南昌霉素A产生菌原生质体诱变选育研究

南昌霉素A(Nanchangmycin A)产生菌——南昌链霉菌(Streptomyces nanchangensis)的原生质体经不同浓度NTG处理以后,分别采用抗药性诱变筛选和随机筛选选育高产菌株,通过连续3批次摇瓶发酵筛选出高产菌株400-N-4s,其产南昌霉素A的能力比出发菌株116-3r-68提高了20％以上。同时,经过对两种筛选结果进行统计学分析,结果表明,采用抗药性致死标记技术,可以有效的提高抗生素高产菌株的选育效率,得到较好的结果。     

南昌霉素A产生菌原生质体诱变选育

南昌霉素 Ａ 产生菌———南昌链霉菌（ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｎａｎｃｈａｎｇｅｎｓｉｓ） Ｎ Ａ Ｗ － ３ 菌株经原生质体再生及原生质体紫外线照射处理后,通过摇瓶发酵筛选出高产株 Ｎ Ａ Ｗ－ ３（１） ,其产南昌霉素 Ａ 能力由出发菌株 Ｎ Ａ Ｗ － ３ 的１ ３８３ 单位／ ｍ Ｌ,提高到１ ８９５ 单位／ｍ Ｌ,产素能力提高了３７ ％ 。     

60Co γ射线对南昌霉素产生菌的诱变选育

采用不同剂量的60 Coγ射线 ,对南昌霉素产生菌———南昌链霉菌 80 - 5 .3- 116菌株的孢子进行处理。结果表明 ,3万仑琴的诱变剂量在对孢子致死率 90 %左右时 ,具有较好的诱变效应 ;初筛摇瓶产量正变率达到2 1.0 8% ;复筛摇瓶发酵单位比出发菌株提高 5 0 %以上的有 10株 ,占初筛菌株的 5 % ;连续 4批摇瓶发酵试验平均产量比出发菌株的产量提高 5 0 %以上 ;有 6个菌株摇瓶产量分别比出发菌株提高 6 0 %和 70 %以上     

南昌霉纱A产生菌原生质体诱变选育

南昌霉素Ａ产生菌－南昌链霉菌ＮＡＷ－３菌株经原生质体再及原生质体紫外线照射处理后,通过摇瓶发酵筛选出高产株ＮＡＷ－３（１）,其产南昌霉素Ａ能力由出发菌株ＮＡＷ－３的１３８３单位／ｍＬ,提高到１８９５单／ｍＬ,产纱能力提高了３７％。     

梅岭霉素产生菌的微波诱变

以微波对梅岭霉素产生菌进行了微波育种．获得梅岭霉素生产能力高于出发菌株73％的W4-311。该菌株经多次传代,遗传性状保持稳定。     

纳他霉素高产菌株的诱变选育

以褐黄孢链霉菌(ATCC13326)为出发菌株,紫外诱变后,结合链霉素抗性筛选法选育纳他霉素高产菌株.原始菌株活化后,测定其最小链霉素抑制质量浓度为8 μg/mL.采用90% 的紫外致死剂量,照射108 mL-1 ATCC13326孢子悬液,诱变后涂布于8 μg/mL链霉素选择培养基上,筛选链霉素抗性突变株.通过形态指标初步选择5株突变株进行发酵性能测定,种子培养26 h,摇瓶发酵96 h,用紫外分光光度计在303 nm下测定其吸光值,计算纳他霉素发酵产量.结果表明原始菌株纳他霉素发酵产量为1.229 g/L,诱变获得的两株高产突变株纳他霉素发酵产量分别为1.552和1.776 g/L,分别高出原始菌株26.3%、44.5%.     

NTG诱变选育抗逆性蜡蚧轮枝菌及其生物学特性测定

采用NTG对杀虫真菌蜡蚧轮枝菌进行诱变选育,期望获得抗逆性显著增强的菌株,以提高其在田间应用的适应性。以VL-18为出发菌株,用4mg/mL的NTG诱变处理120min,得到耐热性明显提高的诱变菌株NTG-2。抗逆性研究结果表明,NTG-2菌株经40℃水浴处理20min,孢子萌发率比原始菌株提高了251.4%,0.5min内的紫外耐受力提高了145.7%,酸碱耐受力无显著变化。毒力测定结果显示,第5天突变菌株NTG-2对蚜虫的致死中浓度(LC50)比原始菌株降低了98.4%,表明突变菌株的杀虫毒力增强。经多代培养检测,突变菌株的抗逆遗传性能相对稳定。研究表明,通过NTG诱变获得的NTG-2菌株在抗逆方面较原始菌株有所提高。     

紫外诱变结合链霉素抗性选育小诺霉素高产菌株

以自然筛选的小诺霉素产生菌XDBJ-CF为诱变选育的出发菌株,经最适照射剂量60 s的紫外诱变后,在含20μg/mL链霉素的高氏平板上培养,获得链霉素抗性突变株。突变株摇瓶初筛试验显示,高产突变株的数量大于低产突变株。从正突变株中挑选相对发酵单位130%以上的16株高产突变株进行摇瓶复筛,获得2株小诺霉素高产突变株XDBJ-CF-09-24、XDBJ-CF-09-90,其小诺霉素产量分别比出发菌株提高37.8%和46.3%,C_2b组分分别较出发菌株提高10%和20%。     

