基于核酸适配体和阳离子聚合物PAH高效聚集纳米金比色法检测牛奶中四环素

为满足乳制品中四环素快速检测要求,开发了基于核酸适配体(aptamer)和阳离子聚合物PAH高效聚集纳米金比色检测牛奶中四环素(TET)的新方法。本文优化了PAH和适配体的浓度。最优实验条件下,四环素浓度在一定范围内与A520/A650呈现良好的线性关系,最低检测限(LOD)为95nmol/L,对四环素具有良好的选择性。该方法已成功用于牛奶中四环素的检测,回收率为108%~117%,相对标准偏差为2.9%~3.6%。     

高效液相色谱法检测鸡蛋中3种四环素类抗生素

建立了高效液相色谱分析法测定鸡蛋中四环素类抗生素的方法。采用色谱柱为C1(85μm,250mm×4.6mmi.d.)固相萃取小柱,流动相为乙腈/乙酸水溶液(pH值2.5)=35/65(V/V),流速1.0ml/min,检测波长为358nm,同时测定3种抗生素。该方法的最低检出浓度分别为:土霉素0.25μg/ml,金霉素0.11μg/ml,四环素0.52μg/ml,样品中土霉素、金霉素、四环素含量的相对标准偏差(RSD)分别为1.94%、1.20%、0.84%。     

分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定牛奶中四环素类抗生素残留

采用分子印迹技术合成四环素类分子印迹聚合物,以其为填料制备固相萃取柱,运用高效液相色谱法测定牛奶中的四环素类抗生素。具体地,以盐酸强力霉素为模板分子、甲基丙烯酸为功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,采用沉淀聚合法在丙酮-乙腈混合溶液中制备具有特异性吸附能力的分子印迹聚合物,通过高效液相色谱仪检测其吸附四环素类抗生素的能力,并将其作为填料制备固相萃取柱,用于牛奶中四环素类抗生素残留检测。结果显示,四环素类抗生素在0.05~10.0 μg·mL^-1范围内线性良好,加标回收率为79.4%~86.3%,相对标准偏差均小于3.8%,准确性较好。四环素和土霉素的检出限为0.02 μg·mL^-1,金霉素的检出限为0.05 μg·mL^-1,检测灵敏度高,特异性识别能力强。     

莲藕中重金属Cu~(2+)纳米金快速检测法

[目的]建立一种能适用于现场快速检测Cu~(~(2+))的方法。[方法]以纳米金颗粒(Au NPs)为基础制备检测探针,构建可视化检测莲藕中重金属Cu~(2+)的快速检测体系。[结果]AuNPs比色检测法对Cu~(2+)选择特异性强,通过肉眼可视从而快捷、准确地进行快速检测,莲藕样品中各个水平的加标回收率的结果在86.0%~94.4%,检测效果稳定。[结论]研究可为莲藕中重金属的快速检测提供参考。     

免疫金探针快速检测禽流感病毒研究

本试验将兔抗禽流感H5、H9亚型病毒抗体纯化后,分别与制备的胶体金研制成免疫金探针,用改良的渗滤法安全快速地检测被检材料中禽流感H5、H9亚型病毒。试验表明,该法对禽流感H5、H9亚型病毒的检测灵敏度分别为1.62μg.ml-1和1.25μg.ml-1。对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。阻断试验和交叉试验表明该法有很高的特异性。对禽流感H9亚型病毒人工发病鸡的病毒检测阳性率为70%,与临床疑似病例禽流感病毒分离的阳性符合率为100%。     

食品中沙门氏菌快速检测方法研究

沙门氏菌能够在肉制品、蛋类、水产品中长时间存活,对人体健康有着严重威胁,容易导致慢性肠炎、食物中毒等病症出现.在食品安全检测实践中,要充分重视沙门氏菌的检测.传统沙门氏菌检测技术具有十分繁琐的检测环节,需花费较长的时间,且检测的精确性得不到保证.该文介绍了免疫学检测方法、分子生物学方法、新型检测方法等沙门氏菌的快速检测...     

微生物降解四环素类抗生素的研究进展

随着抗生素在养殖行业使用加剧,施用粪肥导致的抗生素污染问题日趋严重,微生物降解抗生素作为解决这一问题的有效途径受到人们的广泛关注。本文综述了四环素类抗生素（TCs）的降解方法和微生物降解四环素类抗生素的研究现状,并对微生物降解四环素类抗生素的影响因素、降解路径以及其降解的分子机制进行了详细介绍。在此基础上,对微生物降解四环素类抗生素从实验室研究到实际生产应用进行了展望,指出了未来研究关注的重点。本文以期为人们深入认识四环素类抗生素的微生物修复提供参考,同时为四环素类抗生素的污染修复提供思路。     

