三倍体葡萄胚挽救技术研究

为了克服葡萄二倍体品种与四倍体品种之间的杂交不亲和性,本试验选择巨玫瑰×兴华一号、4x玫瑰香×2x玫瑰香、4x玫瑰香×红旗特、京亚×87-1、2x玫瑰香×4x玫瑰香、87-1×巨玫瑰、红旗特×巨玫瑰7个杂交组合进行了葡萄二倍体和四倍体品种间杂交后代的胚挽救研究,并对巨玫瑰×兴华一号、2x玫瑰香×4x玫瑰香、87-1×巨玫瑰三个杂交组合后代胚挽救试管苗进行根尖染色体鉴定的研究。结果表明,不同杂交组合胚挽救的最佳取材时期不同,多数组合授粉后45～55d接种效果最好;而2x玫瑰香×4x玫瑰香和87-1×巨玫瑰在花后65d胚珠发育率最高,2x玫瑰香×4x玫瑰香胚珠最高发育率可达到100%。多数杂交组合胚珠的最高萌发率在花后65d,其中2x玫瑰香×4x玫瑰香胚珠的最高萌发率可达到76.67%;巨玫瑰×兴华一号在花后55d,4x玫瑰香×红旗特在花后70d。巨玫瑰×兴华一号杂交组合后代三倍体的比例为60%,87-1×巨玫瑰杂交组合后代三倍体的比例为12%,2x玫瑰香×4x玫瑰香杂交组合后代三倍体的比例为31%。     

‘希姆劳特’与不同倍性玫瑰香型葡萄杂交胚挽救技术研究与倍性鉴定

以葡萄二倍体无核品种‘希姆劳特’为母本,分别与二倍体玫瑰香优系和四倍体‘巨玫瑰’杂交胚珠,及‘希姆劳特’自交胚珠为试材进行胚挽救试验,研究亲本基因型、取样时期、胚发育培养基、培养温度对杂交胚生长发育的影响,并通过染色体计数法对‘希姆劳特’与‘巨玫瑰’杂交幼苗进行倍性鉴定。结果表明:‘希姆劳特’×玫瑰香优系的杂交胚发育率、萌发率(18.18%、13.64%)均显著高于‘希姆劳特’ב巨玫瑰’(13.45%、4.20%)和‘希姆劳特’自交(7.03%、6.25%);‘希姆劳特’×玫瑰香优系、‘希姆劳特’ב巨玫瑰’杂交胚珠及‘希姆劳特’自交胚珠的最佳取样时间均为授粉后54 d;‘希姆劳特’×玫瑰香优系、‘希姆劳特’ב巨玫瑰’杂交胚珠在25℃下培养胚发育率更高,适于‘希姆劳特’×玫瑰香优系、‘希姆劳特’ב巨玫瑰’杂交胚发育的培养基为:Nitsch+1.5 mol/L IAA+0.5 mol/L 6-BA+0.5 mol/L GA3+60 g/L蔗糖+5 g/L琼脂+1g/L活性炭。经根尖染色体倍性鉴定,‘希姆劳特’ב巨玫瑰’获得1株三倍体幼苗,2株二倍体幼苗。     

无核葡萄胚挽救育种影响因素分析

综述了影响无核葡萄胚挽救育种成败的主要因素,包括品种基因型的内因条件以及取样时期和母本成熟期、基本培养基种类、生长调节剂、不同培养环境、移栽条件等外因的影响,最后对胚挽救在无核葡萄育种上的发展进行了展望。     

无核葡萄‘Kismis’胚挽救技术研究

为获得无核葡萄品种‘Kismis’无涩味后代,以该品种杂交所得幼胚为试材,研究其胚挽救技术。结果表明:通过试验确定采样最佳时期为授粉后41~48 d;通过培养基及不同植物生长调节剂浓度及组合试验筛选出适宜其胚珠发育的培养基为:N69+1.0 mg/L IBA+0.1 mg/L 6-BA+0.5mg/L GA3,发育率最高为55.4%,3种植物生长调节剂因子对胚发育的影响为:GA36-BAIBA;适宜胚萌发培养基为:1/2MS+1.0 mg/L IAA+0.5 mg/L GA3+0.2 mg/L IBA,胚萌发率最高为26.2%,2种植物生长调节剂对胚萌发的影响为:GA3IAA;胚培苗移栽成活率在70%以上。     

葡萄不同倍性品种的杂种胚挽救及鉴定

以二倍体葡萄为母本,与四倍体葡萄杂交,杂种进行胚珠培养,获得三倍体植株.胚珠培养胚萌发率最高可达39.21%,成苗率最高可达35.32%.先用细胞倍性测定仪初选,再用卡宝品红染色法根尖计数染色体为57条.不同组合取样时期可确定为:早熟母本为花后40～50 d内,中熟品种为50～60 d,晚熟品种则为60～80 d.     

