鸡源性沙门氏菌耐药基因检测与耐药相关性分析

为研究沙门氏菌耐药基因与其耐药性之间的关系,本研究以K-B纸片法对临床分离的29株鸡源性沙门氏菌进行10种抗菌药物敏感性测定,应用PCR技术进行这些抗菌药物相关耐药基因检测.并通过质粒接合试验证明了耐药性及耐药基因的转移.结果显示:29株分离株对氨苄西林耐药率为31.0％,对头孢唑啉耐药率为10.3％,对四环素耐药率为44.8％,对复合磺胺耐药率为41.4％,对氯霉素耐药率为3.4％,对环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星的耐药率均为37.9％,但对庆大霉素和卡那霉素均敏感.本实验共检测到8种耐药基因,其中blatem-1阳性率为31.0％,tetA和tetB阳性率为44.8％,sull和sul2阳性率为41.3％,aadAl阳性率为3.4％,dfrA1阳性率为10.3％,qnr阳性率为37.9％,而tetG、blaCMY-2和catI均未检出.此外,通过与非耐药菌接合后绝大部分接合子均获得了供体菌质粒编码的相应抗性表型,耐药基因在接合过程也发生了转移,赋予被接合细菌新的耐药性.以上结果表明沙门氏菌的耐药性与其相关耐药基因的检出率基本一致,而且耐药性通过质粒进行转移.     

新疆猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因检测

为了解新疆某规模化养殖场猪源沙门氏菌对临床上常用抗菌药物的耐药情况,以及β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和质粒介导的喹诺酮耐药（plasmid mediated quinolone resistance,PMQR）基因的流行情况,本试验通过琼脂稀释法对分离的菌株进行最小抑菌浓度测定,PCR方法进行β-内酰胺酶bla_TEM、bla_CMY-2、bla_CTX-M、bla_LAP-1、bla_KPC、bla_OXA和bla_SHV基因,16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB及PMQR类基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、oqxA、oqxB和aac（6'）-Ib-cr的检测,确定阳性菌株,分析其携带的基因型与耐药表型之间的关系。分离的猪源沙门氏菌对环丙沙星和安普霉素耐药率最高,均为77.9%（102/131）,耐药菌主要以8耐为主（29.0%,38/131）。从被检基因中检测出11种耐药基因,不同基因共存有24种类型,主要以bla_TEM+bla_OXA+qnrS+aac（6'）-Ib-cr+oqxA+oqxB（27.6%,32/116）;bla_TEM+bla_OXA+qnrS+oqxA+oqxB（24.1%,28/116）;bla_TEM+qnrS（18.0%,21/116）形式共存。该养殖场分离的沙门氏菌耐药现象严重,分离耐药菌株存在β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和PMQR类基因共存现象,提示应加强对β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和PMQR类因子的监控。     

规模化猪场猪源沙门氏菌的耐药性及相关耐药基因检测

为了解贵州省某规模化猪场猪源沙门氏菌分离株的药物敏感性和耐药基因的存在情况,也为进一步研究细菌耐药的分子机制和临床用药提供资料,利用K-B法检测了6株猪源沙门氏菌对15种药物的敏感性,采用PCR方法检测了9种常见耐药基因在分离株中的分布情况。结果显示,所有菌株对青霉素、氨苄西林和吡哌酸的耐药率最高均为100%,对头孢克洛、链霉素和庆大霉素的耐药率最低。从9种常见耐药基因中扩增到3种β-内酰胺类耐药、3种氨基糖苷类、2种氟喹诺酮耐药基因。研究表明,沙门氏菌极易产生耐药性,耐药基因广泛存在于耐药菌株中,但耐药表型与耐药基因之间无绝对相关性。     

