The Association Analysis between IL-2 Gene and H/L in Jingxinghuang Chicken

Interleukin-2(IL-2) gene was regarded as a candidate gene for immune function of Jingxinghuang chicken in this study.The genotype frequencies, allele frequencies, haplotypes and association with H/L of five SNPs were studied by direct sequencing.The results indicated that all the five loci fitted Hardy-Weinberg equilibrium and showed low degrees of heterozygosity with two genotypes detected.Meanwhile, the homozygosis genotype was predominant in all the five loci.Analysis of linkage disequilibrium (LD) suggested that SNP1 and SNP2 showed perfect LD, whereas SNP3, SNP4 and SNP5 showed perfect LD.Analysis of haplotypes revealed four haplotypes, among which Hap1 (TGACT) was predominant.The least square method (LSM) analysis showed that there were no significant difference between different genotypes and haplotype combinations(P> 0.05).The results suggested that more SNPs of IL-2 gene and association with additional immune traits would be investigated in future studies for better understand the roles in immune systems that chicken IL-2 playing.     

利用H/L值分析鸡抗应激能力差异

通过H/L值的比较,对不同品种鸡的抗应激能力进行评价。随机抽取如皋鸡、文昌鸡以及安卡鸡各80只,分别检测了41、56、71和89日龄的异嗜性粒细胞(H)、淋巴细胞(L)及H/L值。结果表明:(1)在41、56日龄时,如皋鸡与文昌鸡、安卡鸡相比H、L及H/L值呈极显著差异(P<0.01);89日龄的H/L值在文昌鸡和安卡鸡之间呈极显著差异(P<0.01)。(2)如皋鸡在41日龄和71日龄间H、L及H/L值呈极显著差异(P<0.01),其余差异均不显著。文昌鸡H、L及H/L值在各日龄间变化较大,41和71日龄间呈显著差异(P<0.05),41和89日龄、56和71日龄以及56和89日龄间呈极显著差异(P<0.01)。安卡鸡各值只在56和89日龄间呈显著差异(P<0.05),其余差异均不显著。研究初步表明家禽的抗应激能力存在品种间差异,如皋鸡的抗应激能力优于安卡鸡,文昌鸡晚期表现出较好的抗应激能力,随着日龄的增加,品种之间的抗应激能力差异会减小。     

海兰鸡白细胞介素-18全基因的克隆与序列分析

白细胞介素-18（Interleukin-18，IL-18）是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子，在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列，自行设计一对引物，经植物血凝素（PHA）活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后，提取其总RNA，经反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增，扩增产物进行了T-A克隆、测序，获得了中国海兰鸡IL-18基因全序列，其大小为597bp，与在GenBank中查得的鸡IL-18基因进行比较发现，中国海兰鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致，为进一步研究鸡IL-18基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。     

水貂白细胞介素-2基因的克隆与生物学信息分析

根据Gen Bank中狐白细胞介素-2(IL-2)基因序列(AJ621188),设计合成1对引物,以水貂脾脏组织RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增水貂IL-2基因。序列分析表明:水貂IL-2基因长468 bp,编码155个氨基酸,其中含21个氨基酸的信号肽和134个氨基酸的成熟多肽。IL-2蛋白分子质量为17.84 ku,等电点为4.65,含有4个与二硫键形成有关的半胱氨酸,1个糖基化位点,成熟肽含有3个α螺旋,5个β折叠区,9个β转角。同源性分析发现,水貂IL-2基因序列与Gen Ban K发表的21种IL-2基因核苷酸序列同源性为2.9%~88.5%,氨基酸序列同源性为5.2%~80.6%。水貂与Gene Bank中21种动物的IL-2基因序列分析和系统进化树分析表明,IL-2基因存在种属特异性。水貂IL-2基因的成功克隆,为进一步研究水貂IL-2基因生物学活性和应用奠定基础。     

水牛白细胞介素-2基因的克隆及其序列分析

根据GeneBank上发表的牛IL-2基因序列,设计一对引物,采用RT-PCR技术,以ConA刺激培养9h、17h的沼泽型水牛外周血淋巴细胞为材料,从总RNA中扩增出水牛IL-2基因.琼脂糖凝胶电泳显示扩增片段约为724bp,分离纯化,克隆到pMD18-T载体.经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,以及核苷酸测序结果显示,克隆的水牛IL-2基因与GeneBank上发表的序列同源性为99.8%.     

