGEV N及IFN-γmRNA表达量的影响。结果表明:枯草芽孢杆菌代谢产物具有抗TGEV作用,单独使用黄芪多糖同样能抑制TGEV感染PK-15细胞,联合处理后病毒抑制率显著上升。荧光定量PCR结果表明,经过联合物处理的PK-15细胞中的TGEV N基因表达量显著降低,3 h和6 h时PK-15细胞内的IFN-γmRNA表达量显著上升。     

中药复方多糖对鸡IFN-γ、IL-4和L-12质量浓度的影响

通过观察和比较盐酸左旋咪唑、黄芪多糖和对鼠免疫增强效果显著的中药复方多糖对雏鸡细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-12质量浓度的动态变化,筛选出可显著提高雏鸡细胞因子质量浓度的中药复方多糖的最佳剂量。将300羽雄性良凤青脚麻鸡随机分为6组,即生理盐水组(对照)、黄芪多糖组(APS)、盐酸左旋咪唑组(LM)、高剂量中药复方多糖组(cCHMPSH)、中剂量中药复方多糖组(cCHMPSM)和低剂量中药复方多糖组(cCHMPSL),每组50只。于8日龄时分别皮下注射生理盐水、25g/L APS、50g/L LM、50g/L cCHMPS、25g/L cCHMPS、12.5g/L cCHMPS,每只注射0.2mL,连续注射7d,在免疫后第8、14、21、28、35、42天采血,测定外周血中IFN-γ、IL-4和IL-12的质量浓度。结果表明,黄芪多糖和中药复方多糖均能显著提高外周血中IFN-γ、IL-4和IL-12的质量浓度,调节Thl/Th2免疫平衡,并且中剂量中药复方多糖免疫效果优于黄芪多糖和高、低剂量中药复方多糖,提示中药复方多糖具有开发成疗效确切、稳定、无毒的免疫增强剂的潜力。     

施肥对膜荚黄芪生长及黄芪甲苷含量的影响

【目的】探究不同氮、磷配比对药用植物膜荚黄芪生长和黄芪甲苷积累的影响,为延安地区黄芪施肥和品质评价提供参考。【方法】采用田间试验设置不同氮磷施肥配比,共设10个处理,分别为N0P0(对照)、N1P1、N1P2、N1P3、N2P1、N2P2、N2P3、N3P1、N3P2、N3P3(N0、N1、N2、N3分别表示施用0,120,150和180kg/hm~2尿素;P0、P1、P2、P3分别表示施用0,450,600和750kg/hm~2过磷酸钙),测定不同处理黄芪茎直径、株高、冠幅、根长、根直径和干物质积累,衡量黄芪生长状况;同时测定不同处理黄芪水分、灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物和黄芪甲苷含量,探讨施肥对黄芪品质的影响。【结果】不同氮、磷配比对黄芪生长各指标影响不同。茎直径的适宜施肥方案为N2P1和N3P1处理,而N1P3和N2P3处理的株高、冠幅、根长和根直径等指标响应最优。N1P3处理黄芪终极生长量最高,较对照N0P0增加24.87%;N2P1和N2P3处理次之,对照最低。各施肥处理干物质累积总量比对照增加18.18%～70.06%,平均增加44.12%。施氮量为120和150kg/hm~2时,施磷量对黄芪水分含量的影响总体表现为:450kg/hm~2600kg/hm~2750kg/hm~2,但水分含量对氮肥响应不明显;灰分含量总体随氮磷肥施用的增加而降低;在施氮量为120～150kg/hm~2时,水溶性浸出物、醇溶性浸出物和黄芪甲苷含量总体随施磷量的增大而升高,施氮量高于150kg/hm~2时,随施磷量的升高而降低;在N1P3和N2P3施肥水平下,黄芪甲苷含量分别较对照组提高了36.36%和48.48%。【结论】合理配施氮磷肥可促进黄芪生长、干物质积累和品质提高,且以N1P3和N2P3处理效果较佳。     

蒙古黄芪黄芪甲苷与金属元素含量的关系分析

【目的】分析蒙古黄芪黄芪甲苷含量与植物、土壤中金属元素含量的相关性,以及土壤-植物系统中金属元素间的关系,为蒙古黄芪的种植与品质提升提供参考。【方法】选择7个蒙古黄芪种植区,取蒙古黄芪种植区土壤,采用高效液相色谱 蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)检测其中的黄芪甲苷含量,通过电感耦合等离子体质谱（ICP MS）技术检测黄芪与土壤中的金属元素含量,分析不同产地蒙古黄芪中黄芪甲苷含量与金属元素的相关性。【结果】7个蒙古黄芪种植区中,黄芪甲苷含量以内蒙赤峰元宝山下坎村种植区最高,内蒙古固阳县下湿壕种植区最低。蒙古黄芪根中各金属元素含量从高到低依次为 K＞Mg＞Fe＞Al＞Ca＞Cr＞Mn＞Zn＞Cu＞As＞Pb＞Cd,其中Cr元素在黄芪中大量富集;土壤中金属元素含量从高到低依次为Al＞K＞Fe＞Mg＞Ca＞As＞Mn＞Pb＞Cr＞Zn＞Cu,7个种植区As元素含量均严重超标,4个种植区Pb元素含量也出现超标。蒙古黄芪根中的金属元素含量间、土壤中的金属元素含量间及根中与土壤中的金属元素含量间相关性均较好。其中蒙古黄芪植株中的Ca、Pb、As元素含量与土壤中的Ca、Pb、As元素含量呈显著负相关（P<0.05）,植株中的K、Zn元素含量与土壤中的K、Zn元素含量呈显著正相关（P<0.05）;蒙古黄芪根中的黄芪甲苷含量与其根中的Mg、Cu、Cd含量及土壤中的Ca元素含量呈显著正相关(P<0.05）。【结论】蒙古黄芪及其栽培土壤中的金属元素间存在一定相关性,二者金属元素间的协同或拮抗作用共同调节黄芪甲苷的积累。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-12 mRNA表达量的影响