京津冀地区猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因分析

研究旨在为防控沙门氏菌引起的猪疾病以及指导猪场用药提供一定参考。试验对京津冀地区猪饲料厂、猪养殖场、猪屠宰场、超市、农贸市场等采集的饲料、猪肛拭子、水、猪肉等样品中沙门氏菌进行分离鉴定,对50株7类以上药物耐药的菌株进行全基因组测序,分析其耐药基因分布情况。对分离筛选得到沙门氏菌菌株通过抗菌药物浓度梯度法测定其对22种抗菌药物的敏感性,结合全基因组测序结果,分析不同来源沙门氏菌耐药基因。结果显示：5 024份样品中共检出沙门氏菌484株,平均检出率为9.63%;484株沙门氏菌对22种抗菌药物的耐药性检测,耐药率是86.16%。耐药率大于30%的抗菌药物有庆大霉素（30.8%）、阿莫西林（31.6%）、四环素（36.8%）、多西环素（33.5%）、萘啶酸（31.8%）。对耐受7种以上抗菌药物的50株沙门氏菌进行全基因组测序,并对耐药基因进行分析,共检出43种耐药基因,其中aac6’-Iaa、aadA1、aph(3’)-Ia、aph(3’’)-Ib、aph3’-Iia、aac3-Iid、mcr-1、tet(B)、sul1、sul2、gyrA、floR、dfrA12、aac(6’)-Ib-...     

猪源致病性沙门氏菌耐药基因的分析

采用平板稀释法，选用氨基糖苷类、四环素类、磺胺类和氯霉素类4大类抗生素的11种药物，对30株猪源致病性沙门氏菌进行了药敏试验，结果有28株菌（93．3％）至少对一种药物有耐药性；对四环素、强力霉素、磺胺甲基异口恶唑、复方新诺明、链霉素、卡那霉索和氯霉素有耐药性的菌株较普遍，在所有菌株中占比例分别为83．3％、80％、80％、76．7％、60％、56．7％和56．7％。设计了25对引物，对耐药基因进行了扩增及序列测定，结果扩增到13种耐药基因，与GenBank中的相应基因有很高的同源性（≥98．1％）。30株猪源致病性沙门氏菌中至少含有一种耐药基因的菌株有28株（93．3％），sul1、aph（3′）-Ⅱa、tetC、Catl、tetA和aadAl耐药基因较为普遍，检出率分别为76．7％、60％、60％、43．3％、40％和36．7％。药敏试验结果与耐药基因检测结果有很高的一致性（≥88％）。     

屠宰场沙门氏菌耐药性分析和毒力基因检测

【目的】研究广东省茂名地区屠宰环节猪肉中携带的沙门氏菌的耐药性和毒力特征,为该地区食源性沙门氏菌的危害评估和防控措施制定提供依据。【方法】从广东省茂名地区屠宰场采集的猪肉、脾脏、肝脏样本中分离到19株沙门氏菌,采用K-B药敏纸片法检测其对β-内酰胺类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类和磺胺类抗菌药物的耐药性,用PCR方法检测β-内酰胺类耐药基因(bla_TEM、bla_OXA-1、bla_SHV)、氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrS、qnrB)、氨基糖苷类耐药基因(aadA1、aac(6′)-Ⅰb、rmtB)、四环素类耐药基因(tetA、tetB、tetC)、酰胺醇类耐药基因(Cat1、floR)、磺胺类耐药基因(SulⅠ、SulⅡ、SulⅢ)和10种毒力基因(mogA、sseL、mgtC、bcfA、araB、spvR、spvA、spvB、spvC、spvD)的携带情况。【结果】19株沙门氏菌耐药严重,对四环素、多西环素、氯霉素、氟苯尼考、磺胺异噁唑的耐药率均>50%,对四环素、多西环素和氯霉素的耐药率最高...     

