奶牛产后急性子宫内膜炎病原的分离与鉴定

通过研究奶牛产后急性子宫内膜炎致病微生物组成,揭示该病主要病原并为临床治疗提供依据。以产后6～10 d急性化脓性卡他性子宫内膜炎患牛80头为研究对象,对子宫内容物进行细菌和真菌的分离鉴定。共分离到195株细菌及真菌,其中35.4%具有溶血性,50.8%对试验动物有致病性;大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分离率较高,为83.75%和62.5%,其次是奇异变形杆菌(36.25%)、白色念珠菌(20%)和肺炎克雷伯氏菌(17.5%)。该病的90%为混合感染,细菌混合感染(70%)主要由大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和奇异变形杆菌组成;真菌与细菌混合感染占20%,均有白色念珠菌存在;细菌单一感染占10%。结果表明,奶牛产后急性子宫内膜炎主要致病菌是大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、奇异变形杆菌,20%受试牛存在着以白色念珠菌为主的真菌感染。     

2016-2017年广西牛呼吸道疾病综合征病原学的调查研究

为了解广西地区牛呼吸道疾病综合征（bovine respiratory disease complex，BRDC）的病原情况，本研究通过RT-PCR/PCR方法和细菌分离鉴定方法对2016-2017年送检的117份患有呼吸道疾病的病料进行病原诊断，并对主要分离菌进行药物敏感性试验。结果显示，RT-PCR/PCR方法检测的肺炎克雷伯氏菌、牛支原体、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、溶血性曼氏杆菌的检出率分别为41.0%（48/117）、28.2%（33/117）、20.5%（24/117）、15.4%（18/117）、12.8%（15/117）、5.1%（6/117），而细菌分离鉴定方法检测的肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌、牛支原体、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌的检出率分别为41.0%（48/117）、33.3%（39/117）、17.1%（20/117）、7.7%（9/117）、2.6%（3/117）、2.6%（3/117），牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒和牛病毒性腹泻病毒未检出，且PCR方法更敏感。药敏试验结果显示，20株牛支原体对β-内酰胺类、磺胺类、多肽类药物的耐药率为90.0%~100.0%，对喹诺酮类、庆大霉素、阿米卡星和卡那霉素敏感（耐药率为在10.0%~25.0%）；30株大肠杆菌和30株肺炎克雷伯氏菌除了对头孢噻肟、头孢曲松和头孢他啶敏感外（耐药率分别为13.3%~20.0%、10.0%~30.0%），对其他15种药物均具有耐药性（耐药率分别为50.0%~100.0%、40.0%~100.0%）。综上所述，广西地区牛呼吸道疾病主要以牛支原体、大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌引发的混合感染为主，且分离菌均已出现不同程度的耐药性。     

南宁奶水牛乳房炎病原鉴定及分析

为了解南宁地区的奶水牛乳房炎致病菌感染情况和耐药情况，本研究通过采用细菌分离的方法和PCR的方法对15份奶样进行了肺炎克雷伯氏菌、沙门氏菌、多杀巴氏杆菌、牛支原体、溶血曼氏杆菌、化脓性隐秘杆菌和大肠杆菌的病原检测，并对菌株进行药物敏感性试验。结果显示，从15份样品中分离/扩增出15株肺炎克雷伯氏菌和1株大肠杆菌。药敏试验结果显示肺炎克雷伯氏菌对红霉素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星等5种药物低敏，对其余19种药物耐药。大肠杆菌对环丙沙星、左氟沙星等8种药物高敏，对大观霉素、诺氟沙星等7种药物中敏，对青霉素G等7种药物低敏，对万古霉素和四环素2种药物耐药。结果表明，采用细菌分离方法和PCR扩增法鉴定奶水牛乳房炎主要致病菌，两者的符合率为100%,这7种水牛乳房炎主要病原菌的PCR扩增法可作为快速诊断奶水牛乳房炎的手段。该场发生乳房炎的主要致病性病原是肺炎克雷伯氏菌，同时，分离株存在严重的耐药性，需规范、合理用药，减少抗生素的使用，并结合奶牛场实际情况采取预防及用药措施，有效遏制多重耐药性的产生，为奶水牛乳房炎的防治提供参考依据。     