接种时期和培养基对无核葡萄胚挽救的影响

以4个组合康能无核×金星无核、雷明无核×金星无核、金星无核自交、雷蒙无核自交为试材, 采用L25 (55 ) 正交设计, 研究了接种时间和培养基种类对无核葡萄胚挽救的影响。结果表明, 影响无核葡萄胚挽救最重要的因素是接种时期, 其他因素影响程度因组合而不同, 最佳接种时期在花后45～60 d,最高出苗率13.64%～75.23%。对胚珠进行一定处理有助于促进胚珠的萌发出苗, 其中横切处理与低温处理可以显著提高胚珠萌发出苗率。     

葡萄二倍体和四倍体杂交胚挽救的影响因素

采用L25(55)的正交试验设计,对葡萄二倍体和四倍体杂交胚挽救过程中的影响因素如培养基种类、接种时间、植物生长物质浓度等进行了研究。结果表明:影响胚挽救成苗率最重要的是接种时间,然后依次是IBA浓度、GA3浓度、培养基种类和6-BA浓度。获得了一批胚挽救实生苗,最高出苗率达到73.08%。     

无核葡萄胚挽救技术初探

以'优无核'等几个无核葡萄品种的杂交种胚和实生种胚为试材,研究了取材时期和IBA浓度对无核葡萄胚培养的影响.结果表明,影响无核葡萄胚挽救最重要的因素是取材时期,最佳取材时期在花后40～60d;IBA浓度因组合而不同.     

‘奥迪亚’葡萄杂交后代胚挽救及无核性状分子鉴定

【目的】为了研究影响杂交后代胚挽救萌发率的主要因素,并对其无核性状进行早期鉴定,【方法】以无核、抗病葡萄品种‘奥迪亚’为母本,‘玫瑰香’、‘摩尔多瓦’和‘红地球’3个主栽品种为父本进行杂交,通过L9(33)正交试验,建立简单高效的胚挽救体系,并用分子标记对杂交苗无核性状进行鉴定。【结果】结果表明,影响胚挽救萌发率的最关键因素为接种时期,其次为培养基种类和NAA浓度;以‘奥迪亚’为母本的杂交胚其适宜接种程序为授粉后49～56 d剥取胚珠,接种在B5或NN69培养基上充分发育70 d,再转入1/2 B5培养基上萌芽,‘奥迪亚’ב摩尔多瓦’杂交胚通过此程序萌发率达到了50.48%;经分子标记鉴定,各组合后代的无核株系均超过50%。【结论】利用胚挽救方法以‘奥迪亚’为杂交母本可高效创新葡萄无核种质。     

抗病抗寒无核葡萄胚挽救研究

【目的】为了培育抗病抗寒无核葡萄新品种,【方法】以2个种子败育型无核品种‘波尔莱特’、‘红无籽露’作母本,以抗病抗寒的中国野生山葡萄株系‘黑龙江实生’、‘双优’及欧山杂种‘北醇’、‘00-1-10’(‘玫瑰香’ב黑龙江实生’)分别作父本杂交,授粉51 d后将胚珠分别接种于ER和MM4培养基上进行胚挽救,培养60 d后在WPM+BA 0.2 mg.L-1培养基上诱导成苗。【结果】结果表明,2个母本品种胚挽救的适宜培养基不同,‘波尔莱特’作母本适合于ER培养基,‘红无籽露’作母本适合于MM4培养基。2个母本基因型对胚珠的发育率和成苗率的影响差异不大,‘波尔莱特’略优于‘红无籽露’;但4个父本基因型对胚挽救效果影响较大,以欧山杂种‘00-1-10’和‘北醇’作父本的杂交组合胚株的发育率和成苗率明显高于山葡萄‘黑龙江实生’、‘双优’作父本的杂交组合。共获得无核葡萄胚挽救新种质50个株系。【结论】在胚挽救过程中,不同基因型的无核葡萄适宜于不同的基本培养基,欧山杂种比山葡萄更适宜于作杂交的父本。     