禽源致病性沙门氏菌耐药表型与耐药基因的分析

为了解江苏苏中地区禽源沙门氏菌耐药现象及耐药基因的存在情况,采用K-B法对22株沙门氏菌分离株进行12种抗菌药物敏感性试验,并通过PCR方法检测了12种耐药基因的存在情况。结果显示,所有菌株对甲氧胺嘧啶、阿米卡星、庆大霉素、萘啶酮酸、诺氟沙星的耐药率均在72.73%～100%之间;存在着5种耐药表型,每个耐药表型均在4重或4重以上,耐药最多菌株可耐受10种药物;扩增出9种耐药基因,与GenBank中的参考序列同源性均在98%以上;耐药表型与耐药基因的存在基本一致,但无绝对相关性。本研究结果表明苏中地区沙门氏菌耐药现象非常严重,且耐药基因广泛存在。     

肉鸡生产链沙门氏菌污染情况调查与分析

为了解肉鸡生产链各环节沙门氏菌污染情况,试验从江苏某产业链型农牧食品企业的养殖场、屠宰场、运输车辆、专营店采集样品540份,进行沙门氏菌分离鉴定、血清型及毒力基因检测。结果显示：该肉鸡生产链沙门氏菌检出率为7.22%(39/540),生产链各环节沙门氏菌污染程度依次为：养殖环节>屠宰环节>销售环节>运输环节;共检出6种血清型,其中印第安纳沙门氏菌和肠炎沙门氏菌为优势血清型,屠宰环节沙门氏菌血清型最丰富;沙门氏菌8个毒力基因在39个分离株均有检出,毒力岛基因mogA(SPI-1)、sopB(SPI-2)、araA(SPI-5)的携带率高于肠毒素基因stn、毒力质粒基因spvD、spvR、spvA及菌毛基因agfA。结果表明该肉鸡生产链各环节均存在沙门氏菌污染,其中养殖环节污染最严重,提示养殖场应重视对肉鸡和饲料中沙门氏菌的监测,屠宰环节和销售环节应加强对环境的消毒,以避免交叉污染。     

广西畜禽产品中沙门氏菌血清型、耐药性及耐药基因调查

试验旨在了解广西部分地区畜禽产品中沙门氏菌血清型分布和耐药状况,以及β-内酰胺酶bla_TEM、bla_CTX-M基因和氟喹诺酮类抗生素耐药基因qnrA、oqxA、oqxB、aac（6'）-Ⅰ b-cr的流行情况。对沙门氏菌进行分离鉴定与血清型分型,采用K-B纸片法对其中随机挑选的80株分离株进行24种抗菌药物敏感性试验,并采用PCR方法进行耐药基因检测。结果显示,从零售生鲜畜禽肉中分离的176株沙门氏菌分属5个血清群,共26种血清型,主要优势血清群为B群60.23%（106/176）、E群18.75%（33/176）和C群15.91%（28/176）,主要优势血清型为德尔卑沙门氏菌35.23%（62/176）、鼠伤寒沙门氏菌11.93%（21/176）和伦敦沙门氏菌9.66%（17/176）。80株分离株对24种抗菌药物均产生不同程度的耐药,其中对复方新诺明、林可霉素、利福平的耐药率最高,均高于90.00%,对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、强力霉素、头孢拉啶、头孢氨苄、头孢曲松、头孢他啶、头孢噻肟、阿奇霉素的耐药率介于50.00%~90.00%之间,对环丙沙星、氧氟沙星、氟苯尼考的耐药率小于10.00%;所有分离株均为多重耐药株,其中最少为2重耐药,最多为17重耐药,多重耐药性主要集中在10~16重耐药,共占总数的78.75%（63/80）。PCR结果显示,80株分离株各基因的检出率分别为：bla_TEM 98.75%（79/80）、bla_CTX-M 26.25%（21/80）、oqxA 26.25%（21/80）、oqxB 21.25%（17/80）、qnrA 16.25%（13/80）、aac（6'）-Ⅰb-cr 50.00%（40/80）。结果表明,广西畜禽产品源沙门氏菌血清型呈多样性分布,分离株的耐药情况严重,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有很大的关系。     