河南驻马店地区猪源肺炎克雷伯氏菌分离菌株生物学特性

为了分析驻马店地区猪源肺炎克雷伯氏菌分离菌株生物学特性,从驻马店地区不同养殖场中采集患呼吸道疾病猪肺脏、鼻拭子等病料组织74份中分离得到了43株肺炎克雷伯氏菌。采用人工感染小鼠致病性试验、PCR方法和K-B药敏纸片分别检测49株肺炎克雷伯氏菌的致病性、血清型及耐药性。结果显示,30株肺炎克雷伯氏菌对小鼠具有很强的致病性;43株分离菌株以K5、K20为主要流行血清型,分别占分离菌株的37.2%、27.9%;43株分离菌株对氨苄西林、阿莫西林、大观霉素等7种药物耐药性较高,耐药率在51.2%以上,对其他药物的耐药率在18.6%~234.9%之间,且呈现多重耐药性,耐10、9种药物分离菌株最多,分别占分离菌株的25.6%、27.9%。本试验为该地区猪源肺炎克雷伯氏菌病的防治提供理论基础。     

雏鸡早期大批死亡病例中的细菌检验

1999-2002年间,从14例雏鸡发生大批死亡病例中,分离到大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、黏质沙雷氏菌、美国爱文氏菌、蜂房哈夫尼亚氏菌、格高菲氏菌、奇异变形杆菌和肺炎克雷伯氏9种细菌,其中多种细菌未见或鲜见报道,大部分分离株经动物试验证实具有很强的致病性。它们其中一种或多种混合感染,引起雏鸡败血症,使雏鸡在短时间内大批死亡。现将各分离菌株的致病情况、相关特性和药敏结果报道如下。1　各分离菌株的情况1.1　大肠杆菌　14宗病例中有7宗分离到了大肠杆菌,其中4宗为单独感染,3宗为与其他菌株混合感染。1.1.1　培养特性　在营养…     

四川凉山地区奶牛乳房炎主要病原菌分离鉴定及药敏情况分析

通过开展凉山地区奶牛乳房炎主要病原菌的分离鉴定和药敏情况试验,为指导凉山地区奶牛场临床合理使用抗生素以及提高抗生素的防治效果提供理论指导。通过采样、增菌培养、细菌鉴定、药敏试验、数据统计分析等方法,结果发现193 份患有乳房炎的乳样中有134 份分离出12 种病原菌,其中65 份检出两种及以上菌,占检出数的48.50%﹔共分离出234 株不重复菌株。分离率居前五位为：葡萄球菌63 株（26.9%）、大肠杆菌56 株（23.8%）、肺炎克雷伯菌42 株（17.9%）、肠球菌24 株（10.3%）、链球菌13 株（5.6%）。对本试验分离到的大肠杆菌、葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等12 种菌中的10 种细菌药敏试验结果显示,不论是革兰氏阳性菌还是革兰氏阴性菌对试验选取的17 种常见抗生素均表现不同程度的耐药,有部分菌株还表现严重的多重耐药,有些菌株对部分药物耐药率达100.00%。     

家养观赏地图鱼肺炎克雷伯氏菌、维氏气单胞菌与黏质沙雷氏菌的分离鉴定及耐药性分析

本试验旨在通过细菌分离鉴定,明确家养观赏地图鱼的死因,筛选敏感药物。采用常规方法分离纯化细菌后,进行细菌形态学观察,并通过小白鼠致病性试验、细菌主要生化鉴定、16SrDNA序列测定分析、药敏试验及耐药基因检测等方法对分离的细菌进行鉴定及耐药分析。分离出3株革兰氏阴性短杆菌,根据细菌形态特征及理化特性,结合16SrDNA序列测定与系统发育分析结果,判定其分别为肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)和黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens),其中肺炎克雷伯氏菌具有较强致病性。3株细菌均对洛美沙星、氧氟沙星、阿米卡星、卡那霉素敏感,对阿莫西林、氟苯尼考、克林霉素、甲硝唑等具有较强耐药性。结果表明,肺炎克雷伯氏菌、维氏气单胞菌、黏质沙雷氏菌的混合感染是家养观赏地图鱼的死亡原因。     

