云南省牛流行性出血病血清学调查

为了解牛流行性出血病(epidemic hemorrhagic disease,EHD)在云南省的流行和分布情况,采用竞争ELISA方法,2019年对11个县市的1 199份牛血清进行流行性出血病病毒(epidemic hemorrhagic disease virus,EHDV)抗体检测,同时从各县市检测出的阳性血清中,随机选取18～50份通过微量血清中和试验进行血清型鉴定。结果显示:云南省11个县市均检测出EHDV抗体阳性样品,阳性率介于49.3%～91.3%,平均为81.8%;各地普遍存在3个及以上血清型,其中EHDV-7、-10、-6、-5血清型检出率较高,EHDV-8、-2血清型检出率较低,未检出EHDV-1型。结果表明,EHD在云南省流行广泛且较严重,流行血清型复杂。结果提示,需持续开展EHDV血清学监测,重视对该病的防控。此次血清学调查为我国西南地区EHD防控提供了数据参考。     

流行性出血热及其检测技术的研究进展

流行性出血热(epizootic hemorrhagic disease,EHD)是由节肢动物库蠓叮咬引起的一种在全世界野生及家饲有蹄动物中广泛分布的非接触性虫媒病毒病,目前至少有9种血清型,其中有7种在我国流行.流行性出血热病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)主要感...     

流行性出血热及其检测技术的研究进展

流行性出血热(epizootic hemorrhagic disease, EHD)是由节肢动物库蠓叮咬引起的一种在全世界野生及家饲有蹄动物中广泛分布的非接触性虫媒病毒病,目前至少有9种血清型,其中有7种在我国流行。流行性出血热病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus, EHDV)主要感染鹿和牛,羊和其他反刍动物为无症状感染,给养殖业造成了严重损失。检测EHDV的方法有很多,主要以分子生物学和血清学检测方法为主。文章就EHD的病原学、流行病学及检测方法等方面进行综述,重点总结了该病的检测方法,以期为相关研究提供参考。     

我国牛羊流行性出血病血清抗体调查

为了解流行性出血病(EHD)在我国的流行和分布情况,本研究采用竞争ELISA试验方法,对2015年～2017年我国吉林、河北、西藏、重庆、云南等15个省区的6 413份牛羊血清样品进行检测。结果显示,未发现绵羊EHDV阳性血清,山羊EHDV血清阳性率较低(0～4%),而牛血清EHDV阳性率有明显的地域性和季节性,由北向南逐渐升高(0～65.83%),表明EHD在我国的流行已具有广泛性;秋季阳性率(61.11%～65%)明显高于春季(10%～16.67%)和夏季(29%～32%),表明该病的流行分布状况与其媒介昆虫的活动有密切关系。本研究是我国首次大规模的EHD血清学调查,对有效防控该病提供了重要的实验数据。     

鹿流行性出血病诊断方法研究初报

鹿流行性出血病(Epizootie hemorrhagic disease of deer—EHD,国内有人译为鹿流行性出血热)病毒属于呼肠孤病毒科环状病毒属的一个群,该群病毒迄今已经分离和鉴定出12个型(包括茨城病病毒—[baraki Virus)。EHDV主要感染家养和野生的反刍动物,鹿特别是白尾鹿最为敏感,可引起明显的临床症状,在畜牧史上曾造成     

应用PCR技术检测鹿流行性出血病病毒

对PCR (包括PCR/化学发光杂交检测、抗体亲和捕获套式PCR检测、原位PCR检测、PCR/RFLP检测 )检测在最近几年鹿流行性出血病病毒 (EHDV ,包括EHDV 1 ,EHDV 2等 )临床诊断的应用和研究成果进行了论述 ,认为该技术为EHD的诊断、流行病学调查、疫情监控及防制等提供了一种更灵敏、特异和快速的方法     

流行性出血病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立

为能简便、快速地进行流行性出血病病毒(epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)抗体监测,采用纯化的6型EHDV抗原包被ELISA板,以豚鼠抗EHDV-2型多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测EHDV群特异性抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显示:抗原最佳包被浓度为5.12μg·mL-1(1∶10 000),竞争抗体最佳稀释倍数为1∶10 000;通过对各270份阴性和阳性的牛、羊血清检测,确定该检测方法临界值为50%;特异性试验表明该ELISA方法仅能检测出不同血清型EHDV抗体,具有较好的群特异性;对已知抗体效价的阳性血清检测表明,建立的C-ELISA方法敏感性好于血清中和试验(SNT)和琼脂扩散试验(AGID);分别用C-ELISA、SNT、RTPCR和病毒分离试验对监控动物采集的血清和抗凝血样品进行检测,ELISA结果与其他3种方法检测结果对应一致。结果表明本研究建立的C-ELISA为EHDV抗体的检测提供了一种快速、敏感、稳定的方法。     