荣昌猪白细胞介素-2和白细胞介素-4基因的克隆与序列分析

将荣昌猪外周血淋巴细胞在刀豆素A(ConA)的刺激下培养24~70 h后,提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-4(IL-4)cDNA,克隆到pMD18-T载体并测序。结果表明:克隆的IL-2 cDNA全长为522个碱基,ORF为465个碱基,编码154个氨基酸,与GenBank公布的猪IL-2比对同源性均为99.8%;克隆的IL-4 cDNA全长411个碱基,ORF为402个碱基,编码133个氨基酸,与GenBank公布的猪IL-4比对同源性均在98.0%以上,从而证实成功克隆了荣昌猪IL-2和IL-4基因cDNA。     

广西10个地方优质品种鸡白细胞介素2基因的克隆与序列分析

根据基因库中鸡白细胞介素2基因序列设计一对特异性引物,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从ConA诱导培养的广西10个地方优质品种鸡的外周血淋巴细胞RNA中扩增,均得到大小为470 bp的特异性片断。将10个品种鸡的RT-PCR产物纯化后克隆到pMD18-T载体上,得到重组质粒,经PCR和EcorⅠ、SalⅠ双酶切等方法鉴定后,测定鸡白细胞介素2基因序列。序列分析结果表明:广西10个地方优质品种鸡白细胞介素2基因都编码143个氨基酸的成熟蛋白,分子量约为16.3 ku,与哺乳动物和其他品种鸡核苷酸序列的同源性分别为24.8%-30.3%、98.8%-99.8%,氨基酸的同源性为14.6%-16.7%、96.5%-98.6%。     

牛白细胞介素-2基因的克隆与序列分析

白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)是一种具有广泛生物学活性的细胞因子,主要由激活的T淋巴细胞产生,它能提高免疫细胞杀伤癌细胞、病毒或细菌感染细胞以及促进抗体生成和分泌的能力[1-2],在机体正常免疫过程中起着十分重要的作用.     

鸡白细胞介素-2的分子生物学研究进展

对鸡白细胞介素 - 2近年来在分子生物学方面取得的研究进展作一综述 ,内容涉及鸡白细胞介素 - 2的基因表达、蛋白纯化、基因组结构、突变分析、种属特异性和活性检测。     

胸腺九肽对鸡脾淋巴细胞增殖转化及IL-2基因表达与分泌的影响

采用MTT比色法、相对半定量RT-PCR法和放射免疫测定（RIA）法研究了不同浓度的胸腺九肽对离体培养的鸡脾淋巴细胞增殖转化、IL-2基因表达与分泌的影响。结果表明，用10ng／mL和lng／mL胸腺九肽处理鸡脾淋巴细胞8h后，能显著增加由ConA诱导的淋巴细胞增殖转化反应，显著提高IL-2基因的表达水平以及细胞培养上清液中的IL-2含量（P〈0．05）；100ng／mL的胸腺九肽虽有增强脾淋巴细胞增殖转化反应以及提高IL-2基因表达和分泌能力的趋势，但与对照组无显著差异（P〉0．05）。提示，胸腺九肽能增强鸡脾淋巴细胞的增殖转化反应，并主要在基因转录水平上促进IL-2的合成与分泌，其作用与弃3量大小有关。     

