3种β2-受体激动剂荧光免疫层析试纸条的制备及特性研究

本研究旨在制备性能优异的克伦特罗（clenbuterol,CLB）、莱克多巴胺（ractopamine,RAC）和沙丁胺醇（salbutamol,SAL）荧光免疫层析快速定量检测试纸条,并对该试纸条的检测范围、检测限、准确度、精确度、假阳性、假阴性及其与仪器方法的符合率进行评价。结果显示,克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇试纸条标准曲线范围分别为0~3.2、0~6.4、0~8.0 μg/L;克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇试纸条检测下限分别可达0.2、0.4和0.5 μg/L;克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇与其他8种同类药物交叉反应均成阴性,特异性良好;各批添加回收率在60%~120%之间,准确度达到要求;不同克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇浓度下变异系数（CV）均小于15%,符合精密度标准;猪尿中假阳性率和假阴性率均为0;此外与仪器方法的符合率为100%。试纸条适用于猪尿中克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留快速检测,具有灵敏度高、稳定性好和特异性强的特点。     

3种β_2-受体激动剂荧光免疫层析试纸条的制备及特性研究

本研究旨在制备性能优异的克伦特罗(clenbuterol,CLB)、莱克多巴胺(ractopamine,RAC)和沙丁胺醇(salbutamol,SAL)荧光免疫层析快速定量检测试纸条,并对该试纸条的检测范围、检测限、准确度、精确度、假阳性、假阴性及其与仪器方法的符合率进行评价。结果显示,克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇试纸条标准曲线范围分别为0~3.2、0~6.4、0~8.0μg/L;克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇试纸条检测下限分别可达0.2、0.4和0.5μg/L;克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇与其他8种同类药物交叉反应均成阴性,特异性良好;各批添加回收率在60%~120%之间,准确度达到要求;不同克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇浓度下变异系数(CV)均小于15%,符合精密度标准;猪尿中假阳性率和假阴性率均为0;此外与仪器方法的符合率为100%。试纸条适用于猪尿中克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留快速检测,具有灵敏度高、稳定性好和特异性强的特点。     

2种不同检测模式下的林可霉素胶体金试纸条的比较研究

本试验旨在研究检测牛奶中林可霉素（lincomycin, LIN）胶体金免疫层析试纸条。根据直接竞争抑制和间接竞争抑制2种模式,通过对金标包被原（抗体）量、pH、包被抗体（抗原）浓度、牛奶前处理等试验的优化,制备出2种满足实际检测需要的胶体金试纸条;二者的检测限分别为30和10 ppb。在实际检测中,间接法在灵敏度、稳定性和检测时间等方面都优于直接法。     

牛副结核胶体金免疫层析试纸条的研制

将提纯的牛副结核分支杆菌重组蛋白MAP0862-2154c作为硝酸纤维素膜检测线的包被抗原,兔抗羊IgG作为硝酸纤维素膜质控线的包被抗体,金标羊抗牛IgG点喷到玻璃纤维素膜上,制成用于检测牛副结核抗体胶体金免疫层析试纸条。用牛的副结核标准阳性血清与检测试纸条反应,在检测线处出现红色反应带,而滴加阴性血清的试纸条检测线处未出现反应条带,上述2种血清在质控线处均出现红色反应条带;试纸条可检出牛副结核抗体的最低抗原包被浓度为400μg/mL;试纸条不与牛结核病、牛布鲁氏菌病的阳性血清发生反应;试纸条37℃保存9d后的检验结果与4℃保存的检验结果相同。所制备的试纸条具有灵敏、特异的优点,稳定性良好;10min左右即出结果,操作简便,可用于临床诊断。     

鸭坦布苏病毒E蛋白Domain Ⅲ单克隆抗体胶体金试纸条的创制及应用

为建立一种快速诊断鸭坦布苏病毒（DTMUV）的方法,以2株（B9D7B8G10和B9D10C7株）抗DTMUV的单克隆抗体制备DTMUV胶体金免疫层析试纸条。采用经典的柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液,利用rProtein G琼脂糖凝胶亲和层析法对两株单克隆抗体腹水进行纯化并鉴定;以纯化的B9D7B8G10株单克隆抗体作为标记抗体,通过调节单克隆抗体浓度与pH确定胶体金探针最佳结合条件;同时,在硝酸纤维素膜（NC膜）检测带包被纯化的B9D10C7株单克隆抗体,质控带包被山羊抗小鼠IgG抗体,建立检测DTMUV胶体金免疫层析试纸条;成功建立试纸条后,对试纸条敏感性、特异性、重复性和稳定性进行检测,并与RT-PCR检测方法进行比较,对200份临床疑似感染样品进行检测。结果显示：制备的胶体金试纸条在15 min内即可完成检测,最低检测稀释度为1:50,且不与鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅星状病毒、禽白血病病毒发生交叉反应;应用试纸条和RT-PCR方法分别对200份临床疑似样品进行检测,两者符合率达98%。结果表明,制备的胶体金试纸条敏感性高、特异性强、稳定性好、重复性好,为DTMUV的快速检测提供了...     

