牛奶中替米考星残留量的检测方法研究

建立了牛奶中替米考星残留量的检测方法。样品用乙腈提取，C18柱净化，在290nm波长下进行HPLC测定。在空白牛奶中添加0．025、0．05、0．10μg/mL浓度的替米考星时，该方法的平均回收率在72．1％～85．8％之间，日内变异系数在7．0％～10．7％之间，日间变异系数在3.5％～5．4％之间，检测限为0．005μg／mL。该方法适用于牛奶中替米考星残留量的测定。     

酶联免疫吸附法测定牛奶中青霉素残留的试验报告

用酶联免疫吸附法对牛奶中残留的青霉素进行了检测,结果得出该方法的最低检出限为2.0μg/L。本方法对牛奶中添加青霉素浓度为2.0～6.0μg/L的检测回收率在65.0%～115.0%范围内,批内变异系数≤14%,批间变异系数小于≤15%。表明该方法可用于青霉素残留量的筛选检测。     

Establishment of Indirect Competitive Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Tilmicosin in Milk

An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting tilmicosin residue in milk was developed and applied to milk samples after the determination of dilution of coating antigen and antibody to timicosin by using checkerboard method,and the optimization of coating condition,reaction time and temperature,and reaction time of enzyme-labled secondary antibody.The results showed that the 50% inhibition concentration (IC₅₀) of the indirect competitive ELISA was 2.1 ng/mL and the limit of detection (LOD) of tilmicosin in milk was 2 μg/L.The recoveries of tilmicosin added in milk at 5,10 and 20 μg/L ranged from 79.2% to 90.1% with the coefficients of variation (CV) not higher than 9.0%.The indirect competitive ELISA would not react with other common macrolide drugs.The sensitivity of indirect competitive ELISA developed in the study complied to the maximum residue limit of tilmicosin set by China,and laid the foundation for the test kit of the rapid detection of tilmicosin in milk.     

酶联免疫法测定牛奶中氯霉素应注意的事项

本文用酶联免疫法对牛奶中氯霉素的残留进行检测分析,对使用氯霉素试剂盒和利用酶联免疫吸附试验方法测定牛奶中氯霉素含量时应注意的事项,分别从牛奶的储存和取样、试剂盒的选择、保存以及检测时的操作步骤等几个方面进行讨论,并且对在检测过程中遇到的具体问题在文章中进行讨论。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性支气管炎抗体的研究

本文建立了间接酶联免疫吸附试验(ELISA),用于检测鸡传染性支气管炎抗体。采用不连续蔗糖密度梯度离心法提纯鸡传染性支气管炎病毒作为包被抗原,确定了试验最佳工作条件:抗原包被浓度为2.6μg/ml,被检血清稀释度为1:128;酶标抗体工作浓度为1:6000。确定了血清样品阴、阳性的临界值为0.196。与美国KPL IBV-ELISA诊断盒相比较,结果表明建立的IBV-ELISA具有较高的敏感性和特异性。对北京、天津、河北、山东4个地区的12个非免疫鸡群的检测,结果表明阳性率高达74.3%。     

间接酶联免疫吸附试验诊断牛贝诺孢子虫病的试验研究

由贝诺孢子虫病牛皮肤组织包囊内分离滋养体制备抗原。然后,通过正交试验筛选影响ELISA敏感性的几种主要因素,建立了诊断牛贝诺孢子虫病的问接酶联免疫吸附试验方法。对已知阳性和阴性血清各30头份进行检测,其符合率均为100％;对疫区244头份血清进行检测,其阳性检出率为34.8％,面临床通过巩膜险查的阳性检出率仅为4.5％;对巴贝贝西虫、双芽巴西虫、瑟氏泰勒虫、环形泰勒虫、伊氏锥虫、肉孢子虫等感染牛血清68头份进行检测,除22头份肉孢子虫惑染牛血清中有5头份判为阳性外,其余均为阴性。初步尝试可以全血于纸片代替血清进行检测,其检测结果与血清一致。对ELISA检测结果以肉眼判定,与OD值测定结果间的误差不超过3.?％。     

牛奶中氟喹诺酮类药物残留同步快速检测的酶联免疫吸附法研究

建立同时快速检测牛奶中环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星六种氟喹诺酮类药物残留的酶联免疫吸附法。ELISA法的操作在20℃～25℃下进行,以50%抑制浓度、最低检测限反映方法的灵敏度,同时进行加标回收试验。结果表明,本文所建立的ELISA法的最低检测限为1.48μg/L,50%抑制浓度的范围在0.254～0.361μg/L;在环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星药物添加浓度为5、25、50μg/L时的回收率为84.58%～115.92%,批内变异系数均小于15.0%,批间变异系数均小于16.0%。本方法简便快捷,灵敏度、准确度和精密度高,适用于牛奶中FQs残留的同时快速检测。     