【目的】中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-12 mRNA表达量的影响。【方法】采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL中药复方多糖共培养24 h,收集细胞,采用Real-time PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量。【结果】(1)与对照组相比,不同剂量中药复方多糖均能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量(P0.05)。(2)中药复方多糖剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量最高,中药复方多糖剂量为100μg/mL时,BB基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量最高。【结论】中药复方多糖能不同程度的促进各MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12 mRNA的表达,且不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。     

黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳的制备及免疫佐剂效应研究

【目的】筛选制备W/O型黄芪多糖(APS)、紫锥菊提取物(EM)纳米乳佐剂的最佳配方,并考察该纳米乳佐剂的免疫效应。【方法】根据伪三元相图中纳米乳区面积的大小并结合肉眼观察,筛选制备黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳佐剂的配方,观测制剂的形态、粒径分布、pH、黏度及稳定性;以卵清白蛋白(OVA)为模式抗原,用含不同质量黄芪多糖与紫锥菊提取物的纳米乳佐剂免疫小鼠后,测定并比较血清OVA诱导特异性抗体水平的变化。【结果】制备黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳的配方中,Tween 80、Span 80、石蜡油、乙醇、水的体积比为3∶1∶1.5∶0.5∶1;所得纳米乳为淡黄色透明液体,透射电镜下呈圆球形,平均粒径45.2nm,pH 6.71,黏度4.60s,理化性质较稳定。用黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳和抗原同时免疫小鼠后,未见任何不良反应,且用黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳免疫的各试验组小鼠,其血清OVA特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体水平均显著高于OVA抗原对照组(P<0.05),而各试验组的IgG、IgG1和IgG2a抗体水平无显著差异;只有APS 200μg+EM 200μg+OVA抗原组和APS400μg+EM 200μg+OVA抗原组的IgG、IgG1和IgG2a抗体水平显著高于铝胶(Alum)+OVA抗原组(P<0.05),且以APS 400μg+EM 200μg+OVA抗原组的3种抗体水平最高。【结论】黄芪多糖与紫锥菊提取物纳米乳佐剂制备方法简单,稳定性好,能显著增强机体抗体的产生能力,同时可以增强Th1和Th2的免疫应答反应,具有开发佐剂的应用价值。     

黄芪甲苷提取方法优化

[目的]优化黄芪药材中黄芪甲苷提取方法。[方法]采用单因素试验对提取方式、提取溶剂、提取次数进行考察,采用HPLCELSD法测定黄芪甲苷含量。[结果]黄芪药材中黄芪甲苷最优提取方法为每次用50倍的50%甲醇加热回流提取2次,每次1 h。[结论]该试验所建立的方法操作简单、准确可靠、重现性好,为黄芪饮片及制剂中黄芪甲苷的提取及含量测定提供参考。     

纤维素酶在黄芪有效成分提取中的应用

为了提高黄芪有效成分的提取率,分别用 0.3 %、0.4 %和 0.5 %纤维素酶预处理后用常规水提法。结果表明:黄芪有效成分的提取过程加入不同浓度的纤维素酶,能够显著提高黄芪甲苷和黄芪多糖的收率,其中黄芪多糖的收率较对照组分别增加了 314.8 %、392.6 %、342.6 %,黄芪甲苷的收率分别增加了 83.4 %、61.8 %、56.8 %。     

不同诱导子对黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖积累的影响

[目的]研究水杨酸、茉莉酸甲酯、硝酸银、高糖、高盐、超声等诱导子对黄芪细胞生长和黄芪多糖合成的影响.[方法]向细胞悬浮液中加入各种诱导子或对细胞悬浮液进行超声处理,测定细胞干重增殖倍数和黄芪多糖的合成量.[结果]加入10.0 mg/L水杨酸可使黄芪多糖的含量为对照组的2.04倍;添加较低浓度的茉莉酸甲酯浓度（1.0 mg/L）使黄芪多糖的含量达48.974 mg/g,比对照提高了2.50倍;添加4 mg/L浓度的硝酸银能使黄芪多糖含量提高1.60倍;高糖和高盐胁迫处理均能诱导黄芪多糖的合成.高糖处理能使黄芪多糖的产量比对照提高了1.92倍.低剂量的超声刺激对黄芪细胞生物量的积累有显著的刺激作用.[结论]诱导子的添加可有效促进黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖的积累.