兔源多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌的分离鉴定与药敏试验

为了确定引起兔呼吸困难、死亡的病原,本研究对河南省某兔场发病病例剖检,采集8份有呼吸道症状的病兔样品对病原进行分离培养,通过生化鉴定、16S rRNA PCR鉴定及小鼠致病性试验确定病原,并采用药敏试验分析其耐药性。结果显示,分离得到8株两端钝圆、卵圆形的革兰阴性球杆菌及8株短粗、卵圆形的革兰阴性菌;生化鉴定结果显示分离的细菌1和细菌2分别符合多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌的生化特性,分别命名为HN-W01和LY-W05株;扩增的分离菌16S rRNA基因序列片段大小分别为643和1 494 bp,与多杀性巴氏杆菌AY604234.1和肺炎克雷伯菌MK824895.1的同源性分别为99.32%和99.93%,表明该兔场患病兔为多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染。致病性试验显示,分离出的多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌对小鼠均有致病力,可使小鼠死亡。经药敏测定发现分离得到的多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌同时对多粘菌素B和氯霉素敏感,对其他药物有不同程度的耐药性。本研究为家兔养殖过程中多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染的分离鉴定以及临床科学用药提供了参考依据。     

鲤鱼肺炎克雷伯氏菌分离与鉴定

初步了解肺炎克雷伯氏菌在鲤鱼鱼体中的发病机制并筛选防治药物,为预防和治疗该病提供准确实验数据。对发病鲤鱼进行细菌分离纯化,通过革兰氏染色反应,生理生化反应测定单菌落特性,进行细菌回归试验和药敏试验。对注射菌液后发病的鱼进行细菌再分离,得到革兰氏阴性菌,并且与七叶苷及其它17种指标反应呈阳性,与戊二酰-甘氨酸-精氨酸-AMC及其它11种指标反应呈阴性,注射该菌液48 h后鱼体出现与疑似病例相同病症。分离得到的细菌,按《伯杰氏细菌鉴定手册》进行鉴定,确定为肺炎克雷伯氏菌。药敏试验结果表明该菌对亚胺培南等6种药物高度敏感。本试验首次从鲤鱼体内分离出肺炎克雷伯氏菌,并得到6种高度敏感的药物,同时阐明了肺炎克雷伯氏菌在鲤鱼中发病症状。     

羊源肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

本研究通过病死羊的肺脏中进行细菌分离、形态学观察、生化试验、致病性试验、药敏试验和16S rRNA扩增。结果从肺中分离到1株具有致病性的革兰氏阴性短杆菌。生化试验鉴定结果符合肺炎克雷伯氏菌的特征。分离株对头孢噻肟、阿米卡星、头孢曲松和链霉敏感外,对强力霉素等12药物具有耐药性。16S rRNA测序结果分析显示分离株与肺炎克雷伯氏菌的核苷酸同源性为97.1%~99.0%,在核苷酸进化树上与肺炎克雷伯氏菌属于同一分支。结果表明本研究从病死羊的肺脏中分离到1株肺炎克雷伯氏菌。     

一例白眉长臂猿慢性腹泻的诊治及病原分离鉴定

在患慢性腹泻的1只白眉长臂猿粪便中分离出1株肺炎克雷伯氏菌臭鼻亚种(K pneumoniaesubsp ozaenae)和1株致病性大肠杆菌,经大肠杆菌因子血清鉴定为:O26:K60(B6);2株分离菌经药敏试验后,先采取百菌除和先锋霉素Ⅵ等敏感药物进行抗菌消炎治疗,后用参苓白术散和启脾丸调理脾胃功能,收到了满意效果。     