用于无核葡萄选育的胚挽救技术研究

通过4a的连续试验,观察了无核葡萄果粒及胚珠发育变化,对胚挽救的多个影响因素包括品种、接种时间、培养基和培养方式进行了研究。结果表明,红脸无核、底来特、黎明无核作母本的胚珠萌发率较高;各品种适宜的接种时间为无核白花后26d,红脸无核花后35d,爱莫无核×火焰无核花后48d,底来特×红宝石无核花后56d;用Nitsch作基本培养基优于B5;添加BA0.2mg/L获得的胚珠萌发率最高;常温黑暗、固体培养有利于胚珠的发育。已定植结果的无核葡萄杂交胚挽救后代的无核比率平均为58.6%。将胚挽救技术用于无核葡萄育种是十分有效的。     

无核葡萄与中国野生葡萄杂种的胚挽救技术研究

 通过无核葡萄与中国野生葡萄杂交, 获得了4个杂交组合的后代植株, 确定了各杂交组合取胚珠培养的最佳时期。1Flame ×山葡萄; 2红宝石×爱莫无核; 3红宝石×北醇; 4爱莫无核×山葡萄在授粉后45 d取样培养效果较佳; 5长穗无核白×山葡萄授粉后30 d; 6无核白自交在授粉后35 d培养效果较佳。以NitSchs为基本培养基, 附加0.5 mg·L ^{- 1} 6-BA + 0.5 mg·L^-1 GA₃ + 2.5 mg·L ^{- 1} IBA + 0.1 mg·L^-1ZT, 适合于1、3、5号杂交组合; 而0.5 mg·L^-1 6-BA + 0.5 mg·L^-1 GA₃ + 2.0 mg·L^-1 IBA + 0.1 mg·L^-1ZT适合2、4、6号杂交组合; 胚萌发培养基为2.0 mg·L^-1 IBA + 1.0 mg·L^-1 6-BA +0.2 mg·L^-1 GA₃ , 适合1、2、3、5、6号杂交组合, 而爱莫×山葡萄在1.5 mg·L ^{- 1} IBA + 1.0 mg·L^-1 6-BA + 0.2 mg·L^-1 GA₃培养基上表现较佳, 生根培养基为1 /2MS基本培养基添加0.15 mg·L^-1 IBA + 0.02 mg·L^-1 6-BA, 它适合1号与5号组合, 0.10 mg·L^-1 IBA + 0.02 mg·L^-1 6-BA适合4号与6号组合。     

无核葡萄胚挽救技术的研究现状与展望

 综合分析国内外相关文献及作者以往的研究经验,阐述了无核葡萄胚挽救技术的研究现状,讨论了影响无核葡萄胚挽救成功的主要因素,包括亲本选择、取样时期、花期喷施生长调节剂、培养基、外源激素种类与浓度等,并对胚挽救技术在无核葡萄育种上的发展进行了展望。     

葡萄无核性状遗传与胚挽救技术的研究及应用

葡萄无核性状遗传以及无核葡萄胚挽救技术是葡萄无核育种领域的研究热点之一,无核葡萄胚挽救技术已经成为葡萄无核育种主要手段,在无核葡萄育种中发挥了重要作用。胚挽救技术的发展和应用,突破了传统的无核葡萄育种方法,极大地拓宽了葡萄无核品种育种的范围和效率。综述了近年来关于无核葡萄的类型、无核性状的遗传以及现在生产上应用的无核葡萄无核性的来源,胚挽救技术在培育葡萄无核品种、克服远缘杂交不亲和性、缩短育种周期等方面的研究和应用。同时,对影响胚挽救成功的因素如品种、培养基类型及成分、接种时期及珠被处理等进行了探讨。最后对葡萄胚挽救技术目前存在的问题和今后该领域的研究方向进行了展望。     

东方百合‘Siberia’正反交及胚挽救

以‘Siberia’‘Martinique’‘After Eight O′clock’‘Sunshine Iceland’和‘Bonaire’为亲本进行杂交育种，并进行正反交实验，比较正反交结实率及有胚率；采用胚挽救技术克服受精后障碍，比较不同杂交组合、胚龄、培养方式、培养基对幼胚生长萌发的影响，以期建立一套适合东方百合‘Siberia’的正反交及胚挽救方案，创制东方百合新种质。结果表明：‘Siberia’与‘Martinique’‘After Eight O′clock’正反交存在受精障碍，但均获得了膨大子房及有胚种子；其中，‘Siberia’作父本的有胚率显著高于其作母本，在‘Siberia’与‘After Eight O′clock’组合中，其作父本的有胚率是其作母本的4.5倍；在‘Siberia’בMartinique’组合中有胚率是其作母本的2.3倍；在‘Siberia’בBonaire’杂交组合中有胚率是其作母本的1.01倍；在‘Siberia’בSunshine Iceland’杂交组合中有胚率是其作母本的1.2倍。胚挽救试验结果显示，70 d胚龄的幼胚最适合剥除胚...     

