西农萨能奶山羊CSN1S2基因多态与产奶量、体尺指标的相关分析

利用PCR2RFLP技术对69只西农萨能奶山羊的CSN1S2基因进行多态性分析。扩增产物为310bp的CSN1S2F基因片段,被Alw26I限制性内切酶消化后表现多态性。F等位基因为310bp,N等位基因为179和131bp,相应地,FF基因型为310bp,NF基因型为310,179和131bp,NN基因型为179和131bp。在该群体中,F等位基因频率为010870,N等位基因频率为019130,处于Hardy2Weinberg平衡状态。将西农萨能奶山羊CSN1S2F基因座不同基因型与平均产奶量进行相关分析,结果表明:CSN1S2的不同基因型对平均产奶量有显著影响,NN基因型个体产奶量最高,FF基因型个体产奶量最低,且FF基因型个体平均产奶量显著低于NN基因型个体(P<0105)。将西农萨能奶山羊CSN1S2F基因座不同基因型与体尺指标进行相关分析,结果表明:在初生重和体高指标上,NF基因型个体显著优于NN基因型个体(P<0105);在体斜长和管围指标上,NF基因型个体略优于NN基因型个体,但差异不显著(P>0105);在成年体重和胸围指标上,不同的基因型个体间无差异。     

奶山羊AGPAT6基因多态性与生长性状的关联分析

利用PCR-RFLP技术对549只西农萨能和关中奶山羊群的AGPAT6基因遗传多态性与生长性状(体高、体长和胸围)的相关性进行了研究。结果表明AGPAT6基因存在4个SNPs多态:P1、P2、P4与P10位点分别位于5'UTR(g.152G>C)、内含子2(g.8124G>A)、外显子4(g.9263C>G)和3'UTR(g.16436G>A)。经关联分析,P2、P4和P10三位点在西农萨能奶山羊和关中奶山羊品种中都属于中度多态,4个SNPs的不同基因型对两个奶山羊品种的生长性状影响均不显著(P>0.05)。     

奶山羊AGPAT6基因多态性与生长性状的关联分析

利用限制性片段长度多态性聚合酶链反应技术对549只西农萨能和关中奶山羊群的AGPAT6基因遗传多态性与生长性状(体高、体长和胸围)的相关性进行研究.结果表明AGPAT6基因存在4个单核苷酸多态性:P1、P2、P4与P10位点分别位于5′UTR (g.152G＞C)、内含子2(g.8124G＞A)、外显子4(g.9263C＞G)和3′UTR(g.16436G＞A).经关联分析,P2、P4和P10三位点在西农萨能奶山羊和关中奶山羊品种中都属于中度多态,4个SNPs的不同基因型对两个奶山羊品种的生长性状影响均不显著(P＞0.05).     

奶山羊AGPAT6基因多态性与产乳性状的关联分析

利用PCR-RFLP技术对549只西农萨能奶山羊和关中奶山羊的AGPAT6基因多态性与产乳性状的相关性进行了研究。结果表明,AGPAT6基因在P1、P2、P4与P10位点发现4个SNPs:5'UTR(g.152GC)、内含子2(g.8124GA)、外显子4(g.9263CG)和3'UTR(g.16436GA)。在P4位点,西农萨能羊GG基因型个体其产奶量显著高于CC型个体(P0.05),在两个奶山羊品种的奶成分性状中,GG基因型个体的乳脂率显著高于CC型个体(P0.05),GG型个体的乳蛋白含量极显著高于CC型个体(P0.01),表明AGPAT6基因第4外显子不同基因型与山羊奶中的乳脂率和乳蛋白含量显著相关。因此,AGPAT6基因可以用于奶山羊产奶性状选育的重要候选基因。     

西农萨能奶山羊乳脂肪酸性状影响因素分析

本研究旨在解析母羊出生年度、季节、胎次、泌乳阶段4个固定效应对西农萨能奶山羊乳脂肪酸性状的影响。选择2010—2017年出生的104只泌乳奶山羊,采用气相色谱仪测定实验个体羊奶中37种不同乳脂肪酸含量,采用固定效应模型,通过SAS 9.4软件的GLM过程进行统计分析。结果表明:西农萨能奶山羊乳脂肪酸以C16:0、C18:1n9c、C14:0、C18:0和C10:0为主,其中含量最高的为C16:0,达26.65%;饱和脂肪酸:不饱和脂肪酸为2.27:1,其中,单不饱和脂肪酸:多不饱和脂肪酸为15.52:1;泌乳阶段效应对乳脂肪酸含量影响显著,年度、季节、胎次效应对于乳脂肪酸组分影响较小。研究结果显示,泌乳阶段是影响西农萨能奶山羊乳脂肪酸性状的主要非遗传因素之一,泌乳早期的乳品质更优。     

