喜树碱对B16F10细胞增殖及黑色素合成抑制机理

为研究喜树碱(Camptothecin,CPT)对B16F10小鼠恶性黑色素瘤细胞的增殖及黑色素合成抑制机制,利用噻唑蓝(Methylthiazoletetrazolium,MTT)检测法、显微观察法、Na OH裂解法和多巴氧化法分析不同浓度的CPT对细胞增殖、形态、黑色素合成及酪氨酸酶活性的影响.结果显示:随着CPT浓度的增高和处理时间的延长,B16F10细胞的增殖抑制增强. 160μmol/L CPT处理72 h,B16F10细胞增殖抑制率达77. 0%,一定范围内呈现时间和浓度依赖性(P 0. 05).同时不同浓度CPT对细胞黑色素合成和酪氨酸酶活性也具有明显抑制作用,40μmol/L CPT处理72 h,细胞中黑色素的合成量为85. 37%,酪氨酸酶的活性为56. 4%(P 0. 05).结果表明,喜树碱能有效抑制小鼠黑色素瘤细胞B16F10的增殖和细胞内的黑色素的产生,其机制可能与抑制酪氨酸酶的活性有关.     

4Gy60Co γ射线对Balb/c小鼠睾丸辐射损伤效应的研究

目的 探讨4 Gy⁶⁰Co γ射线对Balb/c小鼠睾丸的辐射损伤效应。方法 将60只Balb/c小鼠根据体质量按随机数表法分为正常组和辐射组,每组30只。对辐射组小鼠给予4 Gy⁶⁰Co γ射线一次性全身照射,并分别在照后14、21、35 d取材,检测小鼠睾丸指数,睾丸病理变化,精子浓度、活率、活力、正常形态率、血清激素等指标。结果 与正常组比较,辐射组小鼠睾丸指数在照后14、21、35 d时均显著降低（P<0.001）;辐射后14 d时,辐射组小鼠精子浓度、精子活率、活力以及正常精子形态率均无显著性差异,而小鼠血清睾酮显著升高（P<0.05）;辐射后21 d时,辐射组小鼠精子浓度、精子活率和精子活力以及正常精子形态百分比均显著降低（P<0.01）;照后35 d时,辐射组小鼠精子浓度、精子活率、精子活力以及正常精子形态百分比均显著降低（P<0.001）;4 Gy⁶⁰Co γ射线对小鼠血清黄体激素和促卵泡素的影响不显著（P>0.05）。结论 4 Gy⁶⁰Co γ射线对Babl/c小鼠睾丸损伤严重。     

天麻素对B16黑素瘤细胞黑色素形成的影响

[目的]探讨天麻素对体外培养的B16鼠黑素瘤细胞黑素合成的影响及其作用机制。[方法]选择不同浓度的天麻素作用于体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞,测定细胞黑素生成量,通过测定天麻素对蘑菇酪氨酸酶活性的影响,初步探讨天麻素影响黑色素形成的机制。[结果]当浓度大于15 mmol/L时,天麻素能抑制B16黑素瘤细胞黑色素形成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性。天麻素对蘑菇酪氨酸酶的半抑制浓度(IC50)为(69.37±9.22)mmol/L,对酪氨酸酶的抑制作用表现为混合型可逆抑制,抑制常数Ki=(123.8±20.2)mmol/L,提示天麻素可能通过抑制酪氨酸酶活性抑制B16细胞黑色素的形成。[结论]天麻素可作为一种潜在的色素障碍性疾病治疗药物。     