流行性出血病病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒的研制

为研制流行性出血病病毒（epidemic hemorrhagic disease virus，EHDV）ELISA 抗体检测试剂盒，用饱和硫酸铵浓缩EHDV灭活病毒作为包被抗原，以EHDV鼠源单克隆抗体作为阻断抗体，商品化的IgG-HRP羊抗鼠二抗作为检测抗体，通过优化检测试剂中各组分含量和反应程序，建立了一种EHDV阻断ELISA抗体检测方法。用研制的试剂盒与ID Screen参考试剂盒分别检测实验室保存的血清样本，结果发现该方法的特异性、敏感性与ID Screen参考试剂盒一致，二者符合率为97.00%。结果表明，研制的EHDV阻断ELISA抗体检测试剂盒可作为EHDV抗体检测的候选试剂盒，代替国外试剂盒使用，从而降低EHDV检测成本，这对该病防控具有重要意义。     

云南省2株鹿流行性出血热病毒的分离鉴定

为了监测云南省反刍动物鹿流行性出血热病毒(epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)的感染情况,本试验在云南省师宗县设立了监控点,筛选出EHDV抗体阴性的10头牛和5只羊作为哨兵动物,每年的5～10月份每周采血1次,11月到次年4月份每月采血1次,通过酶联免疫吸附试验监测其抗体转阳情况,用转阳牛的红细胞接种BHK以分离病毒,用病毒RT-PCR和中和试验鉴定病毒。结果显示,从2头转阳牛的抗凝血中分离到2株EHDV,其TCID₅₀分别为10^-2.5/0.1 mL和10^-3.44/0.1 mL,血清型均为EHDV-5型。本试验在云南省分离到EHDV,明确了云南省反刍动物存在EHDV感染,为我国监控EHDV流行情况及疫病风险防范提供了重要借鉴意义。     

流行性出血病病毒(EHDV)血清7型毒株在中国的首次分离与鉴定

流行性出血病(EHD)是由流行性出血病病毒(EHDV)感染反刍动物引起的一种虫媒病毒病,为了解中国云南EHDV的感染情况和病毒遗传特征,笔者课题组在云南省师宗县以EHDV血清学和核酸阴性的牛、羊为哨兵动物,拟对流行于云南省的EHDV进行分离与鉴定。将采集于哨兵动物的EHDV核酸阳性血液接种BHK-21细胞进行病毒分离;通过血清中和试验与病毒Seg-2、Seg-3 ORF区的序列分析,确定病毒的血清型与遗传特征;采用C-ELISA和qRT-PCR方法对EHDV感染动物血液中的抗体水平与病毒核酸进行监测。结果如下:从2013年8月采集自云南师宗县哨兵牛的血样中分离出一株EHDV(毒株号YNSZ/V269/2013),血清中和试验结果表明分离的病毒为血清型7型(EHDV-7);Seg-2、Seg-3序列分析表明分离的病毒属EHDV-7 Eastern型,与日本毒株和澳大利亚EHDV-7型毒株具有最近的亲缘关系。哨兵动物病毒核酸转阳后,血清抗体迅速上升,3周后达最高点并能在该水平持续较长时间,而病毒核酸含量却迅速下降,7周后已经检测不到。本研究首次报道了EHDV-7型毒株在中国的分离、毒株序列特征以及在动物上的感染特性。研究结果可为进一步开展中国EHDV-7型病毒的全基因组测序、流行病学调查、诊断方法的建立和致病性等相关研究提供基础。     

流行性出血热主要检测方法比较

流行性出血热(epizootic haemorrhagic disease,EHD)被世界动物卫生组织(OIE)列为须通报的跨境传播动物疫病.目前,世界范围该病病原已发现9种血清型,其中有5种在我国流行,并表现出高度多样性.为了在实践中选择合适的检测方法,从抗原及抗体检测两方面,总结了各种检测方法的优缺点.经比较,各种...     