山羊奶理化性状研究——Ⅳ.末乳主要理化性状及其变化和常乳中氨基酸组成与含量

本文分析研究了西农萨能奶山羊、英国萨能奶山羊和关中奶山羊末乳中脂肪、乳糖、蛋白质、总干物质、灰分及钙和磷的含量及其变化,同时也对3个被试品种羊奶中氨基酸含量进行了测定。研究结果表明末乳中 pH 值、灰分和蛋白质含量达到整个泌乳期最高水平,而酸度和乳糖含量则较低.蛋白质含量高于脂肪含量。3个品种间氨基酸含量基本相近。山羊奶里酪蛋白中谷氨酸与组氨酸的比值明显高于牛奶.这是山羊奶酪蛋白的特点之一。山羊奶中游离氨基酸含量明显高于牛奶。     

关中奶山羊CSN1S1基因克隆、生物信息学及组织表达谱分析

【目的】 通过分析关中奶山羊αs1-酪蛋白（alpha-s1 casein，CSN1S1）基因组织表达谱及其生物信息学功能，初步探究CSN1S1基因在奶山羊乳成分合成中发挥的作用。【方法】 以关中奶山羊为研究对象，利用PCR扩增并克隆CSNIS1-1和CSN1S1-2 2个突变形态，并利用ProtParam、NetPhos、SingalP 4.1 Server、NPS和Phyre2等多种生物信息软件和在线工具对CSN1S1基因及其突变形态的蛋白质结构、理化性质、磷酸化位点等进行分析，通过实时荧光定量PCR检测CSNIS1-1和CSN1S1-2在关中奶山羊肝脏、脾脏、乳腺、肾脏、子宫、输卵管6个组织中的相对表达量。【结果】 关中奶山羊乳腺上皮细胞中存在CSN1S1-1和CSN1S1-2 2种突变形态。对测序结果比对显示，CSN1S1-1存在3个碱基的突变，CSN1S1-2不仅存在3个碱基的突变，还存在6个碱基的缺失。CSN1S1-1与CSN1S1蛋白相似性为99.07%，CSN1S1-2与CSN1S1蛋白相似性为97.20%。蛋白理化性质分析显示，CSN1S1-1中碱基的突变导致第31位亮氨酸变成脯氨酸、第92位谷氨酰胺变成谷氨酸；CSN1S1-2除上述改变之外，第83位由丝氨酸变成半胱氨酸、第84位由谷氨酸变成谷氨酰胺，还存在第81和82位2个丝氨酸的缺失。实时荧光定量PCR结果显示，CSN1S1-1和CSN1S1-2在关中奶山羊各组织中相对表达趋势基本相同，其中在乳腺、子宫、输卵管中相对表达量较高，在肝脏、脾脏和肾脏中基本不表达，在子宫中CSN1S1-2的表达量显著高于CSN1S1-1（P<0.05）。【结论】 关中奶山羊乳腺上皮细胞中存在CSN1S1-1和CSN1S1-2 2种突变形态，且2种突变形态与CSN1S1的蛋白相似性均达到97%以上。CSN1S1-1在蛋白结构上与CSN1S1已有明显区别，而CSN1S1-2中6个碱基的缺失是导致氨基酸改变、磷酸化位点缺失与移位的直接原因。CSN1S1-2在子宫中表达显著高于CSN1S1-1，其可能在子宫中发挥潜在功能，还有待进一步探索。     

奶山羊LF基因CDS区克隆、生物信息学分析及其乳中含量测定

为了解奶山羊乳铁蛋白(lactoferrin,LF)基因的生物学特性,分析萨能奶山羊不同泌乳时期乳中LF含量的变化,试验扩增了萨能奶山羊乳腺上皮细胞LF基因CDS区序列,运用生物信息学软件对奶山羊LF基因的核苷酸序列特性、编码蛋白的理化性质、保守结构域及高级结构、与其他物种的同源性等进行了分析,并对奶山羊乳样品进行了ELISA测定。结果表明,萨能奶山羊LF基因长为2 127bp,编码708个氨基酸,编码蛋白质的分子式为C3405H5365N949O1024S43,是一个不稳定的亲水性蛋白,二级结构包含α-螺旋、延伸链和无规则卷曲,具有与转铁蛋白相似的折叠方式;羊乳铁蛋白氨基酸残基组成单链,形成77.359ku具有高级结构的糖蛋白;通过比对发现,牛科LF氨基酸序列的同源性较高(92%),与其他物种的差异较大,其中萨能奶山羊与山羊的同源性最高(99%),且处于进化树的同一个分支。ELISA检测结果发现,奶山羊初乳中LF含量最高,常乳中的含量较低且较为稳定。研究结果初步表明了萨能奶山羊LF序列和结构域特点,揭示了萨能奶山羊乳中LF含量的变化规律,为LF功能研究、产品研发等提供参考。     

