老瓜头悬浮细胞培养及基质消耗规律的初探

[目的]为老瓜头资源利用提供前期的生物技术试验参考。[方法]以老瓜头愈伤组织为外植体,运用正交设计试验,进行细胞悬浮培养,对接种量及悬浮培养基进行筛选试验研究,并测定了老瓜头细胞悬浮培养过程中硝酸盐、氨盐、磷酸盐、蔗糖及可溶性总糖含量的消耗。[结果]老瓜头愈伤细胞最佳液体培养基为不添加任何激素的MS培养基;其最适接种量为40 g/L;黑暗培养条件适合其细胞生长,其生长周期较短,生物量大;在老瓜头细胞培养初期(0~9 d),培养中的硝酸盐、氨盐、磷酸盐、蔗糖含量均呈急剧下降趋势,分别为初始含量的7.19%、21.53%、0.28%、1.53%,之后各自变化趋于平缓。[结论]初步建立了老瓜头悬浮细胞培养技术体系。     

老瓜头内生真菌LGT-LA代谢产物研究

[目的]为科学利用老瓜头及其内生真菌提供参考。[方法]采用多种色谱分离技术,对老瓜头内生真菌LGT-L4发酵物乙酸乙酯萃取部分进行分离纯化,并通过核磁共振(NMR)、质谱等波谱方法对分离得到的化合物进行结构鉴定。[结果]从老瓜头内生真菌LGT-L4发酵物乙酸乙酯萃取部分分离得到5个化合物,分别为对羟基苯甲醛、尿嘧啶苷、L-焦谷氨酸、甲基焦谷氨酸和蔗糖。[结论]明确了老瓜头内生真菌LGT-L4代谢产物。     

老瓜头不同极性段的杀虫活性

研究通过溶剂提取法、萃取和蒸馏获得不同极性段的老瓜头提取物。以枣飞象、粘虫、小地老虎和山楂叶螨为试虫,采用小叶碟法和玻片浸渍法对不同活性段提取物进行杀虫活性测定并对活性提物段进行柱层析获得活性成分。结果表明,正丁醇提取物对枣飞象、粘虫和小地老虎的杀虫活性较好,胃毒处理48 h校正死亡率分别为73.4%、72.3%和68.2%,触杀处理48 h校正死亡率分别为64.8%、63.9%和42.4%。采用柱层析法对老瓜头正丁醇提取物进行分离,表明活性成分主要集中在X4组分,胃毒处理48 h,对枣飞象、粘虫和小地老虎的校正死亡率大于90%,触杀处理48 h,校正死亡率为70%～80%。研究表明老瓜头正丁醇提取物具有较好的杀虫作用,为开发老瓜头植物源杀虫剂奠定理论基础。     

老瓜头耐盐内生真菌抗真菌活性筛选研究

[目的]对荒漠植物老瓜头(Cynanchum komarovii Al.Iljinski)中以稻瘟霉模型初筛得到的耐盐内生真菌进行抗真菌活性复筛。[方法]采用微量液基稀释法,以白假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、新生隐球菌、石膏状小孢子菌、红色毛癣菌、烟曲霉菌等8株常见病原真菌为活性筛选菌株,进行抗真菌活性复筛,检测供试品的最低抑菌浓度(MIC)。[结果]菌株5%-11对新生隐球菌有一定的抑制活性(MIC=32μg/ml),其他菌株对8株常见病原菌的活性较弱(MIC64μg/ml)。[结论]复筛得到一株对新生隐球菌有抑制活性的耐盐内生真菌。     

白背三七悬浮细胞培养体系的建立

目的:建立稳定的白背三七悬浮细胞培养体系。方法:采用植物组织培养技术,探讨初始接种密度、装液量、初始pH值、激素种类及浓度4个因素对白背三七细胞悬浮培养的影响。结果:白背三七细胞悬浮培养的适宜条件为:B5基本培养基+0.5mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+30g/L蔗糖,pH 7.0,装液量为40%,初始接种密度为90g/L(鲜质量),弱光培养。在此优化条件下,细胞生长呈S形曲线;培养过程中,培养基的pH呈先下降后缓慢升高的变化趋势;细胞活力的变化稍滞后于生长曲线,逐渐降低。     

怀牛膝悬浮培养细胞生理生化特性研究

为了研究怀牛膝悬浮培养细胞生理生化特性,对细胞生长曲线、多糖含量、可溶性蛋白含量、POD活性、SOD活性、培养液p H值、电导率进行了测定。结果表明:细胞生长曲线呈"S"型,可分为延迟期(0~6 d)、指数生长期(6~12 d)和缓慢生长期(12~21 d)3个阶段;多糖含量在6 d达到第1个高峰后即呈现下降趋势,在15 d达到第2个高峰(比第1个峰值低);可溶性蛋白含量在9 d达到峰值;POD活性在15 d达到高峰;SOD活性在12 d达到峰值,之后下降并维持在一定水平;悬浮培养液的p H值先下降后上升;培养液的电导率在12 d降至最低点,与细胞生长呈现一定的相关性。怀牛膝悬浮培养细胞生理生化特性的变化存在一定规律性。     

