胶体金免疫层析技术在动物疫病诊断中的应用

免疫胶体金技术是人类医学中常用的标记技术。它具有独特的优势,可与葡萄球菌蛋白、免疫球蛋白和毒素相互作用,与糖蛋白、酶、抗生素、激素等的相互作用,非共价结合。近年来,免疫胶体已广泛用于人体医学领域,胶体金技术已被引入并广泛应用于生物医学领域。     

动物免疫监测及诊断技术

1 实验室诊断主要技术病原学诊断是指细菌与病毒等病原微生物的分离鉴定,是传染病诊断技术基础,是很基本的确诊方法,是疫病鉴监控和疫病普查的主要手段.基本内容为病料采集与运送,病料处理,细菌的培养,形态学与生化试验,细菌的分离与接种,细菌的血清型鉴定及血清试验等.     

胶体金免疫层析技术在动物疫病诊断上的应用

胶体金免疫层析技术是在胶体金标记技术、免疫检测技术和层析分析技术基础上发展起来的一种新型免疫学诊断技术。因其具有简便、快速、无污染、不需特殊仪器、特异性强、敏感性高、结果判断直观等优点,成为当前广泛采用的动物疫病免疫学诊断技术。胶体金免疫层析技术在动物病毒病、细菌病、寄生虫病及水产动物疫病诊断方面都有非常广泛的应用,在未来的动物疫病诊断中将发挥越来越重要的作用。论文就胶体金免疫层析技术在动物疫病诊断上的应用进行综述。     

鸡卵黄性腹膜炎的诊断及体外抑菌试验

为了诊断一起鸡细菌性感染死亡病例,对死亡鸡内脏进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验。结果得知:分离菌为G-短杆菌;能够分解葡萄糖、蔗糖等;对庆大霉素、环丙沙星等高度敏感,对青霉素、阿莫西林等耐药;鸡乳酸菌对其有较强的抑制作用;攻毒小白鼠病变明显。结论:分离菌为鸡大肠杆菌,该病是由大肠杆菌引起的鸡大肠杆菌病,治疗首选药物为庆大霉素,鸡乳酸菌配合高敏药物能够防治该病。     

PCR技术在动物疫病诊断中的应用

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）,又称体外扩增技术,最早于1985年由Kary Mullis研制,是一种根据生物体内DNA复制的特点而设计的在体外对特定DNA序列进行快速扩增的新技术,具有特异性和敏感性高、操作简便、快速高效等特点。它能特异地在体外扩增微量基因或DNA片段,将皮克（pg）水平的DNA特异地扩增10^6～10^7倍,达到检测诊断的目的;在对特异性基因进行扩增时可使核苷酸的错配率低于万分之一;其操作过程在2～4h即可完成,有效缩短了诊断的时间。PCR技术目前已广泛应用于从基因扩增、基因检测到基因克隆、基因改造、     

一例猪巴氏杆菌病的诊断及体外抑菌试验

为了确诊某猪场患病猪的病原菌,找到防控办法,对死亡猪肺脏、气管液进行细菌分离鉴定,经过生化试验、药敏试验、体外抑菌试验、动物试验等,得知:分离菌培养特性、生化反应特性与巴氏杆菌基本一致;分离菌高敏药物为头孢氨苄、头孢曲松等,低敏药物为青霉素G、林可霉素等;乳酸菌对巴氏杆菌有明显的抑菌作用;攻毒小白鼠48 h内全部死亡。结论:分离菌为多杀性巴氏杆菌,该病为多杀性巴氏杆菌引起的猪巴氏杆菌病,乳酸菌配合高敏药物能防治该病。     

61种中草药对猪致病性链球菌的体外抑菌试验

无菌采集发病猪的肺脏、淋巴结、血液、关节积液和皮下脓肿物等病料，对其进行细菌分离鉴定，并对分离出的细菌进行致病性试验以确认致病性链球菌，将61种单味中草药分别经水煮处理后制成浓度为1g／mL的受试溶液，对致病性链球菌进行体外抑菌试验。结果发现：不同中草药对致病性链球菌具有不同的抑菌作用。     

61种中草药对猪致病性链球菌的体外抑菌试验

无菌采集发病猪的肺脏、淋巴结、血液、关节积液和皮下脓肿物等病料,对其进行细菌分离鉴定,并对分离出的细菌进行致病性试验以确认致病性链球菌,将61种单味中草药分别经水煮处理后制成浓度为1g/mL的受试溶液,对致病性链球菌进行体外抑菌试验.结果发现:不同中草药对致病性链球菌具有不同的抑菌作用.     