基于链替代扩增-纳米金比色直观检测单链核酸方法的研究

[目的]将链替代扩增技术与核酸修饰纳米金积聚变色的光学特性相结合,设计了一种新型的直观检测3′端暴露单链核酸的方法,实现对单链核酸的高灵敏度检测。[方法]设计一条含有硫代修饰酶切位点的单链核酸（ZDNA）,其酶切位点5′端是能将核酸修饰纳米金变色的Linker序列,3′端是能与Target单链核酸3′端完全互补的H序列。当无Target存在时,Linker会充分暴露,能使核酸修饰纳米金积聚呈现紫色;但是当Target存在时,会与H序列完全互补,作为ZDNA的引物进入链替代扩增循环,形成的新链不断与Linker序列互补,不能使核酸修饰纳米金积聚呈现红色,从而间接检测了Target单链核酸。[结果]通过一系列试验确定检测体系,具体为：40μl修饰纳米金溶液（0.52 nmol/L）加入10μl酶循环体系（ZDNA20 nmol/L,33 mmol/L Tris-HCl（pH值7.9）;10 mmol/L MgCl2;66 mmol/LNaCl;0.5 mmol/LdNTP;0.1 mg/ml BSA;0.05 U/μl klenow;1 U/μl Hinc II）,直观或紫外检测并绘制Target浓度与纳米金积聚程度的标准曲线,表明Target浓度在1~200 pmol/L的范围内呈现良好的线性关系,R2=0.946,最低检测限是1 pmol/L。[结论]链替代扩增-纳米金比色检测单链核酸方法简便、直观、成本低,与传统修饰纳米金比色检测DNA方法相比,灵敏度提高了104倍。     

鸡粪堆肥过程中四环素类抗生素及抗性细菌的消减研究

通过实验研究了堆肥生产过程中,菌剂添加对鸡粪高温堆肥中四环素类抗生素(四环素和土霉素)降解、四环素抗性细菌和致病菌(大肠菌群和沙门氏菌)的影响。结果表明,菌剂添加可以提高鸡粪堆肥的高温期温度,促进肥料腐熟,并且能够提高土霉素的降解速率。实验组原料中76μg·kg-1的土霉素经过高温堆肥得到有效去除,而不接种菌剂的对照组中土霉素没有明显去除;原料中沙门氏菌在堆肥起始阶段(8 d)就能够杀灭,而大肠菌群一直持续检出,直到堆肥末期(47 d)才小于2 lg CFU·g-1。抗四环素细菌在堆肥过程中的数量总体呈下降趋势,堆肥成品分别比原料减少1.41 lg CFU·g-1(实验组)和1.60 lg CFU·g-1(对照组),抗性细菌占总菌数的比例呈现先上升再下降的趋势,最终比例分别为4.00%(实验组)和1.17%(对照组),均高于原料的抗性菌比例(0.40%和0.39%)。     

胶体金免疫层析法快速检测水产品中四环素类药物残留

为建立用于快速检测水产样品中四环素类药物残留含量的胶体金免疫层析检测试剂,采用免疫竞争法,将抗四环素单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的四环素抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其残留药物与待测样品中四环素竞争结合胶体金标记的四环素单克隆抗体,最终能以颜色直观显示检测结果。检测水产品试样时,试剂灵敏度最低值可达100 ng/mL,仅需5~10min,与金霉素、土霉素、强力霉素等四环素族抗生素有很强的交叉反应,故可同时检测四环素族中几种主要抗生素,而与沙丁胺醇、莱克多巴胺等其他兽药无交叉反应。试验证明检测试剂具有较高的灵敏度及特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为四环素残留现场监控的有效筛检手段。     

HPLC测定猪肉食品中四环素族抗生素残留

[目的]建立一种采用高效液相色谱（HPLC）测定肉类食品中四环素族抗生素残留量的新方法。[方法]首先,用Na2EDTA-McIl-vaine缓冲溶液提取样品,并用三氯乙酸除去其中的蛋白质;然后,用HLB固相萃取柱进行净化;最后,采用高效液相色谱仪测定含量,并用外标法定量。[结果]Na2EDTA-McIlvaine缓冲溶液的pH值为4.5时,四环素族抗生素回收率最高,最大吸收波长为355 nm,最低检测限为100μg/L。3个添加水平的回收率均在68.5%-94.7%,相对标准偏差为2.5%-9.1%。[结论]该方法简便、快速、准确、精密度高,适用于肉类食品中四环素族抗生素残留量的检测。     

高效液相色谱-串联质谱同时分析猪肉中四环素类和喹诺酮类抗生素残留

[目的]建立猪肉中喹诺酮类和四环素类抗生素的同时分析方法。[方法]样品经过与HLB固相萃取小柱净化、洗脱,以高效液相色谱-串联质谱仪使用多反应监测(MRM)离子模式进行定性、定量分析。[结果]以猪肉为基质,四环素类抗生素在加标浓度为2和5μg/kg时,回收率为75.7%~88.7%,相对标准偏差为1.2%~5.6%(n=3),方法检出限为0.4~1.5 ng/m L;喹诺酮类抗生素在加标浓度为2和5μg/kg时,回收率为79.0%~90.5%,相对标准偏差为2.1%~6.3%(n=3),方法检出限为0.5~2.0 ng/m L。[结论]该试验所建立的方法可成功地应用于猪肉中目标抗生素残留的分析。     