影响西农萨能奶山羊产奶性状的非遗传因素分析

本试验旨在探究母羊出生年度、季节、胎次、泌乳阶段4个固定效应对西农萨能奶山羊产奶性状的影响。以西北农林科技大学萨能羊原种场2006-2018年的645只泌乳母羊为研究对象,每月采集乳样1次,采样日早、晚各采集1次,将两次乳样等比例混合后,采用乳成分分析仪测定乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、总脂固形物、非脂固形物、密度、冰点和酸度共8个指标,结合羊场产奶量记录,采用固定效应模型,通过SAS 9.4软件进行表型的描述性统计分析,再采用GLM模型进行固定效应对产奶性状的影响分析。结果表明,西农萨能奶山羊平均300 d产奶量为507.67 kg,乳脂率为3.58%,乳蛋白率为3.20%,乳糖率为4.19%;总固形物含量为12.21%,非脂固形物含量为8.46%;出生年度、胎次对产奶量影响极显著（P<0.01）,出生季节对产奶量影响不显著（P>0.05）;泌乳阶段、出生年度对乳脂率等8个乳成分性状均有极显著影响（P<0.01）,胎次对除乳蛋白率和总固形物的其他6个乳成分指标均存在极显著影响（P<0.01）。综合以上试验结果,胎次及泌乳阶段是影响西农萨能奶山羊产奶性状的两种主要非遗传因素,第3、4胎母羊产奶性能最佳,泌乳早期的乳品质更优,揭示了对种群进行良种选育工作和羊饲养管理的重要性,也为后期进行奶山羊经济性状遗传评估和群体遗传改良提供理论基础。     

奶山羊LF基因CDS区克隆、生物信息学分析及其乳中含量测定

为了解奶山羊乳铁蛋白（lactoferrin,LF）基因的生物学特性,分析萨能奶山羊不同泌乳时期乳中LF含量的变化,试验扩增了萨能奶山羊乳腺上皮细胞LF基因CDS区序列,运用生物信息学软件对奶山羊LF基因的核苷酸序列特性、编码蛋白的理化性质、保守结构域及高级结构、与其他物种的同源性等进行了分析,并对奶山羊乳样品进行了ELISA测定。结果表明,萨能奶山羊LF基因长为2 127 bp,编码708个氨基酸,编码蛋白质的分子式为C₃₄₀₅H₅₃₆₅N₉₄₉O₁₀₂₄S₄₃,是一个不稳定的亲水性蛋白,二级结构包含α-螺旋、延伸链和无规则卷曲,具有与转铁蛋白相似的折叠方式;羊乳铁蛋白氨基酸残基组成单链,形成77.359 ku具有高级结构的糖蛋白;通过比对发现,牛科LF氨基酸序列的同源性较高（>92%）,与其他物种的差异较大,其中萨能奶山羊与山羊的同源性最高（99%）,且处于进化树的同一个分支。ELISA检测结果发现,奶山羊初乳中LF含量最高,常乳中的含量较低且较为稳定。研究结果初步表明了萨能奶山羊LF序列和结构域特点,揭示了萨能奶山羊乳中LF含量的变化规律,为LF功能研究、产品研发等提供参考。     

山羊Zfy基因克隆分析及其敲除载体构建

旨在对西农萨能奶山羊Zfy基因进行克隆和生物信息学分析,并利用CRISPR/Cas9技术成功获得敲除Zfy基因的奶山羊成纤维细胞株,为进一步探索Zfy基因功能及性别调控提供基础数据.本研究以健康的西农萨能奶山羊为对象,采集3只3月龄公山羊睾丸组织并提取总RNA.根据NCBI中预测的山羊Zfy基因mRNA序列信息(Gen...     