猪源乳酸杆菌的分离鉴定及体外抑菌试验

为了获得用于研制微生态制剂的乳酸杆菌菌株,从健康仔猪小肠中利用MRS固体培养基分离得到一株革兰氏阳性杆菌,通过培养特性、染色特征、菌落形态以及生化鉴定结果,初步判定该菌株为乳酸杆菌,再结合16S rDNA分子鉴定进一步确定该菌株为乳酸杆菌。牛津杯法体外抑菌试验结果显示,该菌对致病性大肠杆菌的抑菌效果较好,可以作为微生态制剂的保存菌种。     

数字PCR技术在动物疫病诊断中的应用进展

数字PCR技术是一种能够进行绝对定量的核酸检测技术,与实时荧光定量PCR技术相比,该技术敏感性更高、定量不依赖于标准曲线、对反应抑制物的耐受能力也更高.目前,该技术在转基因检测、物种鉴定、疾病诊断、病原微生物鉴定和精确定量分析等领域具有较广阔的应用前景.论文对数字PCR的发展历史、原理、优缺点及在动物疫病诊断中的应用进...     

鸡源卷曲乳杆菌Y68的分离鉴定及其体外益生特性评估

本试验旨在筛选研制畜禽微生态制剂——乳酸菌,探究卷曲乳杆菌Y68的益生特性。通过抑菌能力筛查、生长曲线测定、产酸性能、药敏试验、体外模拟胃肠道条件耐受试验、自凝集试验以及疏水性试验,评估了其益生特性。结果表明：卷曲乳杆菌Y68对鸡白痢沙门氏菌ATCC19945、金黄色葡萄球菌USA300均有较强的抑制作用,抑菌圈直径分别为（21.64±0.31） mm、（15.13±0.23） mm;卷曲乳杆菌Y68对数生长期为6～24 h;经培养48 h后菌液pH稳定在3.89;卷曲乳杆菌Y68对红霉素、青霉素、头孢菌素、氯霉素、万古霉素、克林霉素较为敏感,对诺氟沙星、氧氟沙星、四环素、庆大霉素、呋喃唑酮表现出耐药;卷曲乳杆菌Y68在pH 2.0环境下孵育3 h存活率为52.61%,在人工胃液环境下3 h存活率为65.92%,在人工肠液环境下10 h时存活率仍为86.23%,能够耐受0.3%的胆盐环境;卷曲乳杆菌Y68自聚集率在2、24 h时分别为（29.71±0.40）%、（97.23±0.76）%,疏水率为（89.59±0.63）%。综上所述,卷曲乳杆菌Y68具有较强的产酸能力、抑菌能力,对模拟...     