单抗阻断ELISA检测流行性出血病病毒特异性抗体

应用流行性出血病(EHD)群特异性单克隆抗体(1G9/C9)建立了检测EHD病毒血清抗体的高度敏感和特异的阻断ELISA(B-ELISA),该法能检出所有6种参与试验的EHD血清型高免参考血清中存在的阻断抗体,而不受19种南非和8种澳大利亚蓝舌病病毒(BTV)血清型参考抗血清的影响。与间接ELISA(I-ELISA)相比,EHD B-ELISA检测EHD特异性敏感性更高。同时用BTV和EHD B-ELISA检测试验血清和田间血清的BTV和EHD血清抗体滴度。结果表明:只有B-ELISA对相应的血清群特异性抗体敏感,即便是继发和混和感染另一种病毒亦如此。     

一株新型牛源流行性出血病病毒的分离与鉴定

为分析云南省动物流行性出血病病毒(EHDV)的流行情况,本研究将2018年采集的280份牛EDTA抗凝血液样品通过EHDV群特异性qRT-PCR和血清型特异性qRT-PCR方法进行病毒核酸检测,利用竞争性ELISA(C-ELISA)检测牛常规血液样品中的抗体水平,将EHDV核酸阳性牛血液样品先接种白纹伊蚊(C6/36)...     

鹿流行性出血病酶联免疫吸附试验法的研究初报(第一部分)

目前,用于检测鹿流行性出血病(EHD)的血清学方法较多,根据现有的资料和我们的实验结果,认为酶联免疫吸附试验(ELISA)用于检测EHDV群特异性抗体比现有的其它血清学方法优越。如快速、灵敏,节省材料,特别是结果较为可靠。近年来,许多学者对Ibaraki病毒进行了深入研究,该病毒不仅在核酸类型,核酸电泳图谱,蛋     

鹿流行性出血病病毒双抗夹心ELISA方法的建立

为建立鹿流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,用纯化的抗EHDV特异性单克隆抗体包被ELISA板,用兔抗EHDV IgG作为夹心抗体,IgG作为夹心抗体建立EHDV双抗夹心ELISA方法,并对该方法的特异性和敏感性进行了试验.用ELISA分别检测EHDV、蓝舌病病毒(BTV)、水疱性口炎病毒(VSV)、赤羽病病毒...     

云南边境地区流行性出血热病毒血清学监测及血清型鉴定

为了解近几年云南边境地区牛、羊流行性出血热病毒(EHDV)的感染和流行情况,本研究从2014年起连续3年在与老挝、越南接壤的江城县设置EHDV监测点,每年选择投放EHDV抗体阴性的10头牛和5只山羊作为哨兵动物进行跟踪监测。每年5～10月份对哨兵动物采血,每周1次,11、12月每月采集一次,进行EHDV抗体、抗原监测和病毒分离。针对致细胞病变的样品,采用EHDV群特异性S7基因片段引物进行RT-PCR方法检测,同时利用EHDV-1、-5、-6、-7、-10标准阳性血清对分离到的病毒进行中和试验鉴定。结果显示,2014-2016年江城县牛EHDV抗体阳性率分别为41.9%、58.6%和75.4%;3年期间共监测到15头EHDV抗体阳性黄牛,并从中分离到20个可致细胞病变样品,经RT-PCR确认为EHDV,遗传进化分析发现有11个毒株与1997和2003年日本分离的EHDV毒株亲缘关系较近,9个毒株与1977和1981年澳大利亚分离的EHDV毒株亲缘关系较近,5个毒株与2015年广西分离株的亲缘关系较近;3年期间在山羊体内未检测出抗体,未发现抗原阳性动物;经中和试验血清型鉴定,确定20株毒株包括EHDV-5、-6、-7、-10型4种血清型,感染时间均在5～9月之间。本研究发现,江城县长期存在多种血清型EHDV同时流行,2014-2016年EHDV抗体阳性率逐年增加,亟需加强对EHDV感染情况及活动规律的持续研究,提高流行性出血热的防控效率。     