荧光微球免疫层析法快速检测鸡饲料中喹乙醇的含量

为更灵敏地进行全价鸡饲料中喹乙醇(OLA)含量的快速检测,本研究将新型标记物荧光微球与喹乙醇单克隆抗体偶联,以该复合物为检测试剂制备荧光微球免疫层析试纸条,在肉眼检测的同时,将该装置与荧光微球定量侧向层析读数仪联合使用,可进行全价鸡饲料中喹乙醇含量的定量快速检测。研究结果证明,饲料中喹乙醇的定性和定量检测限分别为100μg/kg和0.51μg/kg,IC_(50)值为1.89 ng/m L,定量检测回收率为78.71%~90.83%。该试纸条特异性强、准确性高,保存期长。定量检测只需18 min左右,肉眼检测需38 min左右,与相同抗原和抗体制备的胶体金试纸条相比,该方法可大大提高灵敏度。     

犬C-反应蛋白荧光定量免疫层析检测方法的建立与应用

试验开展了犬C-反应蛋白(C-CRP)荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在研制一种操作简易、灵敏度高,用于快速定量检测C-CRP荧光免疫层析试纸条。采用双抗体夹心法和荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球标记的抗C-CRP单克隆抗体及羊抗鸡IgY为标记抗体,抗C-CRP单克隆抗体和鸡IgY分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。结果显示,所制备C-CRP检测试纸条的检测范围为0.5～250mg/L,检测限为0.5mg/L,批内和批间变异系数(CV)分别为0.68%～6.94%和0.89%～8.79%,平均回收率为98.15%～101.19%,试剂与9种干扰物质无交叉反应。加速破坏稳定性试验表明试纸条可以常温放置24个月。临床样本测试发现,其与I-CHROMA试剂盒检测结果相关性良好(R2=0.995)。综上所述,该荧光免疫层析试纸条灵敏度、特异度较高,且操作简单、快速,可用于宠物犬临床检测。     

犬C-反应蛋白荧光定量免疫层析检测方法的建立与应用

试验开展了犬C-反应蛋白(C-CRP)荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在研制一种操作简易、灵敏度高,用于快速定量检测C-CRP荧光免疫层析试纸条。采用双抗体夹心法和荧光免疫层析技术,以羧基荧光微球标记的抗C-CRP单克隆抗体及羊抗鸡IgY为标记抗体,抗C-CRP单克隆抗体和鸡IgY分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。结果显示,所制备C-CRP检测试纸条的检测范围为0.5～250mg/L,检测限为0.5mg/L,批内和批间变异系数(CV)分别为0.68%～6.94%和0.89%～8.79%,平均回收率为98.15%～101.19%,试剂与9种干扰物质无交叉反应。加速破坏稳定性试验表明试纸条可以常温放置24个月。临床样本测试发现,其与I-CHROMA试剂盒检测结果相关性良好(R2=0.995)。综上所述,该荧光免疫层析试纸条灵敏度、特异度较高,且操作简单、快速,可用于宠物犬临床检测。     

布鲁氏菌抗体时间分辨荧光检测方法的建立

用布鲁氏菌的Bp26蛋白包被免疫层析试纸条的检测线,以稀土荧光纳米颗粒标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)作为信号报告基团,建立了检测布鲁氏菌抗体的时间分辨荧光检测方法。用制备的稀土荧光试纸条检测715份牛血清,与虎红平板凝集试验结果的符合率为92%,且与牛巴贝斯虫阳性血清、牛结核菌阳性血清、牛副结核杆菌阳性血清、口蹄疫阳性血清均无交叉反应,检测灵敏性好于胶体金试纸条。     

牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用

为了建立一种快速检测牛分支杆菌抗体的新方法用于诊断牛结核病,利用胶体金免疫层析技术原理,用原核诱导表达的牛分支杆菌抗原蛋白MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条.结果表明,粒径为40 nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.0,MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5 μg,MPB70抗原的最适包被浓度为3.0 mg/mL,抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5 mg/mL,交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性.比较试验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条.在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较.本试纸条与牛分支杆菌分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%.快速检测牛结核抗体的免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核病根除计划中具有良好的应用前景.     