间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件

禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚尿囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板。将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ。确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗体的最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ,４℃冰箱过夜;用含０．５％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的磷酸盐缓冲液,３７℃封闭６０分钟;待检血清最佳稀释度为１８０～１６４０,作用６０分钟;酶标抗体作１２０００稀释,作用６０分钟。根据对５２份ＳＰＦ鸡血清的检测结果制定了判定标准。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性鼻炎抗体

本文应用聚苯乙烯塑料微量滴定板作为固液载体，辣根过氧物酶标记的羊抗鸡IgG为第二抗体，邻苯二胺为底物建立检测鸡传染性鼻炎抗体的间接酶联免疫吸附试验。对大庆市A、B、C三个种禽场的鸡群抽样采血检测，结果在被检的154份血清样品中，IC抗体阳性血样为35份，阳性检出率为22．8％。该方法具有快速、简便、敏感、特异等优点，适合于临床诊断和大批量样品检验。     

酶联免疫检测试剂盒应用于牛奶中四环素残留的测定

为了加强牛奶中四环素残留量的监控，以四环素-卵清白蛋白为包被抗原，四环素-牛血清白蛋白免疫的产生的抗血清为抗体，辣根过氧化物酶-羊抗兔IgG为酶标记物，研制了四环素快速酶联免疫分析试剂盒，在3．9-2000ng/mL四环素标准浓度范围内，呈线性相关，相关系数为0．9882，批内误差小于批间误差，但其变异系数均在10％以下。与土霉素、金霉素的交叉反应分别为24.31％、6．22％。该试剂盒具有快速、灵敏、准确的特点，适用于牛奶中四环素残留量的快速筛选测定。     

达氟沙星间接竞争ELISA检测方法的建立

将达氟沙星（danofloxacin, DFLX）与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联分别作为免疫原与包被原, 达氟沙星为竞争的半抗原，建立间接竞争ELISA检测方法。试验结果表明,理想的包被抗原浓度为1.25 μg/L, 多抗(DFLX-PcAb)工作浓度为1∶10000,酶标二抗的工作浓度为1∶4000,最适检测范围为0.1～10 ng/L,最低检测限为0.2 ng/L, 批内和批间变异系数分别为3.81%和6.25%。得到回归方程y=0.7975-0.125x（R2=0.989）和标准曲线，从而建立了DFLX的快速检测残留的间接竞争酶联免疫吸附试验（ci-ELISA）。     

沙拉沙星间接竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

为建立动物源性食品中沙拉沙星（SAR）残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞争化学发光酶联免疫（ic-CLEIA）检测方法,并通过灵敏度、精密度、交叉反应率、添加回收试验对该方法进行评价。紫外扫描结果显示,完全免疫原偶联成功;制备的SAR单克隆抗体效价达1：4×10⁶;包被原浓度为0.25 μg/mL,抗体稀释比为1：750 000,4 ℃包被过夜,5%脱脂乳封闭,竞争孵育1 h,酶标二抗稀释比为1：10 000,孵育1 h为ic-CLEIA最佳反应条件;建立的ic-CLEIA方法标准曲线呈线性,线性范围为0.0625~10 ng/mL,R²=0.995,灵敏度IC₅₀为1.45 ng/mL;其平均批内和批间变异系数均<10%;除与二氟沙星的交叉反应率达到98.08%以外,与其他氟喹诺酮类药物的交叉反应率均<8%,与其他非氟喹诺酮类药物均无交叉反应;SAR标准溶液的最低检测限（LOD）为0.32 ng/mL,SAR在鸡肉样品中的LOD为0.46 μg/kg;添加回收率在88.3%~106.7%范围内,其变异系数≤12.2%。结果表明,本研究建立的ic-CLEIA方法检测速度快、灵敏度高,适用于动物源性食品中SAR残留的大量检测,为SAR残留检测提供了新的方法。     