鸡源大肠杆菌四环素耐药基因检测

用肉汤稀释法测定32株鸡源大肠杆菌对四环素等8种抗菌药物的敏感性,用PCR方法检测5种四环素耐药基因(tet基因),并用ERIC-PCR方法分析试验菌株间的克隆关系。结果显示:32株大肠杆菌对四环素、多西环素的耐药率分别为84%、75%,tetA和tetB阳性率分别为78%和25%。总tet基因阳性率为90.6%,与对四环素、多西环素的耐药率基本一致。携带1种或2种tet基因的临床分离菌,不仅对四环素类药物耐药,还对头孢噻肟、环丙沙星、新霉素和氟苯尼考耐药,呈现多重耐药的特点。试验菌共分为A~O 15个ERIC型,tetA和tetB几乎均匀分布于不同ERIC型菌株中,表明其在试验菌株间水平扩散。     

牧草中抗生素的来源及检测方法研究进展

抗生素是生物在其生产活动过程中产生,并能在低微浓度下有选择性地抑制或杀灭其他微生物或肿瘤细胞的有机物。抗生素被长期用于人和动物的疾病治疗,环境中的抗生素对生态环境和人类健康的影响已经得到认知,而这些抗生素可能通过各种途径在牧草中产生残留,也可能因牧草上的微生物分泌而产生,进入畜产品进而危害人体健康。抗生素在天然牧草中已被检测到。综述了牧草中抗生素的来源、抗生素残留的检测方法研究进展,并评估了牧草中抗生素的影响。     

鸡源致病性大肠杆菌对四环素类抗生素耐药性及耐药基因检测

为更好地了解鸡源致病性大肠杆菌对四环素类抗生素的耐药性及耐药基因分布,从陕西省部分规模化养鸡场的病、死鸡中经分离鉴定得到158株致病性大肠杆菌。采用K-B药敏纸片法检测致病性大肠杆菌分离株对4种四环素类药物的药敏性,PCR方法检测3种四环素类耐药基因,用DNAStar软件对获得的耐药基因序列与GenBank中的相关序列进行比对。结果显示,鸡源致病性E.coli分离株对四环素、金霉素、土霉素以及多西环素的耐药率分别为88.6%、77.2%、87.3%、50.6%,3重以上耐药菌株占78.5%。四环素类耐药基因tetA、tetB的检出率分别为81.4%、20.7%,未检测到tetC基因。结果表明,鸡源致病性E.coli对四环素类抗生素普遍具有耐药性,且以多重耐药为主;耐药基因tetA的检出率与其耐药性呈正相关。     

应用Taqman荧光定量PCR快速检测宠物食品中的沙门氏菌

[目的]建立快速检测宠物食品中沙门氏菌(Salmonella)的荧光定量PCR方法。[方法]根据Genbank中登录的沙门氏菌吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白invA基因序列设计合成引物和探针,检测该方法的特异性和敏感性。[结果]该方法具有良好的特异性,对沙门氏菌的检测灵敏度可达到17 CFU/反应(25μl/反应)。应用该方法检测人工污染宠物食品,样品经18 h增菌后,结果均为阳性。[结论]该研究建立的Taqman荧光定量PCR方法可以快速、准确地检测宠物食品中的沙门氏菌。     

食品中农药残留检测技术研究

由于农药的大量和不合理的使用,农药残留已经成为危害人类安全的重要因素之一。对现有的农药残留检测技术进行了总结,并分析了农药残留各项检测技术的原理、优缺点。最后展望了这一研究领域的发展方向。     

寡核苷酸芯片检测兽医病原菌耐药性的研究

 利用寡核苷酸芯片（oligonucleotide array）对兽医临床常见病原菌耐药性检测进行了初步研究。设计1对兼并引物扩增3种病原菌（E. coli、S. aureus、M. gallisepticum）的gyrA基因片段，并用cy5-dCTP标记荧光。设计一系列检测病原菌对氟喹诺酮类药物耐药的寡核苷酸探针，将探针固定在APS-PDC法制作的Microarray上，用标记的PCR产物与之杂交，置于Scanarrray4000中扫描，利用ImaGene3.0软件对杂交图像进行分析。研究结果表明，设计的兼并引物能很好地扩增出3种病原菌的gyrA基因片段，与Microarray杂交后在相应的位点出现可检测的杂交信号，样本O78S（禽大肠杆菌）、SS（金黄色葡萄球菌）、S6-10（鸡毒支原体）的ratio比值均≥2，说明这3株是敏感株；样本EDr（犬大肠杆菌）、ECr（猫大肠杆菌）与a1探针（检测GyrA第83位氨基酸发生突变的探针）的ratio比值≤0.5，说明这两株是耐药突变株，均与样本的实际情况相吻合。说明利用Oligonucleotide array能快速准确地检测出GyrA亚基第83、87位发生突变的耐药菌株，是可行、有效、快捷的抗菌药耐药性的监测方法。本研究为进一步研制和开发兽医临床常见病原菌耐药性检测芯片打下初步基础。     

食品中沙门氏菌检测方法的探讨

介绍了沙门氏菌污染的危害,并探讨了几种主要的检测方法。这些快速检测方法对于沙门氏菌的检测具有良好的应用前景。