Preparation and Properties Analysis of Clenbuterol Fluorescent Immunochromatographic Strip

This study was aimed to prepare excellent fluorescence immunochromatographic strip for clenbuterol (CLB) which could achieve the purpose of rapid and quantitative detection and laid a foundation for its industrialization.The strip was prepared through single factor experiments using latex particles as a fluorescent label.The preparation process was optimized with CLB concentration,drying time,mixing reaction time,reaction temperature and chromatography time.And the properties of this strip including detection limit,specificity,clinical accuracy and added recovery,degree of precision and stability were investigated.Optimum modification conditions were shown as following:CLB concentration was 2.0 mg/mL,drying time was 5 d,mixing reaction time was 1 min,reaction temperature was 25 ℃,chromatography time was 15 min.The detection limit was up to 0.35 μg/L and the cross rate between CLB and other eight similar drugs were less than 0.8% which demonstrated the good specificity.The added recoveries of each batch were between 80% and 120% which met the requirements.The coefficient of variation (CV) under different concentrations of CLB was less than 5% which met the precision standard.Besides,the stability of the experiment also showed that the test strip had good stability.     

盐酸克伦特罗荧光定量检测试剂盒质量的评价

本研究使用盐酸克伦特罗荧光定量检测试剂盒,基于免疫荧光层析原理,实现对猪尿中所含克伦特罗的定量检测,并对试纸条的灵敏度、准确度与精密度、特异性、稳定性等进行了初步的性能评价。结果表明,以四参数法对定量曲线进行拟合,线性系数为R²=0.99972;检测限达到0.1 μg/L;对3个不同浓度的添加回收试验,测得其回收率为80%~120%;批内变异系数分别为12.2%、11.1%、15.2%;与4种β-肾上腺素受体激动剂和8种常用的抗生素交叉反应率均低于0.01%;同时验证了本试剂盒在1年的保存期限有效。整个检测过程只需15 min。     

GC法测定马香苓口服液中百秋李醇含量研究

试验旨在建立测定马香苓口服液中百秋李醇含量的研究方法。本研究采用气相色谱法,其色谱条件是使用色谱柱HP-5毛细管柱;柱温采用程序升温（初始温度150 ℃,保持18 min,以50 ℃/min速率升至280 ℃,保持5 min）;进样口温度为280 ℃;载气：高纯氮气;流速1 mL/min;进样量1 μL,分流比20：1;检测器为氢火焰离子化检测器,温度为280 ℃;氢气流速40 mL/min,空气流速370 mL/min;分别进行系统适用性试验、专属性试验、线性范围考察、检测限和定量限的确定、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验、耐用性试验,并对10批样品进行了含量测定。结果显示,专属性溶液中的溶剂峰、药液的杂质峰与主成分峰能达到有效分离且分离度符合要求（R ≥ 1.5）,表明该方法系统适用性良好;阴性对照溶液未检出色谱峰,表明样品中其他成分不干扰测定;百秋李醇定量限和检测限分别为2.842和0.812 μg/mL;百秋李醇检测质量浓度在15.86~1 015 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（y=0.869x-10.45,R²=0.999,n=7）。精密度试验、稳定性试验（日内和日间精密度）、重复性试验的平均RSD分别为0.90%、1.63%和1.83%、2.90%,其RSD均在可控范围内（RSD ≤ 3%）;平均加样回收率为95.36%,RSD=2.82%（n=6）,表明所建立的气相色谱法检测百秋李醇的含量回收率良好;进行耐用性试验,最终验证所建立的色谱方法可以稳定检测百秋李醇的含量。经方法学验证,该方法准确稳定,简便可行,能够作为马香苓口服液君药广藿香中百秋李醇的含量控制方法,同时也为该制剂质量控制提供了一种有效的检测方法,暂定本品中广藿香药材按百秋李醇计不少于47.53 μg/mL。     

气相色谱法测定乳及其制品中肌醇含量的方法优化

目前,国标法-气相色谱法中测定食品中肌醇含量的方法存在操作步骤繁琐,操作稳定性不高,检测时间长的不足,为此,本文对《GB 5009.270—2016食品安全国家标准食品中肌醇的测定》中的气相色谱法进行了试样前处理、标品配制、色谱条件的优化.试验结果表明,本方法在0.02～0.12 mg范围内,呈良好的线性关系,相关系数...     