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞凋亡的影响

目的 探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞凋亡及bax、bcl-2表达水平的变化,及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用。方法 将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组（A组,25 mmoL/L葡萄糖,10%空白血浆）、高糖组（B组,200 mmoL/L葡萄糖,10%空白血浆）、左归降糖益肾方含药血浆组（C组,200 mmoL/L葡萄糖,10%含药血浆）,4-苯基丁酸（4-PBA）含药血浆组（D组,200 mmoL/L葡萄糖,10%含药血浆）。采用间接免疫荧光细胞化学法检测足细胞凋亡情况;MTT自动比色法检测足细胞活力,蛋白质印迹法和逆转录-聚合酶链反应法分别检测bax及bcl-2蛋白或mRNA表达水平的变化。结果 与A组相比,B组足细胞活力降低,bax及 bcl-2蛋白或mRNA的表达水平均升高（P<0.01）;与B组相比,C组、D组足细胞活力升高,bax蛋白或mRNA的表达水平均降低（P<0.05或P<0.01）,bcl-2蛋白或mRNA的表达水平均升高（P<0.01）;与C组比,D组足细胞活力升高（P<0.05）,但bax及bcl-2蛋白或mRNA的表达水平,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 bax及bcl-2蛋白或mRNA表达水平的升高,是足细胞损伤的分子机制之一;左归降糖益肾方含药血浆可以通过影响bax及bcl-2蛋白或mRNA的表达水平,从而抑制足细胞凋亡。     

黄芪虫藤饮对类风湿关节炎大鼠关节滑膜细胞生长增殖的影响

目的 探讨黄芪虫藤饮对类风湿关节炎大鼠关节滑膜细胞增殖的影响。方法 无菌条件下分离正常大鼠和类风湿关节炎（RA）模型大鼠关节滑膜组织,制成单个滑膜细胞,流式细胞术鉴定后,取培养第三代的关节滑膜细胞进行药物干预,用MTT法测定药物对细胞增殖抑制作用;用流式细胞术检测细胞凋亡率以及细胞周期。结果 正常组大鼠关节滑膜细胞增长率与RA空白组（0.00 mg/L）比较,差异有统计学意义（P<0.05）;不同浓度（100.0,50.0,25.0,12.5,6.25,0 mg/L）黄芪虫藤饮对RA大鼠关节滑膜细胞增殖均有明显的抑制作用,细胞凋亡率明显高于空白组（P<0.05）,并能诱导滑膜细胞G0/G1期的细胞生长停滞,且呈现典型的剂量依赖性。结论 黄芪虫藤饮能抑制RA关节滑膜细胞的活性,促进细胞凋亡,可以较好地应用于临床。     

扶正活血解毒方干预ANE诱导口腔黏膜成纤维细胞I型胶原表达的实验研究

目的 观察槟榔提取液（areca nut extract,ANE）对口腔黏膜成纤维细胞I型胶原分泌的诱导作用及扶正活血解毒方的干预作用。方法 体外培养口腔黏膜成纤维细胞,ANE为诱导剂,扶正活血解毒中药药物血清（低、中、高）为干预物;用免疫细胞化学法检测细胞内I型胶原的表达,用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）检测培养上清I型胶原的含量。结果 ANE对口腔黏膜成纤维细胞I型胶原的合成有促进作用（P<0.01）,扶正活血解毒方含药血清（中、高）对ANE刺激下的FB胶原合成有抑制作用（P<0.05）。结论 扶正活血解毒中药可下调ANE诱导的口腔黏膜成纤维细胞I型胶原的表达。     