植物乳杆菌抑菌蛋白的分离鉴定及抑菌特性研究

【目的】筛选新型广谱有效的抑菌蛋白,为全面解析植物乳杆菌抑菌机制和开发新型抗菌制剂奠定基础。【方法】以植物乳杆菌GX20200417-1为研究对象,采用牛津杯法测定其抑菌活性,以低温离心和超滤法初步分离获得胞外蛋白并测定其抑菌活性,对胞外蛋白进行不同温度、pH及蛋白酶处理,研究抑菌蛋白理化特性,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进一步分析鉴定植物乳杆菌代谢产物中的抑菌成分。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有良好的抑菌作用;发酵上清液在发酵24 h的抑菌能力最强;胞外蛋白的抑菌能力与发酵上清液相近;植物乳杆菌抑菌蛋白具有较好的耐热特性,与对照组相比,在20~80 ℃时抑菌活性均无显著变化(P＜0.05),在pH 6.0~8.0时抑菌活性最佳,对蛋白酶敏感;经LC-MS/MS鉴定分析,检测出5种可信度较高且与抑菌作用相关的蛋白质,分别是片球菌素pediocin PA-1、溶菌素(lysin)、聚酮合酶(polyketide synthase)、辅助蛋白(accessory protein)和LysM peptidoglycan-binding domain-containing protein,分子质量分别为5.348、7.348、8.348、6.348和19.662 ku;蛋白质功能分析结果表明,片球菌素pediocin PA-1与溶菌素主要通过破坏细菌细胞壁与细胞膜,从而达到抑菌效果。LysM peptidoglycan-binding domain-containing protein可识别含有N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)残基的肽聚糖,上调抗菌肽的表达;辅助蛋白主要参与细菌素的合成,聚酮合酶主要参与抗生素的合成,二者通过参与抑菌物质的合成间接发挥抑菌作用。【结论】本研究成功分离并鉴定植物乳杆菌GX20200417-1的5种抑菌蛋白;植物乳杆菌GX20200417-1可能通过其代谢产物中的多种抑菌蛋白协同发挥抗菌作用。     

鸽小肠黏膜乳酸菌的分离及鉴定方法研究

无菌采集鸽小肠黏膜研磨稀释,取1×10-3稀释上清液0.1mL涂布接种改良TJA培养基,37.5℃烛缸法培养24h,分离鸽源乳酸菌。通过菌落形态、革兰氏染色、生化鉴定9株菌株,确定PI1、PI2为粪肠球菌,PI3～PI7为嗜酸乳杆菌,PI8为戊糖乳杆菌,PI9为枯草芽孢杆菌。其中PI7、PI8在液体培养基中产酸能力强,无毒性,该试验为鸽源乳酸菌制剂的深入研究打下了基础。     

自然发酵泡菜汁中植物乳杆菌的分离鉴定与体外益生特性研究

利用MRS固体培养基从自然发酵的泡菜汁中分离到1株优势乳酸菌,将其命名为菌株R1,经16S rRNA基因序列分析,并结合生理生化特性和糖发酵试验将其鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。菌株R1具有很强的产酸能力,24 h内可使MRS液体培养基p H从6.14降为3.59。菌株R1的发酵上清液对痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鸡肠炎沙门氏菌、大肠埃希氏菌均有很好的抑制作用。体外益生试验表明,菌株R1能耐受0.3%的胆盐、p H 3.0的酸度以及60℃、30 min的热处理,对人工胃液和人工肠液也有很好的耐受性。菌株R1对头孢类和青霉素类抗生素较敏感,对诺氟沙星、卡那霉素、链霉素等抗生素不敏感。     

Isolation,Identification and Drug Susceptibility Test of Pseudomonas aeruginosa in Chickens

In order to detect the main bacterial pathogens and analyze the drug resistance for providing therapeutical guidance for drug administration,4 stains were isolated from death chickens of a breeding chicken farm in Qinhuangdao area.All 4 isolates were identified by morphological characteristics,biochemical test,immunofluorescent staining,amplification of 16S rRNA genes by PCR,sequence analysis and drug susceptibility test.The results showed that all 4 isolates were gram-negative,bacillus brevis with green fluorescent,and the sequence of 16S rRNA gene of isolates were analyzed and test results showed that specific amplified band was consistent with the expected size.The isolated bacteria were identified to be Pseudomonas aeruginosa.Results of drug susceptibility test indicated that the bacterial isolates were highly sensitive to gentamycin,amikacin,spectinomycin,ceftazidine,ceftriaxone,levofloxacin,enrofloxacin,florfenicol,polymyxin B and fosfomycin,intermidiate sensitive to tetracycline and doxycyclin,resistant to neomycin,cefotaxime,cephalothin,amoxicillin,ampicillin,erythromycin,trimethoprim-sulfamethoxazole and oxygen sulfamethoxazole isoxazole.The results suggested that the resistances of Pseudomonas aeruginosa isolates to commonly used antibiotics were serious.So antibiotics should be reasonably selected based on the result of drug susceptibility test in this farm.     