凯氏定氮法检测乳制品中蛋白质含量的优化方法

[目的]优化全自动凯氏定氮法检测乳制品中蛋白质含量的检测条件。[方法]采用凯氏定氮法检测乳制品中蛋白质含量,通过对比不同称样量、消化时间及消化后冷却时间对检测结果的影响,选择最佳参数条件,实现对全自动凯氏定氮法检测方法的优化,并提高检测效率。[结果]混合均匀的乳制品,一定范围内称样量对结果的影响不大,精密度符合国标要求,但是灭菌乳、调制乳、饮料称样量增多,精密度对应越好,发酵乳则称样过多后精密度有所下降;在230 ℃消化30 min,420 ℃时消化80 min,可消化完全,精密度可以控制在1%以内;消化后样品及时冷却,48 h内,对检测结果没有显著差异。[结论]通过本试验证明,使用凯氏定氮法检测乳制品中蛋白质含量时,调整称样量、消化时间、冷却时间,对检测结果没有显著影响。     

柱状黄杆菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立

为建立一种通过胶体金免疫层析技术快速检测柱状黄杆菌的方法,试验采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20 nm的胶体金颗粒,将其标记纯化的抗柱状黄杆菌单克隆抗体(McAb)制备出金标抗体结合垫。纯化的兔抗柱状黄杆菌多克隆抗体(PcAb)和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)与质控线(C)上,制备出胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性及稳定性进行测定。结果显示,该试纸条检测灵敏度为1×10³ CFU,检测时间为3.5 min,制备的试纸条与迟钝爱德华氏菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌均无交叉反应,且稳定性好。本研究首次成功建立了柱状黄杆菌胶体金快速检测方法,所制备的试纸条具有灵敏、特异、稳定、快速等优点,可用于柱状黄杆菌的检测。     

检测鸡肉中甲羟孕酮酶联免疫试剂盒的研制

试验旨在利用酶联免疫技术研制一种快速检测鸡肉中甲羟孕酮的试剂盒。经测试,该试剂盒对鸡肉样本的检测限为1 μg/kg,批内、批间相对标准偏差均小于10%;稳定性测试结果表明,试剂盒能在4℃保存12个月;交叉反应率结果表明,单克隆抗体特异性良好。该试剂盒的操作时间仅需45 min,适合现场大量样本的快速检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时检测肉鸡组织中4种异喹啉类生物碱

【目的】试验旨在建立一种同时测定肉鸡组织中原阿片碱、别隐品碱、白屈菜红碱和血根碱含量的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测方法,以便更好地监测博落回散和博普总碱散活性成分在肉鸡组织中的分布与残留情况。【方法】对肉鸡组织进行前处理方法优化,以0.1%甲酸水和乙腈为流动相,在Agilent Zorbax SB-C₁₈上梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为35℃,进样量为1 μL,在正离子模式下通过多反应监测模式采集数据,采用内标校正和外标法测定生物碱含量,并对方法线性、检测限与定量限、基质效应、回收率、批内与批间精密度、准确度及稳定性进行考察。【结果】白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱的线性范围为0.5~200 μg/L,血根碱为2~200 μg/L,相关系数均≥0.999,线性关系良好;白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱的检测限与定量限分别为0.2和0.5 μg/L,血根碱检测限与定量限分别为1和2 μg/L。4种生物碱在高、中、低浓度下方法回收率达到86.61%~111.17%,批内与批间精密度和准确度均≤14.93%,基质效应为81.73%~120.78%,稳定性的相对标准偏差均≤13.55%。【结论】本试验建立了同时检测肉鸡心脏、肝脏、肾脏、胸肌和腿肌中4种异喹啉类生物碱的超高效液相色谱-串联质谱法,方法符合各项方法学考察要求,具有专属性强、灵敏度高、方便快捷等特点,可实现对肉鸡组织中痕量生物碱的精确、快速定量。     

鹅新城疫病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立

本研究拟建立一种能在基层实时、便捷诊断鹅新城疫病毒（goose Newcastle disease virus，GNDV）的检测方法。根据GenBank中公布的GNDV F基因的高度同源保守序列设计特异性引物，并在反应体系中添加钙黄绿素/氯化锰指示剂，建立可视化RT-LAMP检测方法。结果显示，建立的方法能特异地检测出GNDV及NDV Lasota疫苗株，而小鹅瘟病毒（GPV）、禽流感病毒（AIV）、鸭坦布苏病毒（DTMUV）等其他病毒均为阴性。所建立的GNDV可视化RT-LAMP检测方法对RNA的最低检测限为10 pg，反应过程不需PCR仪等复杂的仪器，50 min即可完成反应，可经肉眼观察反应体系颜色判定结果。该方法特异性强、灵敏度高，且操作安全、简便、快捷，可满足基层筛查GNDV的需求。