山刺玫叶总黄酮的抗衰老作用研究

【目的】研究山刺玫叶总黄酮的抗衰老作用机制,为山刺玫叶的开发利用提供参考。【方法】选取SPF级昆明种小鼠60只,雌雄各半,随机分为空白组、衰老模型组、维生素E组和山刺玫叶总黄酮低、中、高剂量组共6组(n=10),其中空白组小鼠用等体积生理盐水灌胃;衰老模型组小鼠颈背部皮下注射125 mg/(kg·d) D-半乳糖,灌胃等体积生理盐水;维生素E组小鼠颈背部皮下注射125 mg/(kg·d) D-半乳糖,灌胃维生素E溶液50 mg/(kg·d);山刺玫叶总黄酮低、中、高剂量组小鼠均颈背部皮下注射125 mg/(kg·d) D-半乳糖,并依次灌胃山刺玫叶总黄酮溶液1.0,2.0,4.0 g/(kg·d),同样条件下饲养。6周后分别测定各组小鼠免疫器官指数及血清、脑和肝脏组织中的SOD、GSH Px活性和MDA浓度,HE染色法观察各组小鼠脑组织的形态学变化,ELISA法检测各组小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α的质量浓度。【结果】山刺玫叶总黄酮能显著或极显著提高衰老模型组小鼠脑、胸腺和脾脏指数(P＜0.05,P＜0.01),显著或极显著提高其脑、肝脏、血清中的SOD、GSH-Px活性(P＜0.05,P＜0.01),同时显著或极显著降低小鼠肝脏、血清和脑组织中的MDA浓度(P＜0.05,P＜0.01)。与衰老模型组比较,山刺玫叶总黄酮剂量组小鼠脑组织的神经元细胞数量增加,细胞的坏死及变性情况减轻,且随着山刺玫叶总黄酮剂量的增加恢复程度逐渐增加,即存在剂量依赖性。山刺玫叶总黄酮高、中剂量组小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-4的质量浓度显著或极显著高于衰老模型组小鼠(P<0.05,P<0.01),而IL-6、TNF-α的质量浓度则显著或极显著低于衰老模型组小鼠(P<0.05,P<0.01)。【结论】山刺玫叶总黄酮对机体的衰老有延缓作用,其机制与清除过多自由基、预防脂质过氧化及增强免疫功能有关。     

小檗碱对NIT-1细胞胰岛素分泌的影响

目的 探讨小檗碱对NIT-1细胞胰岛素分泌的影响及可能的作用机制。方法 采用小檗碱干预后,用MTT法、放射免疫法及Western blotting确定小檗碱干预的合适浓度范围及检测NIT-1细胞胰岛素水平和腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）蛋白的表达。结果 小檗碱在浓度为100 μmol/L时对基础培养基和高糖培养基干预的NIT-1细胞的增殖存在显著性抑制作用（P<0.05）;而小檗碱在浓度为30 μmol/L时就明显抑制高脂培养基诱导的NIT-1细胞的增殖（P<0.05）。小檗碱分别对基础、高糖和高脂诱导的NIT-1细胞短时相干预（1 h）后,显示葡萄糖刺激胰岛素分泌（GSIS）被明显抑制（P<0.05）;小檗碱对高糖高脂诱导的NIT-1细胞长时相干预（24 h）后显示基础胰岛素分泌和GSIS均有一定的增加（P<0.05,P<0.01）。小檗碱可以促进高糖高脂诱导的NIT-1细胞AMPK蛋白的表达。结论 小檗碱不仅仅作为一种AMPK激活来调节胰岛素分泌,其也可能通过其他的通路进一步影响胰岛素分泌。     

密蒙花颗粒的急性毒性实验研究

目的 观察密蒙花颗粒对小鼠的急性毒性反应及死亡情况,为临床应用安全性提供依据。方法 将30只小鼠分别用不同浓度及最大浓度密蒙花颗粒混悬液灌胃进行预实验,观察7 d未见小鼠死亡,无法测出LD₅₀,故进行最大耐受量（MTD）的测定。将40只小鼠随机分为给药组和空白对照组,根据小鼠可承受的最大体积分别用最大混悬浓度的密蒙花颗粒和蒸馏水1 d内灌胃2次,连续观察14 d,每天记录小鼠的一般状况、体质量,14 d后处死动物,测定小鼠的血常规指标,肝、脾、肾等主要脏器指数,观察解剖学及病理组织学改变情况。结果 给药组小鼠无死亡,与空白对照组比较,给药组小鼠的体质量变化无显著差异（P>0.05）,血常规指标与空白对照组亦无显著差异（P>0.05）,小鼠密蒙花颗粒日最大耐受量为114 g/kg。结论 急性毒性结果表明,密蒙花颗粒临床常用量是安全的。     