西农萨能奶山羊SERPINA1基因克隆、生物信息学及组织表达分析

本研究旨在克隆西农萨能奶山羊SERPINA1基因的CDS区,采用生物软件和在线预测工具进行生物信息学分析,通过实时荧光定量PCR技术检测SERPINA1基因在西农萨能奶山羊各组织间mRNA的表达水平。根据GenBank中山羊SERPINA1基因CDS区序列（登录号：XM_018066209.1）,利用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物,RT-PCR扩增目的基因,构建原核表达载体测序后对序列进行生物信息学分析;采集西农萨能奶山羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、乳腺、肾脏、肌肉、瘤胃和小肠组织,提取组织RNA,反转录为cDNA模板,设计特异性定量引物,进行实时荧光定量PCR,检测SERPINA1基因在不同组织中的表达差异。结果显示,西农萨能奶山羊SERPINA1基因CDS区全长1 326 bp,编码441个氨基酸;同源性比对分析显示,西农萨能奶山羊与山羊、绵羊、牛和小鼠SERPINA1基因核苷酸序列同源性分别为100%、98.6%、95.7%和71.6%,与山羊亲缘关系最近,其次是绵羊。SERPINA1蛋白分子质量为48.71 ku,等电点为5.71,为跨膜亲水蛋白;SERPINA1氨基酸序列分别有62个磷酸化位点,3个跨膜区结构。组织表达分析显示,SERPINA1基因在西农萨能奶山羊肝脏组织中显著高表达（P<0.05）,其次是乳腺组织,在肺脏组织中表达量最低。研究结果为进一步探究SERPINA1基因在奶山羊乳蛋白合成代谢中的作用提供理论依据。     

山羊LIM同源框基因LHX3分子遗传特征研究

利用PCR-RFLP、Forced-PCR-RFLP、DNA测序法研究中国西农萨能奶山羊(Sa)、关中奶山羊(GZ)和内蒙古白绒山羊(IMWC)3个品种LHX3基因的分子遗传特性.结果表明,在第2内含子452 nt处存在T＞C的突变,第6外显子352 nt处存在T＞C的突变.在Hinf Ⅰ位点,GZ、Sa和IMWC的等位基因T/C频率分别为0.492 9/0.507 1,0.376 3/0.623 7,0.698 4/0.301 6;在Msp Ⅰ位点,GZ、Sa和IMWC的等位基因T/C频率分别为0.492 9/0.507 1,0.633 8/0.366 2,0.267 2/0.732 8;以上位点在不同品种中的多态信息含量(PIC)在0.314 9～0.374 9之间.独立X2分析表明,Hinf Ⅰ和Msp Ⅰ位点的基因型频率分布在不同山羊品种间均存在极显著差异,暗示品种因素对这些基因型的分布具有显著影响.     

努比奶山羊、萨能奶山羊品种间羊乳品质比较研究

本文对云南培育的努比山羊黑色品系(努比奶山羊)开展DHI检测,并与萨能奶山羊乳品质进行对比,结果表明:努比奶山羊乳脂肪含量为(6.35±2.26)%,乳蛋白含量为(4.19±1.17)%,萨能奶山羊乳脂肪含量为(4.81±1.77)%、乳蛋白含量为(3.44±1.03)%,努比奶山羊乳与萨能奶山羊乳营养成分(乳脂肪含量、乳蛋白含量、乳糖含量、总固体含量、非脂物含量、尿素氮含量)之间差异极显著(P0.01),体细胞之间差异不显著(P0.05)。努比奶山羊乳与萨能奶山羊乳相比,乳脂肪含量高32.0%,乳蛋白含量高21.8%,乳糖含量高7.1%,总固体含量高23.8%,非脂物含量高14.8%。努比奶山羊乳汁稠密,营养价值高,具有奶肉生产的双重效益,将有希望培育成为云南高原地区特色奶源之一。     