云南边境地区流行性出血热病毒血清学监测及血清型鉴定

为了解近几年云南边境地区牛、羊流行性出血热病毒（EHDV）的感染和流行情况,本研究从2014年起连续3年在与老挝、越南接壤的江城县设置EHDV监测点,每年选择投放EHDV抗体阴性的10头牛和5只山羊作为哨兵动物进行跟踪监测。每年5~10月份对哨兵动物采血,每周1次,11、12月每月采集一次,进行EHDV抗体、抗原监测和病毒分离。针对致细胞病变的样品,采用EHDV群特异性S7基因片段引物进行RT-PCR方法检测,同时利用EHDV-1、-5、-6、-7、-10标准阳性血清对分离到的病毒进行中和试验鉴定。结果显示,2014－2016年江城县牛EHDV抗体阳性率分别为41.9%、58.6%和75.4%;3年期间共监测到15头EHDV抗体阳性黄牛,并从中分离到20个可致细胞病变样品,经RT-PCR确认为EHDV,遗传进化分析发现有11个毒株与1997和2003年日本分离的EHDV毒株亲缘关系较近,9个毒株与1977和1981年澳大利亚分离的EHDV毒株亲缘关系较近,5个毒株与2015年广西分离株的亲缘关系较近;3年期间在山羊体内未检测出抗体,未发现抗原阳性动物;经中和试验血清型鉴定,确定20株毒株包括EHDV-5、-6、-7、-10型4种血清型,感染时间均在5~9月之间。本研究发现,江城县长期存在多种血清型EHDV同时流行,2014－2016年EHDV抗体阳性率逐年增加,亟需加强对EHDV感染情况及活动规律的持续研究,提高流行性出血热的防控效率。     

云南省部分地区牛流行热血清学初步调查

为了调查近年来云南省牛流行热的自然感染情况,本文采集了临沧市沧源县、普洱市孟连县、西双版纳州勐腊县、昆明市五华区及曲靖市马龙县5个州市共计356份牛血清样品进行了牛流行热病毒抗体检测,检测结果显示总体样本阳性率为8.4%。从样品采集地区检测结果比对来看,普洱市孟连县和西双版纳勐腊县采集的样品阳性率较高,分别为15.52%(9/58)和15%(9/60);其次为临沧市沧源县样品,阳性率为11.11%(1/9);曲靖市马龙县样品阳性率最低,为4.93%(11/223);昆明市五华区的血清样品未检出牛流行热抗体。对不同品种牛群感染阳性率进行比较,结果显示黄牛感染阳性率最高为21.69%(18/83);其次为婆罗门牛,阳性率为11.1%(1/9);西门塔尔杂交肉牛阳性率为4.93%(11/223);水牛和奶牛阳性率为0。     

不同管理条件下的山羊刚第弓形虫抗体的频率

在巴西米纳斯吉拉斯州14个地区46群372只山羊中,41群中的36.8％用间接荧光抗体试验检查为阳性,抗体滴度为1:16—1:16384。圈养奶山羊(平均每群60只)的阳性率为36％。强化饲养的肉用山羊(平均每群82只)的阳性率为11.4％,奶肉兼用型山羊(平均每群4只)的阳性率为63％。阳性滴度与症状及性别无关。6月龄以上的山羊其弓形虫抗体阳性率比6月龄以     

云南省牛病毒性腹泻-黏膜病血清流行病学调查

[目的]牛病毒性腹泻—黏膜病(bovine viral diarrhea-mucosal disease, BVD)引起牛腹泻、呼吸系统疾病、生殖功能障碍、免疫抑制、母畜流产、死胎等,对牛产业发展危害严重。牛病毒性腹泻—黏膜病病毒(bovine viral diarrhea-mucosal disease virus, BVDV)在我国大部分牛群中普遍存在,各地流行情况严重程度不同,本调查旨在调查云南省BVDV的流行情况。[方法]调查通过采用商品化的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对BVDV感染和流行情况进行调查,采集了云南省4个州10个县(市)的部分规模牛场及散养户的牛血清样品456份。[结果]结果发现,云南省不同地区所检的牛血清样品总抗体阳性率为16.45%(75/456),抗原阳性率为0.53%(2/378),其中抗体阳性率以大理州洱源县60.0%(9/15)最高,而丽江市华坪县的血清样品中未检测到抗体阳性,大理州宾川县和丽江市宁蒗县的抗原阳性率较低,分别为7.69%(1/13)和4.00%(1/25)。云南省规模场牛的血清样品抗体总阳性率为27.27%(45/165),抗原阳性率为1.15%(1/87),散养户牛的分别为10.31%(30/291)和0.34%(1/291)。[结论]云南省的牛群中存在着BVDV感染的情况,其抗体抗原的阳性率水平跟地区有着紧密的联系,不同的养殖方式抗原抗体水平存在着一定差异,必须要加强云南省BVDV监测与防控,减少其造成的经济损失。