马铃薯悬浮细胞培养体系构建的研究进展

马铃薯悬浮细胞培养体系在马铃薯应用研究中尤为重要,是进行马铃薯育种学研究、基因工程研究的基础.其中构建细胞培养体系可大致分为4个过程,即外植体选择、愈伤组织培养、愈伤组织继代、悬浮细胞培养体系构建.本文着重对马铃薯悬浮细胞培养体系建立及其在培育新品种、脱毒薯培育、构建马铃薯种质资源基因库和应用生物转化反应器方面的应用进...     

老瓜头离体根与毛状根的诱导培养

以老瓜头茎段为外植体筛选诱导离体根再生的最适培养基,以老瓜头茎段和叶片为外植体筛选发根农杆菌介导的毛状根诱导产生的最适条件,为老瓜头毛状根的大量培养及有效成分利用提供前期的试验参考.结果表明,添加NAA的MS培养基诱导老瓜头离体根再生的效果明显,带腋芽茎段的生根率可达到100%,不带腋芽的茎段生根率为67.5%;含有IBA的培养基上,带腋芽的茎段生根率低,只有3.9%,不带腋芽的茎段无根生出.以发根农杆菌A4菌株介导的老瓜头毛状根诱导过程中,用D600 nm=0.8的菌液侵染叶片15 min,诱导率及诱导密度最高,分别为100%和4.6;用D600 nm=0.8的菌液侵染茎段(不带腋芽)15 min时,诱导率最高达46.7%.老瓜头茎段在添加NAA的MS培养基上容易生根;最适转化条件为发根农杆菌A4菌液浓度D600 nm=0.8,侵染15 min,800 mg/L头孢噻肟钠除菌;叶片是遗传转化最适外植体.     

苦豆子浸提物对老瓜头种子萌发的化感作用

不同溶剂的苦豆子浸提物对老瓜头种子的萌发均具有明显的抑制效应.乙醇、甲醇、丙酮和蒸馏水的苦豆子浸提液处理的老瓜头种子,萌发率分别为55.00％、62.50％、57.50％、40.00％,均显著低于对照(83.38％,P＜0.05),而且表现出萌发进程延迟、萌发指数和幼苗活力指数减小,其中以蒸馏水浸提物对种子萌发的化感作用最为显著.     

白首乌的组织培养条件的优化

以白首乌茎段、叶片、茎尖和带腋芽茎段为外植体,进行离体培养植株再生研究,结果表明：适合初代诱导的培养基为：MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1,诱导率可达100%;最佳外植体是带腋芽茎段;芽苗增殖的最佳培养基为：MS+KT 1.5 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1,增殖系数为5.6;生根培养基为：1/2 MS+NAA 0.5 mg·L-1,生根率为93.3%。     

齐口裂腹鱼苗种培育及其苗种生长特性分析

[目的]掌握齐口裂腹鱼苗种的生长特性及发育规律,为其苗种培育积累基础资料并提供技术支撑.[方法]采用流水单养培育模式,在水温15.9~24.2℃、养殖密度200尾/m3的人工养殖条件下,将齐口裂腹鱼苗种培育至130日龄,期间每隔10 d随机抽样10尾苗种进行全长、体长和体质量等生物学指标测量,并分析齐口裂腹鱼苗种的生长特性.[结果]从10~130日龄,齐口裂腹鱼苗种的平均体质量从35.38±2.73 mg/尾增长到2001.92±33.84 mg/尾,增幅为5558.34%,对应的体质量变异系数范围在1.55%~7.70%;平均体长从13.18±0.29 mm/尾增长到50.20±1.96 mm/尾,增幅为280.88%,对应的体长变异系数范围在1.31%~6.87%;平均成活率为71.0%.齐口裂腹鱼苗种体质量特定生长率范围在(0.92±0.29)%/d~(6.71±0.48)%/d,体长特定生长率范围在(0.47±0.25)%/d~(1.88±0.83)%/d,除120和130日龄外,体质量特定生长率均高于体长特定生长率;肥满度变化范围在1.23±0.06~3.22±0.15,整体上呈先升高后降低的变化趋势.齐口裂腹鱼苗种体长与体质量的拟合方程为y=0.0049x3.4473(R2=0.9689,P<0.01),b为3.4473,即呈异速生长;在水温17.0~23.0℃的范围内,齐口裂腹鱼苗种生长状况良好,体质量和体长的特定生长率在该水温区间范围内相对较高.在齐口裂腹鱼苗种的整个生长阶段,其种群生长离散呈加剧—减弱—加剧的变化规律.[结论]在人工养殖条件下,17.0~23.0℃是齐口裂腹鱼苗种适宜的生长水温范围.在齐口裂腹鱼苗种培育过程中,应根据不同日龄阶段的生长特性,控制适宜养殖条件,分阶段优化投喂策略,以促进齐口裂腹鱼苗种的快速生长.     