重庆部分羊场沙门氏菌的分离鉴定、耐药表型分析及耐药基因检测

本研究旨在初步了解重庆市羊源沙门氏菌的耐药性及耐药基因流行情况。在5个山羊养殖场采集185份山羊粪便样品,经选择性增菌和PCR鉴定分离沙门氏菌,确定了其血清型,测定了分离菌对28种抗菌药物的敏感性,并检测了喹诺酮耐药决定区（QRDR）的耐药突变位点和质粒介导的喹诺酮耐药（PMQR）、超广谱β-内酰胺酶（ESBL）基因。共分离到羊源沙门氏菌11株,其中10株为德尔卑沙门氏菌。分离的菌株对氨苄西林、头孢唑啉、头孢氨苄、头孢噻肟、四环素和培氟沙星耐药严重;9株菌表现为多重耐药,对3~7类药物耐药。所有菌株均存在QRDR耐药突变且携带bla_TEM基因;7株菌携带1~5种PMQR基因。本研究分离的羊源沙门氏菌对常用抗菌药物整体耐药较为严重,且广泛存在耐药突变和携带耐药基因。     

青岛地区肉鸡生产链中沙门菌的分离及血清学鉴定

为了解青岛地区肉鸡生产链中各环节沙门菌的分布及其血清型状况,采用常规培养与PCR鉴定对不同环节沙门菌进行分离。采用玻片凝集试验与x MAP~#174;液相芯片分型法进行血清型鉴定。结果青岛地区肉鸡生产链沙门菌总阳性率为10.10%。养殖环节中种鸡场、孵化场、商品鸡场的分离率分别为0.67%、37.76%、9.20%;屠宰加工过程中淋洗前、淋洗后、预冷液、预冷后、分割环节分离率分别为3.69%、3.86%、5.7%、16.16%、31.43%;市售成品为17.15%。78.65%菌株为肠炎沙门菌。结论种鸡场沙门菌净化与孵化场种蛋消毒及淘汰弱雏是青岛地区肉鸡养殖环节沙门菌的关键控制措施;预冷液与分割车间的环境卫生是其屠宰加工环节的关键控制点。青岛地区肉鸡生产链中流行血清型为肠炎沙门菌。     

某肉鸡场鸡源大肠杆菌耐药性跟踪检测与分析

2012~2014年从辽宁某肉鸡养殖场采集300份鸡泄殖腔拭子,分离获得152株鸡源大肠杆菌。采用微量稀释法对152株鸡源大肠杆菌进行了14种兽用和16种人用抗菌药的药物敏感性测定,并参照CLSI肠杆菌判定标准进行判定。结果显示,鸡源大肠杆菌对兽用阿莫西林、氨苄西林、恩诺沙星、复方新诺明、磺胺异噁唑、四环素和人用哌拉西林、替卡西林、环丙沙星均产生明显耐药性,耐药率较高。对所分离的鸡源大肠杆菌耐药性检测结果与EUCAST发布的野生型菌株MIC值分布进行比较分析,耐药结果基本一致,但通过MIC值分布比较,结果显示出分离菌株的大观霉素、氨苄西林、恩诺沙星、复方新诺明、头孢噻吩、头孢呋辛、环丙沙星和妥布霉素药物的MIC值发生了明显右移,表明该肉鸡场大肠杆菌对上述抗菌药的耐药强度呈现逐渐增强的趋势。在养殖过程中应采取科学饲养和严格的生物安全措施防控疾病,科学合理使用抗菌药物,控制肉鸡场细菌耐药性的产生和传播。     

Tracking Detection and Analysis of Drug Resistance of Chicken-derived Escherichia coli in a Broiler Farm