西农萨能奶山羊SERPINA1基因克隆、生物信息学及组织表达分析

本研究旨在克隆西农萨能奶山羊SERPINA1基因的CDS区,采用生物软件和在线预测工具进行生物信息学分析,通过实时荧光定量PCR技术检测SERPINA1基因在西农萨能奶山羊各组织间mRNA的表达水平。根据GenBank中山羊SERPINA1基因CDS区序列(登录号:XM_018066209.1),利用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物,RT-PCR扩增目的基因,构建原核表达载体测序后对序列进行生物信息学分析;采集西农萨能奶山羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、乳腺、肾脏、肌肉、瘤胃和小肠组织,提取组织RNA,反转录为cDNA模板,设计特异性定量引物,进行实时荧光定量PCR,检测SERPINA1基因在不同组织中的表达差异。结果显示,西农萨能奶山羊SERPINA1基因CDS区全长1 326 bp,编码441个氨基酸;同源性比对分析显示,西农萨能奶山羊与山羊、绵羊、牛和小鼠SERPINA1基因核苷酸序列同源性分别为100%、98.6%、95.7%和71.6%,与山羊亲缘关系最近,其次是绵羊。SERPINA1蛋白分子质量为48.71 ku,等电点为5.71,为跨膜亲水蛋白;SERPINA1氨基酸序列分别有62个磷酸化位点,3个跨膜区结构。组织表达分析显示,SERPINA1基因在西农萨能奶山羊肝脏组织中显著高表达(P0.05),其次是乳腺组织,在肺脏组织中表达量最低。研究结果为进一步探究SERPINA1基因在奶山羊乳蛋白合成代谢中的作用提供理论依据。     

奶山羊weaver基因遗传变异及其与泌乳性状的关联分析

以PCR-RFLP和DNA测序技术研究了708只中国奶山羊的weaver基因多态性.结果显示:外显子4位点和3-UTR存在4处多态性,即G5896A、T6256A、C99045T和C99116T,分别由Mlu Ⅰ,AsuⅡ、Taq Ⅰ和Hha ⅠPCR-RFLP检测.与泌乳性状关联分析表明:西农萨能奶山羊的Mlu Ⅰ、AsuⅡ和Hha Ⅰ位点的3种基因型对乳脂、乳蛋白质、乳搪、非脂乳固体和总乳固体影响均不显著(P＞0.05),其中在第2胎,Asu Ⅱ位点AA基因型的泌乳量显著高于AT和TT基因的(P＜0.05).西农萨能奶山羊的Taq Ⅰ位点的TT型个体的乳蛋白质和非脂乳固体显著高于CC和TT型个体的(P＜0.05),其中在第1胎,TT和CT基因型奶山羊的泌乳量显著高于CC基因的(P＜0.05).     

奶山羊饲养管理几要点

1选择优良品种饲养奶山羊,品种选择很关键,只有选择一个好的品种,才可能产生好的经济效益。目前,奶山羊的饲养品种和种群有50多个,世界上比较著名的品种有瑞士的萨能奶山羊、吐根堡奶山羊,法国的阿尔卑奶山羊、德国的改森奶山羊及我国的西农萨能奶山羊、关中奶山羊、崂山奶山羊     

SCD基因在两个奶山羊品种中的酶切多态性分析

硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)是酯酰去饱和酶超家族的成员,是控制脂肪组织和乳腺中的饱和脂肪酸向不饱和脂肪酸转化的舍铁关键酶.然而,目前少见关于山羊SCD基因遗传变异方面的研究.在对两个奶山羊品种(西农萨能和关中奶山羊)的708个个体的研究中发现了SCD基因的3个碱基突变,其中一个为错义突变,并且由此构建了单倍型A、B和C,共发现了6种基因型.通过关联分析表明:CC基因型个体的体高和体长明显大于BC基因型个体(P＜0.05).     

西农莎能奶山羊和波尔山羊GDF9基因多态性与产羔数的相关分析

为了研究西农萨能奶山羊和波尔山羊生长分化因子9(GDF9)基因遗传多态性及其与产羔数和生长体重的相关性。根据绵羊GDF9基因序列设计4对引物,采用PCR-SSCP技术检测GDF9基因的多态性,同时用最小二乘法研究了其多态性与产羔数和生长体重的关系。所研究的西农萨能奶山羊群体和波尔山羊群体P1扩增片段存在多态性,分别定义为AA、AG和GG3种基因型;P2、P3和P4扩增片段均不存在多态性,只出现一种带型。通过测序发现:GG型与AA型相比在外显子2的792 bp处有1个G→A的单碱基突变,结果导致第396位氨基酸由缬氨酸变为异亮氨酸。在西农莎能奶山羊群体中,AA基因型产羔数最小二乘均值均极显著高于AG基因型和GG基因型;AG基因型显著高于GG基因型。此外,在西农莎能奶山羊中还发现AA基因型的个体各个生长阶段的体重和GG型和AG型的相比差异均不显著。在波尔山羊群体中,AA基因型产羔数最小二乘均值均极显著高于AG基因型和GG基因型,AG基因型的高于GG型,但没达到显著水平。结果表明,GDF9基因对西农莎能奶山羊和波尔山羊的产羔数均有显著影响,因此认为GDF9基因外显子2第792 bp处G→A的突变可作为西农莎能奶山羊和波尔山羊多胎性状的有效分子标记。