基于免疫磁珠净化间接竞争酶联免疫吸附试验检测氟喹诺酮类药物

本研究旨在建立一种基于免疫磁珠进行分离、富集和净化前处理,检测鸡肉、鸡肝和鱼肉中氟喹诺酮类药物残留的间接竞争酶免疫吸附试验（indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA）的研究方法。通过对合成免疫磁珠及免疫磁珠净化过程中单克隆抗体添加量、偶联时间、缓冲液pH、抗原添加量、抗原捕获时间、温度及包被条件等进行优化,初步建立了基于免疫磁珠净化的icELISA检测方法。结果显示：1）在1 mg的磁珠中,沙拉沙星（sarafloxacin,SAR）单克隆抗体最佳偶联量为15 μg,偶联时间60 min,pH为4.4;2）最佳抗原添加量为1 ng·mL^-1,捕获时间40 min,缓冲液为0.01 mol·L^-1 PBS,IC₅₀为0.73 ng·mL^-1,线性范围为1.0~3.2 ng·mL^-1;3）氟喹诺酮类药物在鸡肉、鸡肝、鱼肉的检测限均不超过1.33、2.17、2.31 μg·kg^-1,回收率为76.83%~98.70%,批内变异系数批间变异系数均不超过15%,经验证,鸡肉样本检测结果与高效液相色谱法（HPLC）结果一致。结果表明,与传统仪器检测方法相比,该方法提高了检测氟喹诺酮类药物的简便性、选择性以及检测效率,为氟喹诺酮类药物的残留检测提供了新思路。     

饲料中沙丁胺醇酶联免疫前处理方法的探究

为探讨酶联免疫法(ELISA)检测饲料中沙丁胺醇(salbutamol,SAL)的前处理方法,试验对提取液的pH、离子强度、有机溶剂浓度及样品稀释倍数等条件进行了考察,选取最适宜的提取液条件对2种不同类型的饲料样本进行提取,用ELISA测定样品中沙丁胺醇的残留量。结果表明,沙丁胺醇标准曲线的IC₅₀值为0.606 ng/mL,线性范围为0.221～1.658 ng/mL,R²=0.9998,提取液的pH为7.5,PBS缓冲液最优浓度为0.06 mol/L,稀释倍数为10倍,2种不同类型的饲料样本的检测限(LOD)为5.0 ng/mL。当沙丁胺醇的添加浓度为5、10 μg/kg时,该方法的添加回收率为77%～110%,变异系数<8%。     

ELISA测定乳中磺胺甲基嘧啶残留

以牛血清白蛋白（ＢＳＡ）为载体,合成２种不同的物质的量的比值（约１∶１３和１∶４２）的磺胺甲基嘧啶抗原,并比较了两者的免疫原性;以卵白蛋白（ＯＡ）为载体,合成１种包被抗原;用辣根过氧化物酶标记羊抗兔ＩｇＧ,工作浓度１∶１０００;建立的乳中磺胺甲基嘧啶残留ＥＬＩＳＡ测定法,抗原亲和常数分别为１．２８×１０７（１∶４２）和３．２１×１０７（１∶１３）,磺胺甲基嘧啶检测质量浓度为５～２２０μｇ／Ｌ（１．８７×１０－８～８．２×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）,检测限为２．４μｇ／Ｌ,回收率为８８％～１１８％,与磺胺二甲基嘧啶和磺胺噻唑交叉率分别为６．０％和０．８４％,与磺胺二甲氧嘧啶和磺胺脒无交叉反应     

酶联免疫分析技术及其在进出口动物产品兽药残留检测中的应用

进出口动物产品兽药残留对食品安全的影响越来越明显,日益成为阻碍国际间贸易的重要因素,这对食品兽药残留的快速检测提出了高要求。作者主要介绍酶联免疫分析技术的基本原理、分类和技术要点,并对其在动物产品兽药残留检测中的应用、问题和前景进行综述。     

猪表皮生长因子间接竞争ELISA检测方法的建立

为建立酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测猪血清或尿液中猪表皮生长因子(porcinee pidermal growth factor,pEGF)的含量,以pEGF为包被原,人表皮生长因子(hu-mane pidermal growth factor,hEGF)为竞争抗原,两者与一定量的抗pEGF多抗反应。结果表明,理想的包被抗原浓度为0.625μg/mL,抗pEGF工作浓度为1∶64000,酶标二抗工作浓度为1∶20000,可检测的最适范围为0.4ng/mL~32ng/mL,最低检测限为1ng/mL,批内和批间变异系数分别为3.50%和5.22%。得到回归方程y=-34.53x 76.06(R2=0.993)和标准曲线,从而建立了快速定量测定pEGF含量的酶联免疫吸附试验方法。     

建立水产品中己烯雌酚残留ELISA检测方法

本试验利用己烯雌酚(DES)单克隆抗体,通过优化反应条件,加标回收试验,确定ELISA检测方法相关参数,建立了己烯雌酚残留的酶联免疫吸附(ELISA)检测法。试验结果显示,包被抗原最佳浓度为2μg/mL,DES单克隆抗体最佳稀释倍数为1∶3×104;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9956,IC50=1.103 ng/mL,最适检测范围为0.125~128 ng/mL,检测敏感度为0.077 ng/g;批内和批间变异分别为6.14%和7.48%;鳝鱼肌肉组织的加标回收率为77.6%~94.6%;特异性试验结果表明,该单抗与己烯雌酚单羧丙基醚交叉反应率为112.7%,与其它水产禁用药物交叉反应率0.1%。