氮离子注入井冈霉素产生菌诱变高产菌株的研究

探索了氮离子注入技术在井冈霉素产生菌高产菌株诱变中的应用。向井冈霉素产生菌注入能量10 keV、剂量15×1013个/cm2氮离子实施诱变,再生培养后单菌落接斜面上摇床进行效价测定,筛选高产菌株。结果获得诱变菌株9275#,其有效A组分含量较出发菌株提高33.52%,且具有高的遗传稳定性。     

NTG-LiCl复合诱变选育链霉菌702菌株

为筛选出产新农抗702的高产链霉菌702突变株.分别以链霉菌702菌株为试验材料和以庆大霉素为敏感抗生素,NTG-LiCl复合诱变链霉菌702菌株,获得抗庆大霉素突变株.NTG处理90 min对菌株的致死率可达71.56%,抗药性突变率高达19.46%,获得的抗药性突变株经过摇瓶初筛和复筛,获得高产突变株13-18-52菌株,产抗新农抗702的摇瓶发酵单位达到1 946 μg/mL,比出发菌株发酵单位1 416 μg/mL提高了37.43%.采用抗药性致死突变标志的NTG-LiCl复合诱变筛选模型可以获得产新农抗702的链霉菌702高产菌株.     

巴氏芽孢八叠球菌诱变选育脲酶高产菌株

脲酶催化尿素的水解生成形成铵根离子和碳酸根离子,具有广泛的应用价值。以巴氏芽孢八叠球菌ATCC11859为出发菌株, 通过亚硝基胍诱变,得到高产脲酶突变株。其中菌株B\|20的脲酶活性最高,为28.4 mmol/min,较出发菌株提高了207%。对该菌株接种量、氮源种类培养条件进行优化,结果表明接种量为10%,且采用大豆粉为氮源时,脲酶活性最高为32.9 mmol/min。对脲酶高产菌株的选育表明该方法是一种行之有效的方法。     

~(60)Co-γ射线诱变选育弱后酸化乳酸菌株

选择剂量为60、80、100 kR的60Co-γ射线对保加利亚乳杆菌G4进行诱变处理,根据突变株的生长情况及产酸特性筛选出G4-1、G4-2、G4-3三株弱后酸化乳酸菌。此3株突变菌在酸奶的贮藏试验中表现出良好的弱后酸化特性,在4℃和10℃下贮藏25 d,酸奶的pH值变化很小。     

热凝胶多糖产生菌株的复合诱变选育

[目的]提高热凝胶多糖产量和凝胶特性。[方法]采用紫外线和亚硝基胍对土壤杆菌714进行诱变;通过平板-摇瓶筛选方法,得到2株高产菌。[结果]突变菌株0.6-45和0.5-50的热凝胶多糖粗提得率分别为26.5和26.4 g/L,分别是出发菌株粗提得率(3.8 g/L)的7.0和6.9倍,热凝胶多糖精提得率分别为19.4和18.0 g/L。凝胶特性分析表明,突变菌株热凝胶多糖凝胶的破裂强度、破裂位移、弹性、内聚性、恢复性较好,均高于市售样品,而凝胶强度、硬度、胶着性和咀嚼性低于市售样品。GPC测定菌株0.6-45和菌株0.5-50产热凝胶多糖的MW分别为1.57×10~6和1.27×10~6Da。[结论]复合诱变提高了热凝胶多糖的产量并改善了多糖的凝胶特性。     

高产蛋白酶芽孢杆菌的选育及其在大豆活性肽制备中的应用

为降低抗生素替代品——大豆活性肽绿色饲料添加剂的生产成本，采用紫外线与亚硝基胍(NTG)多重诱变的方法选育芽孢杆菌CAU208．以提高产蛋白酶能力。结果显示：15W紫外灯最适照射时间3min，距离30cm；亚硝基胍最适质量浓度为1mg／mL，且效果好于前者，两者复合诱变比单一诱变效果好。将诱变选育的蛋白酶高产菌株No．111用于液态发酵制备大豆肽饲料添加剂。60h发酵液的水解度为26．9％，比母本菌株CAU208的水解度18．5％提高了8个百分点。如果两者达到相同的水解度(19．0％)，则No．111比CAU208的发酵周期缩短约12h。10次传代实验表明该菌株遗传性能稳定。     

亚硝基胍诱变丙酸杆菌选育高产抑菌物质菌株

[目的]提高丙酸杆菌代谢物的抑菌活性,为薛氏丙酸杆菌代谢物的工业化生产奠定基础。[方法]以实验室保藏的薛氏丙酸杆菌H1310为出发菌株,采用亚硝基胍(NTG)进行诱变处理,待突变菌株长出后采用双层平板筛选法进行筛选,而后通过深层液体发酵对筛选到的菌株进行复筛。[结果]当最优的NTG诱变浓度为0.3 mg/m L时,致死率为90.69%。采用双层平板法,从3 564株菌落中挑选出87株突变株,进一步进行复筛,获得一株突变菌株,其代谢物抑菌活性达(28.30±2.47)AU/m L,比出发菌株提高43.87%。[结论]确定了丙酸杆菌NTG诱变选育的试验方法,获得一株抑菌活性高的遗传性能稳定的菌株。