鸡源绿脓杆菌的分离鉴定及药敏试验

为确诊引起秦皇岛某鸡场细菌性疾病的主要病原菌,分析其耐药情况,为临床用药和治疗提供依据,本试验对送检的病死鸡肝脏中分离得到的4株菌进行形态特征观察、生化鉴定、免疫荧光染色观察、细菌16S rRNA基因PCR扩增与测序分析及药敏试验.结果显示,4株分离菌均为革兰氏阴性、带绿色荧光的短杆菌,PCR扩增出的特异性条带与预期大小相吻合,确定为绿脓杆菌.药敏试验结果显示,分离株对庆大霉素、阿米卡星、大观霉素、头孢他啶、头孢曲松、左氧氟沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、多黏菌素B和磷霉素高度敏感,对四环素和强力霉素中度敏感,而对新霉素、头孢噻肟、头孢噻吩、阿莫西林、氨苄西林、红霉素、复方新诺明和磺胺甲氧异唑耐药.提示,该分离菌对常用抗生素耐药情况严重,养殖场应根据药敏试验结果选择敏感药物进行合理用药.     

蛋鸡肠道嗜酸乳杆菌的分离鉴定及益生特性研究

为筛选具有益生特性的嗜酸乳杆菌,采用常规方法从山东省潍坊市及周边地区蛋鸡肠道内容物样本中分离乳酸菌。通过测定发酵液p H值,筛选产酸性能较好的菌株;采用PCR及测序技术对筛选到的菌株进行分子生物学鉴定;采用常规方法评价筛选到的菌株的益生特性。在分离到的9株乳酸菌中,筛选到1株产酸性能较好的菌株(命名为XMR-3),分子生物学鉴定结果显示,该菌株为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)。该菌株在培养6 h之后进入对数生长期,至16 h时,活菌数最高,此时培养液p H值为3.92;在p H值为3.0和4.0的酸性环境中培养4 h后,存活率均在99%以上;在0.3%的胆盐环境中,存活率为87.3%;对4种常见致病菌的抑菌圈直径均在20 mm以上。筛选到的菌株表现出一定的益生特性,在畜禽微生态制剂产品开发方面具有应用潜力。     

鸡大肠杆菌的分离与鉴定

从陕西关中某鸡场分离到1株革兰氏阴性杆菌,经细菌学分离鉴定为鸡大肠杆菌,对小白鼠有极强的致病作用。药敏试验结果表明:该菌株对氯霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素等抗生素高度敏感,对青霉素、诺氟沙星、环丙沙星等抗生素不敏感。     

猪源肠道嗜酸乳杆菌的分离、鉴定与驯化

本文旨在分离筛选适于在猪肠道生长的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌株。选用仔猪新鲜粪便,利用MRS培养基,以平板划线法分离纯化菌株;采用形态、生理生化和16 SrRNA基因序列分析对分离菌株进行鉴定;通过逐步提高培养基酸度、胆盐浓度和培养温度,对分离菌株进行驯化。结果表明:1)经分离纯化获得的菌株La-5,被鉴定为嗜酸乳杆菌。2)驯化后的菌株La-5c在pH=1.5~3时存活率比原始菌株La-5高出36%~44%,极低pH(1.5)条件下仍有37%的存活率。3)在0.03%~0.3%胆盐中的存活率为85%~90%,而原始菌株La-5为28%~53%。4)在50℃时的存活率为66.1%,而原始菌株La-50.01%。由此可见,与仔猪粪便分离纯化的嗜酸乳杆菌原始菌株La-5比较,驯化获得的菌株La-5c具有耐低pH、高浓度胆盐及高温的特性。     

鸡肠道芽胞杆菌的分离鉴定及产蛋白菌株的筛选试验

本试验从鸡肠道中分离出菌种50株,通过对菌种菌落培养特性、形态观察、生理生化实验,初步鉴定出8株为芽胞杆菌。经产蛋白菌株的筛选试验筛选出1株能够分泌蛋白的芽胞杆菌,该菌株可望成为外源蛋白高效分泌表达的宿主。