西宁地区宠物犬源肺炎克雷伯菌血清型鉴定、致病性及耐药性检测

为了研究西宁地区宠物犬源肺炎克雷伯菌血清型鉴定、致病性及耐药性等生物学特性,采集患有呼吸道疾病宠物犬的咽拭子、鼻拭子及痰液等病料组织127份,用细菌分离培养、形态学观察、生化鉴定、PCR等方法进行肺炎克雷伯菌鉴定,采用人工感染小鼠试验、PCR法及K-B药敏纸片法分别检测其致病性、血清型及耐药性。结果显示,从采集的127份样品分离得到62株致病性肺炎克雷伯菌,分离的62株致病性肺炎克雷伯菌有4种血清型,以K5(37.1%)和K1(19.4%)血清型为主要流行的血清型;对阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素、新霉素、氟苯尼考、强力霉素、大观霉素、磺胺二甲氧嘧啶8种药物耐药率在61.%以上,对其他药物的耐药率在9.7%～35.5%之间。研究结果可为西宁地区宠物犬源肺炎克雷伯菌病的防控及合理用药提供参考依据。     

一起犊牛冠状病毒、轮状病毒与大肠埃希氏菌混合感染的实验室诊断

陕西省某规模化奶牛场发生一起新生犊牛腹泻病例,为了确定发病原因,通过临床剖检,无菌采集病料进行细菌分离鉴定、PCR检测病毒等技术,最终确诊这起疫病为牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)和大肠埃希氏菌混合感染所致的犊牛腹泻.对分离到的大肠埃希氏菌进行药敏试验,结果显示分离菌对左氟沙星和诺氟沙星敏感,对四环素、复方...     

一例黑叶猴眼鼻部恶性肿瘤及大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌混合感染的诊断

为查明黔灵山动物园饲养的1只黑叶猴死亡原因,通过临床症状、病理剖检、病理组织学检查、免疫组化标记、细菌学检查和药敏试验进行诊断。结果:眼、鼻部组织经贵州医科大学附属医院病理科诊断为恶性肿瘤伴坏死;血液、肝脏组织经细菌培养及鉴定检测出大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌,药敏试验表明2种细菌均对阿米卡星、头孢曲松、庆大霉素、左氧氟沙星、复方新诺明等18种药物敏感。结论:综合诊断黑叶猴为眼、鼻部恶性肿瘤,并伴有大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌混合感染。     

大肠杆菌和绿脓杆菌混合感染引起的水貂出血性肺炎的鉴定

为了鉴定引起水貂发生出血性肺炎的病原体,试验采用病原分离鉴定、分离株16S rRNA扩增与序列分析、分离株对小鼠致病力试验、分离株血清分型鉴定、大肠杆菌H基因型鉴定、分离株药敏试验和分离株动物感染试验对来自山东省、辽宁省、河北省和黑龙江省的28份具有典型出血性肺炎症状死亡水貂的病料进行鉴定。结果表明:混合感染12例,单一病原菌感染16例,镜检可见短小的阴性杆菌和两端钝圆的阴性长杆菌; 16S rRNA扩增与序列分析共分离出22株绿脓杆菌和18株大肠杆菌,其中有4株对小鼠致死率达到50%以上,9株对小鼠致死率在10%～40%;从22株绿脓杆菌中共分离出8株G型、7株E型和7株D型,未检测出大肠杆菌血清型,大肠杆菌H基因型为H11;绿脓杆菌分离株对环丙沙星、妥布霉素、阿米卡星等6种药物敏感,大肠杆菌分离株对环丙沙星、妥布霉素、阿米卡星等10种药物均耐药;大肠杆菌和绿脓杆菌分离株均可导致水貂死亡并造成肺泡壁毛细血管瘀血、脾脏淋巴细胞数量减少、肺脏上皮细胞坏死、红髓内巨噬细胞数量增多等明显病理变化。说明目前引起水貂出血性肺炎的病原体已由传统的绿脓杆菌单一感染逐渐转变为大肠杆菌和绿脓杆菌的混合感染。     

兔源肺炎克雷伯氏菌的生物学特性研究

为探究兔源肺炎克雷伯氏菌的生物学特性,本研究对从病兔中采集的病料进行细菌的分离培养、细菌特征性基因(Khe基因)的PCR检测、生化鉴定、药敏试验、致病性试验、毒力基因的扩增及序列分析对细菌分离株进行分析.结果显示麦康凯平板上生长有奶油状菌落且镜检为革兰氏阴性菌;Khe基因扩增为阳性;生化鉴定结果表明分离菌为肺炎克雷伯氏...     