洛阳土种鸡IL-2 cDNA的克隆及原核表达

应用RT-PCR技术从新城疫I系疫苗诱导的洛阳土种鸡胚脾淋巴细胞中扩增到全长0.43kb的鸡IL-2基因cDNA,将IL-2cDNA克隆到PMD-T载体,测序结果表明,该基因为不含终止密码子的目的基因。将该目的基因克隆到原核表达载体PET-28a,获得的重组质粒PET-28a-IL2经酶切、PCR及序列测定,表明IL-2基因插入的位点、大小与读码框均正确。PE-28a-IL2在大肠杆菌BL21（DE3）中经IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE电泳分析,在14ku处出现一条约占总蛋白21％的蛋白带,表明所克隆的IL2基因在大肠杆菌中得到良好的表达,为进一步研究IL-2的生物学特性奠定了基础。     

鸡T淋巴细胞IL－2的体外诱生及活性检测

经Ｌ１６（４５）正交试验选择，并经实验验证，鸡脾脏Ｔ淋巴细胞白细胞介素２（ＩＬ－２）体外诱生和活性检测的最优水平组合及适宜条件为２．５μｇ／ｍＬ伴刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）、ＩＬ－２体外诱生时间２０ｈ、１×１０７／ｍＬ淋巴细胞、１０％小牛血清、靶细胞培养时间４８ｈ、４×１０６／ｍＬ靶细胞、靶细胞接触时间３６ｈ、５ｍｇ／ｍＬＭＴＴ、ＭＴＴ加入时间３ｈ和甲溶解时间２ｈ；胸腺Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２体外诱生和活性检测的最优水平组合及适宜条件为５μｇ／ｍＬＣｏｎＡ、ＩＬ－２体外诱生时间４８ｈ，余同脾脏Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２体外诱生及活性检测。比较试验表明，ＭＴＴ比色分析法和３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法有显著的直线回归关系。     

鸡白介素-17 cDNA基因的克隆、序列分析及表达

用RT-PCR方法,分别以ConA体外刺激培养12、24、48 h的鸡脾脏淋巴细胞(SP)和经人工感染2次堆型艾美尔球虫(E im eria tenella)孢子化卵囊(约3.6×104个/鸡)的鸡盲肠扁桃体/肠上皮淋巴细胞(IELS)总RNA为模板,成功扩增出预计大小的鸡白介素-17 cDNA基因,并克隆入pM D 18-T载体,进行序列测定。测序结果显示其阅读框(ORF)为507 bp,与G enB ank上鸡IL-17基因已知序列(A J493595)BLA ST的比较表明:核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.4%和82.4%。将cDNA基因克隆入pET-32a质粒,构建了pET 32a-IL-17原核表达载体,IPTG诱导后表达出的融合蛋白大小为36 000左右。     

鸡IL-2在新城疫病毒F基因疫苗免疫中的作用

利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。结果证实了国内克隆鸡 IL- 2基因的免疫增强作用 ,以及作为免疫佐剂应用于禽类基因免疫的可行性 ,为鸡 IL- 2这一新型佐剂的实际应用提供了重要的试验依据。     

鸡Camk2d基因外显子15的SNP发现、检测及与经济性状的关联分析

克隆了鸡Camk2d基因的部分片段并发现Camk2d基因第15外显子51bp处有一C→T碱基转换的沉默突变,该突变位点具有VspI酶切多态,通过PCR-RFLP技术对我国乌骨鸡、鹿苑鸡、固始鸡、白耳鸡、仙居鸡、斗鸡和大骨鸡等7个不同地方品种鸡进行了基因型检测。结果表明:在7个品种中存在3种基因型(CC、CT、TT),χ2检验显示在各品种间基因型存在不同差异。同时在藏鸡,隐性白羽鸡,杂交鸡(藏♂×隐♀)和75%血液藏鸡[藏♂×(藏♂×隐♀)♀]群体中进行了基因-性状关联分析,结果表明,该SNP位点与腹脂存在极显著相关(P<0.01),与肌肉pH值显著相关(P<0.05)。     

鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因适用性进化分析

采用反转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）方法,以肝脏总RNA为模板,对泰和乌骨鸡、隐性白羽肉鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因（ADSL）编码区序列进行克隆和测序;并结合Gen—Bank中已提交的家鸡、鱼类、哺乳动物和人类等ADSL基因序列,采用基于最大似然法的密码子置换模型分析ADSL基因编码区序列在进化过程中承受的选择压力。结果RT—PCR方法准确获得了泰和乌骨鸡和隐性白羽肉鸡ADSL基因编码区序列,全长为1380bp。“分支特异模型”检验结果表明,ADSL基因在不同物种进化过程中较为保守,未受到正选择作用。鸡ADSL基因序列的“位点特异模型”检验未发现正选择位点。研究结果有助于了解鸡ADSL基因的结构及进化历程。     

IBDV-VP2基因高变区同义密码子在蛋鸡和乌鸡中的偏嗜性

以RT-PCR方法对河南省洛阳地区2000-2002年分别从IBD发病蛋鸡和乌鸡鸡群中分离到的5株和4株IB-DV进行了VP2高变区基因的扩增、克隆和测序。核苷酸和氨基酸序列分析发现，9株IBDV中有4处氨基酸发生了变化，即320位的Gln／His。349位的Val／Ile．375住的Pro／Ser和381位的Lys／Arg。这些氨基酸的变化，不符合变异株的特征。核苷酸序列变化主要表现在同义密码子的置换。分别将分离于蛋鸡和乌鸡的各3个毒株交叉感染乌鸡和蛋鸡鸡胚，盲传7代后取尿囊腔绒毛膜分离病毒进行VP2基因的序列分析。结果表明，IBDV VP2基因高变区某些氨基酸同义密码子在蛋鸡和乌鸡细胞中的选择上有偏嗜性。主要表现在第1亲水区220位的Tyr（TAC／TAT）；224、360、393住的Gly（GGA／GGG）；260及420位的Thr（ACC／ACT。ACA／ACT）；271住的Val（GTA／GTG）；279位的Asp（GAc／GAT）；305位的Ile（ATC／ATA）及328位的Ser（TCA／TCG）。病毒在不同品种宿主中对同义密码子使用的偏嗜性，可能是导致蛋鸡和乌鸡对IBDV易感性不同的一个重要原因，也可能是病毒变异及新毒株产生的一条重要途径。     

静原鸡ELOVL2基因遗传多态性研究

为了探讨静原鸡极长链脂肪酸延伸酶蛋白2（elongation of very-long-chain fatty acids 2,ELOVL2）基因的遗传特性,确定核苷酸的变异位点,本研究采用PCR-SSCP及DNA测序技术对静原鸡ELOVL2基因进行多态性检测。结果显示,静原鸡ELOVL2基因外显子6无多态性,内含子2和6呈中度多态。在ELOVL2基因内含子2扩增片段上共检测到5种基因型：A₂A₂、B₂B₂、C₂C₂、D₂D₂和A₂C₂,4种等位基因：A₂、B₂、C₂和D₂,其中A₂为优势等位基因（0.62）,A₂A₂基因型为优势基因型（0.54）;3个SNPs位点：g.63372228+4918G > A的转换、g.63372228+5024T > C的转换和g.63372228+4928C > A的颠换。在E2e6I6扩增片段上共检测到3种基因型：A₁A₁、B₁B₁和A₁B₁,2种等位基因：A₁和B₁,其中A₁为优势等位基因（0.67）,A₁A₁基因型为优势基因型（0.54）,等位基因B₁存在g.63388000+748G > C的颠换。群体遗传学分析发现,静原鸡ELOVL2基因内含子2、6遗传纯合度均较高,且偏离了Hardy-Weinberg平衡（P < 0.05）。本研究结果表明,静原鸡ELOVL2基因内含子2和6序列突变较高,且呈中度多态,表现出纯合子优势,外显子6上无突变。