生血增白汤对环磷酰胺致血虚小鼠RBC、Hb、WBC、Plt含量的影响

目的 研究生血增白汤对环磷酰胺（CTX）致血虚小鼠RBC、Hb、WBC、Plt含量的影响,旨在探讨生血增白汤对化学性损伤血虚症的补血作用。方法 取ICR小鼠60只,随机分为6组,即正常对照组（A组）,模型对照组（B组）,阳性药四物合剂组（C组）,生血增白汤低、中、高剂量组（D1、D2、D3组）,每组10只,连续给药8 d。除A组外,其他组小鼠每日均于给药后4 h注射环磷酰胺100 mg/kg,第8天给药后测全血红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、白细胞（WBC）、血小板（Plt）值,并对数据进行统计学分析。结果 B组小鼠RBC、Hb、WBC、Plt含量较A组显著降低（P<0.01）。与B组比较,D3组能使血虚证小鼠Hb升高（P<0.05）;D1、D2、D3组及C组能使血虚证小鼠WBC升高（P<0.01）;D3组及C组能升高小鼠Plt（P<0.05）。结论 生血增白汤对CTX致化学性损伤造成的血虚证模型小鼠具有补血作用。     

茶叶提取物EGCG和GCG及ECG对B16细胞内黑色素生成的抑制作用

为研究茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、没食子儿茶素没食子酸酯(gallocatechingallate,GCG)和表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)对体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响,分别用不同浓度的EGCG、GCG、ECG和熊果苷(Arbutin,AR)处理细胞,观察效应物对细胞形态的影响,用溴化二苯四偶氮法(MTT法)测定茶叶提取物对细胞增殖率的影响,以左旋多巴(L–DOPA)为底物,测定细胞内酪氨酸酶的活性,采用氢氧化钠裂解法测定细胞内黑色素的含量。结果显示,EGCG、ECG、GCG能显著抑制B16细胞的黑色素生成和酪氨酸酶的活性,且呈剂量依赖关系;当浓度为60μg/mL时,细胞增殖率均低于50%,酪氨酸酶活性与对照组相比分别降低了26.67%、27.27%和32.71%,黑色素生成抑制率均在30%以上。结果表明,茶叶提取物能通过多种途径抑制黑色素生成,且GCG的作用效果最优,ECG的作用效果次之,三者的作用效果均优于熊果苷的作用效果。     

大百合与百合属优良品种杂交试验

[目的]通过优良品种杂交试验,旨在获取大百合(Cardiocrinum giganteum)与百合属(Lilium)其他品种杂交种子,从而选育出大小适宜、适应性强、与大百合交配亲和力较强的杂交花卉新植株.[方法]进行花粉培养液对比试验,检测花粉生活力;以野生的大百合为母本,与百合属的多个优良品种杂交,筛选与大百合交配亲和力较强的百合属亲本.[结果]最能促进百合花粉萌发的培养液为5%蔗糖+0.01%硼酸的混合液;切花插水保养和低温环境有利于百合花粉的保存.[结论]大百合与百合属间杂交成功是可行的;‘贵族’(Lilium spp.‘Noblesse’)和‘西伯利亚’(Liliumspp.‘Siberia’)两个百合属品种与大百合交配亲和力较强,均可形成较饱满的杂交种子.     

人参皂苷Rb_1美白功效的初步研究

通过体外蘑菇酪氨酸酶活性的检测,研究了人参皂苷Rb1对体外蘑菇酪氨酸酶的影响;通过细胞增殖率的测定,研究了人参皂苷Rb1对B16黑色素细胞增殖的影响。结果表明:不同浓度Rb1样品对于体外蘑菇酪氨酸酶的抑制率明显低于熊果苷(P0.1),抑制率均在±5%,说明人参皂苷Rb1对于体外蘑菇酪氨酸酶活性没有明显作用;人参皂苷Rb1对B16黑色素细胞增殖的影响随着浓度的变化而变化,当Rb1质量浓度125μg/mL时对B16黑色素细胞增殖有促进作用,125μg/mL时对B16黑色素细胞增殖有抑制作用。     