无核抗病葡萄胚挽救育种与应用

以无核的欧洲葡萄作母本,抗病性强的‘北醇’‘左优红’‘塘尾’作父本,大田杂交后在胚败育前采集幼果,无菌条件下采用离体胚挽救的方法获得杂种后代植株,研究了亲本基因型、胚萌发培养基中蔗糖浓度和GA_3浓度对无核葡萄胚挽救育种效率的影响,并对杂种幼苗进行分子标记辅助选择,以期为无核葡萄胚挽救育种效率的提高提供参考依据,并初步筛选出无核抗病葡萄新材料。结果表明:获得232个杂交株系,练苗成活株系227株。以‘无核白鸡心’‘昆香无核’为母本的杂交组合胚挽救效果较好,适宜在无核葡萄胚挽救中作母本。胚萌发培养基中最适蔗糖浓度为2.0%,胚萌发培养基中最适GA_3浓度为0.5μmol·L^-1;对获得的杂种后代幼苗,利用2种葡萄无核标记SCF27-2000、SCC8-1018对124株胚挽救杂交子代无核基因进行分子标记检测,初步确定无核株系74株,胚挽救后代无核率为59.7%,利用葡萄抗白粉病标记ScORN3-R对65株胚挽救杂交子代进行抗白粉病基因检测,65个胚挽救杂交后代株系均未扩增出760bp抗白粉病标记特异性条带。     

利用胚挽救技术创制葡萄多倍体种质的研究

为培育三倍体无核葡萄新品种,以二倍体欧洲葡萄无核品种红宝石无核、爱莫无核、黎明无核和欧山杂种北醇及四倍体欧美杂种藤稔、黑奥林为亲本,进行了红宝石无核×藤稔、黎明无核×藤稔、爱莫无核×黑奥林、藤稔×北醇、黑奥林×北醇5个组合的杂交,通过胚挽救技术获得杂种幼苗41株。在此基础上,利用流式细胞术、染色体计数的方法对所获得的杂种幼苗进行了早期倍性鉴定,结果表明有10株杂种为三倍体,6株为四倍体,4株为非整倍体,其余21株为二倍体。这将为进一步选育出三倍体无核葡萄新品种和提供新的育种材料奠定基础。     

无核葡萄抗寒抗病胚挽救育种应用研究

【目的】探究亲本基因型对胚挽救的影响,从中选出无核葡萄新单株,为今后无核葡萄新品系的选育提供新材料。【方法】以8个无核葡萄品种为母本,以抗寒抗病的中国野生葡萄等做父本,围绕无核抗性的育种目标设计9个杂交组合,对杂种进行胚珠培养,成苗后进行温室移栽炼苗,并对后代进行杂种鉴定和辅助选择,最后移栽至大田。【结果】通过胚挽救技术获得32个胚挽救株系,394株幼苗。利用无核基因探针GLSP1、分子标记SCF27和SCC8对杂种株系进行分子标记检测,杂种株系中检测出无核特异性条带的分别为11、18、21个株系。其中有17个株系在SCF27和SCC8标记扩增下都出现了无核性状的特异性条带。综合3种标记对杂交子代株系的检测结果,有28个株系被初步确认为携带标记的无核株系。【结论】以‘火焰无核’‘爱神玫瑰’和‘无核白鸡心’为母本的组合成苗率相对较高,以‘底莱特’和‘红无籽露’为母本的组合具有较高的胚萌发率,较适宜做母本。在杂交育种时母本的选择起关键作用,父本对胚挽救的效果也会有一定影响。     

种子败育型无核葡萄胚挽救研究

为提高种子败育型无核葡萄胚挽救中胚的发育率和成苗率,以无核品种"红无籽露"、"波尔莱特"、"皇家秋天"为试材,研究了其在自然授粉条件下胚挽救的最佳取样时期,并对适宜胚培养的培养基进行了筛选。结果表明:"红无籽露"、"波尔莱特"、"皇家秋天"的最佳取样时期分别为花后51～53、55和66d;筛选获得的适宜培养基为MM4+0.5mg/L GA3+1.5mg/L IAA+500mg/L水解酪蛋白+60.0g/L蔗糖+1.5g/L活性炭+10.0μmol/L ZnSO4+1.0mmol/L甘氨酸+1.0mmol/L半胱氨酸+100.0mmol/L甘露醇。"红无籽露"、"波尔莱特"、"皇家秋天"的胚发育率和成苗率分别为:15.00%和6.67%、24.00%和10.00%、10.00%和5.00%,平均达到16.33%和7.22%。