青岛地区兔肺炎克雷伯氏菌分离鉴定

对青岛地区某兔场病死兔的病变器官组织进行细菌分离和纯培养,对所分离的细菌进行形态特征、理化性质和16SrRNA序列的分子鉴定和测序,人工感染以及药敏试验,判定为肺炎克雷伯氏菌。代表菌株16SrRNA序列长度1414bp,与GeneBank登录号为EU360123.1的肺炎克雷伯氏菌16SrRNA序列同源性100%,人工感染小鼠24h全部死亡,对供试的诺氟沙星等药物高度敏感,对供试的强力霉素等中毒敏感,对头孢拉定等耐药。应用筛选的敏感药物,并采取综合防治措施,使疫情得到了有效控制。     

牛病毒性腹泻病毒、大肠杆菌和奇异变形杆菌混合感染致犊牛腹泻的研究

为确定甘肃省临夏州某奶牛场犊牛腹泻的病因,并提供合适的治疗方案和防控措施,试验采集该牛场13头腹泻犊牛的粪便和血清,通过胶体金技术、ELISA方法、细菌分离鉴定、Kirby-Bauer法分别进行病毒病原学检测、病毒血清学抗体检测、病原菌鉴定和药物敏感性试验。病毒学检测结果显示,13份粪样中未检测出牛轮状病毒（BRV）、牛冠状病毒（BCV）的抗原,牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗原阳性率为23.08%（3/13）;未检出BRV和BCV的抗体,BVDV血清学抗体阳性率为38.46%（5/13）。病原菌检测结果显示,13份粪便样品中,分离出13株大肠杆菌和7株奇异变形杆菌。药敏试验表明,分离的大肠杆菌和奇异变形杆菌对20种常规药物均产生了不同程度的耐药,且无对两种细菌均有效的药物。此次犊牛腹泻是由BVDV、大肠杆菌、奇异变形杆菌混合感染引起的,且大肠杆菌和奇异变形杆菌的耐药现象严重,本试验结果为该牛场进一步治疗此次的犊牛腹泻病提供了合理有效的依据。     

鸡感染多杀性巴氏杆菌和大肠杆菌的分离鉴定

本研究从鸡体内分离到16株细菌,经鉴定为多杀性巴氏杆菌和大肠杆菌混合感染。毒力试验和药敏试验的结果表明,多杀性巴氏杆菌致病性较强,大肠杆菌致病性稍弱,2菌混合感染致病性最强;恩诺沙星、单诺沙星和头孢氨苄西林对两种菌均为高敏,其余药物为中敏或不敏感。     

牛病毒性腹泻病毒、大肠杆菌和奇异变形杆菌混合感染致犊牛腹泻的研究

为确定甘肃省临夏州某奶牛场犊牛腹泻的病因,并提供合适的治疗方案和防控措施,试验采集该牛场13头腹泻犊牛的粪便和血清,通过胶体金技术、ELISA方法、细菌分离鉴定、Kirby-Bauer法分别进行病毒病原学检测、病毒血清学抗体检测、病原菌鉴定和药物敏感性试验。病毒学检测结果显示,13份粪样中未检测出牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCV)的抗原,牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原阳性率为23.08%(3/13);未检出BRV和BCV的抗体,BVDV血清学抗体阳性率为38.46%(5/13)。病原菌检测结果显示,13份粪便样品中,分离出13株大肠杆菌和7株奇异变形杆菌。药敏试验表明,分离的大肠杆菌和奇异变形杆菌对20种常规药物均产生了不同程度的耐药,且无对两种细菌均有效的药物。此次犊牛腹泻是由BVDV、大肠杆菌、奇异变形杆菌混合感染引起的,且大肠杆菌和奇异变形杆菌的耐药现象严重,本试验结果为该牛场进一步治疗此次的犊牛腹泻病提供了合理有效的依据。