野生百合与栽培百合的核型比较

参照李懋学和Stebbins的方法,对细叶百合、兰州百合、亚洲百合("精粹"和"托里诺")进行了染色体数目鉴定和核型分析。结果表明:细叶百合和兰州百合为二倍体种,核型公式分别为2n=2x=24=2m+4sm(2SAT)+8st+10t和2n=2x=24=10sm(4SAT)+6st+8t,分属3A和3B型;"精粹"百合和"托里诺"百合为三倍体种,核型公式分别为2n=3x=36=3 m+6sm+18st+9t和2n=3x=36=3 m+3sm+12st+18t,均为3B型。此外,细叶百合、"精粹"百合和"托里诺"百合株间或细胞间均存在着染色体数目变异。     

液体培养基对有斑百合花粉管生长的影响

以有斑百合花粉为试材,通过离体培养,利用单因子试验研究蔗糖、硼酸、以及钙、镁、钾离子对花粉萌发和花粉管生长的影响.并在此基础上进行多因子试验比较了蔗糖、H3 BO3、CaCl2和Ca(NO3)2·4H2O对有斑百合花粉萌发的影响.结果表明:蔗糖、硼和钙对有斑百合花粉萌发影响较大,而钾和镁的影响较小;适宜的花粉培养液为蔗...     

益气解毒方对鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响

目的 研究益气解毒方抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖的效应。方法 采用实时无标记细胞功能分析技术（real-time unlabeled cell function analysis technique, RTCA）动态监测不同浓度（0.125、0.250、0.500、1.000 mg/mL的益气解毒方水提物对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响;采用CCK-8法检测不同浓度益气解毒方水提物对人鼻咽癌CNE2细胞增殖能力的影响;通过高通量细胞成像多功能检测系统Cytation5监测不同浓度益气解毒方水提物对鼻咽癌CNE2细胞增殖形态的影响;采用Western Blot技术检测不同浓度益气解毒方水提物对鼻咽癌CNE2细胞增殖相关蛋白Survivin、XIAP、PCNA表达的影响。结果 RTCA 和 CCK-8 法实验结果显示,与空白对照组比较,益气解毒方水提物可以明显抑制鼻咽癌CNE2细胞的增殖,而且随着益气解毒方水提物的作用时间越长,其抑制效应越显著（P<0.05）;Cytation5结果显示,与空白对照组比较,不同浓度益气解毒方水提物处理CNE2细胞后,细胞形态发生了明显变化,且浓度越高,作用时间越长,细胞膜皱缩,细胞核质浓缩、破碎更明显;Western Blot结果显示,与空白对照组比较,益气解毒方水提物能明显抑制CNE2细胞中增殖相关蛋白Survivin、XIAP、PCNA的表达（P<0.05）。结论 益气解毒方水提物能明显抑制鼻咽癌细胞增殖,该效应与其抑制增殖相关蛋白Survivin、XIAP、PCNA的表达有关。     

DHAR基因植物表达双元载体的构建及转化百合研究

将质粒pSB166中包含ED35s肩动子,Omega元件及TNOS终止子的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA1303,构建了中间表达载体,将DHAR基因与pCSB定向连接,构建了DHAR基因植物表达载体pCSB-DHAR.进而以百合叶片为受体,通过根癌农杆菌介导的方法将DHAR基因转入百合,对转基因百合进行PCR检测,初步表明DHAR基因已整合到百合基因组中.     

3类观赏百合试管苗叶片结构及水分特性

1材料与方法 1．1材料试验于2004年6月-2006年6月在青海大学农牧学院农学系植物学及植物组织培养实验室进行。试材：东方百合品种为马克;亚洲百合品种为黄巨人;铁炮百合品种为白狐,取自青海大学农牧学院农学系组培室内培养而得的试管苗叶片。