From 2012 to 2014,300 chicken cloacal swab samples were collected from a broiler farm in Liaoning province,152 strains of chicken-derived Escherichia coli were isolated and identified.The 152 strains of chicken-derived Escherichia coli were detected on 14 kinds of veterinary antimicrobial drugs and 16 kinds of antimicrobial drugs for human by using trace dilution method,and reference to CLSI enterobacter decision criteria to determine.The results showed that chicken-derived Escherichia coli had obvious resistance to veterinary antimicrobial drugs (amoxicillin,ampicillin,enrofloxacin,trimethoprim-sulfamethoxazole,sulfafurazole,tetracycline) and antimicrobial drugs for human (piperacillin,ticarcillin,ciprofloxacin),the resistance rates were high.The resistance test results of isolated chicken-derived Escherichia coli comparing with the MIC value distribution of EUCAST wild type strains were same,but through comparing MIC value distribution,the results showed the isolates of spectinomycin,ampicillin,enrofloxacin,trimethoprim-sulfamethoxazole,cefalotin,cefuroxime,ciprofloxacin and tobramycin drugs MIC value moved to the right obviously,indicated that the antibiotic resistant strength of Escherichia coli increased gradually.The process of breeding and strict biosecurity measures should be taken scientifically to control diseases,and the antibacterial agents should be applied reasonably to control broiler farm production and propagation of bacterial drug resistance.     

肉鸡屠宰加工过程中沙门菌污染定量风险评估

为了构建肉鸡屠宰加工过程中沙门菌污染定量风险评估模型,分析鸡肉中沙门菌的消长变化规律,明确关键风险防控点,采用2015年部分肉鸡屠宰场沙门菌污染监测和调研数据,构建以烫煺后为评估过程起点,包括净膛、清洗预冷和分割传送的模块化过程风险评估模型,以不同分布描述各变量,并通过@RISK软件模拟运行。结果显示,通过构建的模型模拟屠宰加工后终端鸡肉产品中的沙门菌污染量,90%的可能分布在0~9MPN之间,而依据实际监测数据换算为5.3 MPN,说明模型可信。根据过程中各环节的模拟数据,分析了肉鸡携带的沙门菌消长变化,发现预冷后沙门菌污染总量明显下降,但分割传送后污染总量又有所回升。通过拟合的相关系数分析,明确了传送带上的沙门菌是影响终端鸡肉沙门菌污染的最关键风险点。本研究构建的肉鸡屠宰加工全过程沙门菌定量风险评估模型,可为肉鸡屠宰场沙门菌污染的卫生监管和风险管理提供理论依据。     

致病性沙门菌的耐药表型分析及其耐药基因检测

采用K-B法测定自雏鸡分离的致病性沙门菌对四环素等20种抗生素的耐药情况,并应用PCR方法检测相应的耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE和tetG.结果显示,受试4株菌株全部对四环素、强力霉素高度耐受,在染色体上均有tetA基因存在,其中3株在质粒上还存在tetB基因,耐药表型与耐药基因的检测结果完全相符.表明tetA和tetB基因是决定本试验中临床分离沙门菌株对四环素类抗菌药物耐药的主要原因.     

鸡源多重耐药沙门菌转座子与耐药基因的研究

为了解鸡源性沙门菌分离株多重耐药情况与转座子及耐药基因的携带关系,采用K-B纸片法对23株鸡源性沙门菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感试验;应用PCR对分离菌株进行转座子及耐药基因检测。结果显示,23株分离株中有10株对2种以上抗菌药物耐药,属于多重耐药株,其中四环素-氨苄西林-甲氧苄啶-诺氟沙星-庆大霉素-环丙沙星是主要多重耐药谱;10株多重耐药菌中有8株分别携带不同种的转座子(tnpA、tn1721、tnp513、IS26),其中以转座子tnpA、tn1721和IS26的检出率最高,耐药基因中以blatem-1、tetA和tetB的检出率最高,携带转座子多的菌株中耐药基因检出率较高且耐药谱广。结果表明沙门菌多重耐药性与转座子的携带之间关系密切,耐药表型与耐药基因检测结果基本一致。