青阳参组培快繁技术的研究

以青阳参的成熟种子获得无菌苗,去除下胚轴和子叶作为外植体,诱导腋芽的萌发和不定芽增殖生根。结果表明：适宜的增殖培养基是MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．2mg／L＋蔗糖3％,每个外植体的平均芽数为3．36个;适宜的诱导生根生长调节剂是ABT1号50mg／L,生根率达到100％,平均根数为4．72条;移栽后成活率可达到90％以上。     

水稻悬浮细胞培养过程中3个逆转座子的转录与转座特性

【目的】在水稻悬浮细胞培养不同时期研究3个具有多逆境应答特征逆转座子相关基因的转录与转座特性,为揭示该类基因的生物学功能奠定理论基础。【方法】以水稻品种月亮谷为材料进行悬浮细胞培养,以实时荧光定量PCR检测不同培养时期材料的3个逆转座子相关基因Tos17、Os05g24920和Os01g02040相对表达量及拷贝数的变化,初步分析其转录活性与转座活性。【结果】在培养期间,Os01g02040、Os05g24920、Tos17转录活性呈先升高后下降的变化趋势,其最高转录活性分别出现在培养期的第3个月和第6个月,相对表达量分别为71.84、41.26和53.20倍;Tos17保持较稳定的转录活性,其他2个基因在组培6个月后转录活性迅速下降。在培养3个月后,Os01g02040和Os05g24920的转座活性变化较稳定,相对拷贝数变化范围为2.14-2.64和2.76-5.03倍;Tos17转座活性变化极明显,拷贝数不断提高,至第14个月达12.13倍,明显高于其他两个基因。【结论】在细胞悬浮培养过程中3个逆转座子相关基因均被强烈激活进行转录,但其转录调控和转座调控途径不同。     

生长素和细胞分裂素对悬浮培养人参细胞生长和皂苷合成的影响

为探明人参细胞悬浮过程中植物生长调节剂对细胞生长和皂苷合成的影响,调查IBA、NAA、2,4-D单独使用及IBA与BA和IBA与KT混合使用的效果,结果表明,在2,4-D处理中细胞生物量虽然高于IBA和NAA,但总皂苷含量低于IBA和NAA处理;在生长素单独使用处理中,IBA 7 mg/L处理的皂苷生产量最高（72.9 mg/L）.当IBA 7 mg/L与BA或KT混合使用时,促进细胞生长和皂苷合成,其中IBA 7 mg/L＋BA0.5 mg/L和IBA 7 mg/L＋KT 0.5 mg/L处理中,皂苷生产量明显提高,分别达到115.92和120.98 mg/L.因此,在进行人参细胞悬浮培养时,IBA 7 mg/L与BA 0.5 mg/L或KT混用可高效生产人参皂苷,为食品及药品生产提供安全的原料.     

稀土元素对银杏悬浮培养细胞生长和次级代谢产物积累的影响

稀土元素对银杏悬浮培养细胞生长和次级代谢产物积累的影响试验结果表明，低浓度的硝酸铈铵对银杏细胞的生长影响不大，高浓度则抑制细胞生长，10.0mg/L的硝酸镧对促进细胞生长的效果最好；硝酸铈铵和硝酸镧对银杏黄酮积累的促进作用不明显，但能促进银杏萜内酯的积累，硝酸铈铵的添加浓度以1.0mg/L为好，硝酸镧的适宜添加浓度则培养当天为10.0mg/L、培养第10天为1.0mg/L。     

Cell culture perfusion chamber: adaptation for microscopy of clonal growth

Silicone rubber O-rings used as gaskets in Sykes-Moore cell culture perfusion chambers are permeable to carbon dioxide. When small numbers of cells are planted in such chambers, loss of carbon dioxide leads to an undesirable increase in pH and inhibits cell multiplication. Substitution of Teflon O-rings prevents this loss and allows a constant carbon dioxide tension to be maintained within the chamber. The rate of growth and plating efficiency of small numbers of cells planted in the modified chambers have been found to be comparable to those observed in conventional culture vessels. The necessary additional parts of the chamber are described, and the modifications in procedure outlined.     

花卉植物水培根系生长研究

试验表明,含有一定浓度NAA的水培营养液对花卉水培根系生长的速度和质量有一定的促进作用,同时水培植物根系生长是诸多因素影响的结果,各具特点的植物只有在适宜的温度、光照等环境条件下,经过适当的处理和维护才能较好的适应水培这种新型栽培形式.