攸县油茶胚状体发生及其组织学观察

[目的]研究以攸县油茶(Camellia yuhsienensis Hu)成熟子叶为外植体的胚状体发生情况。[方法]以子叶为外植体,接种于MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT培养基上,诱导胚性愈伤组织。胚性愈伤组织块转接至以MS为基本培养基,添加不同浓度6-BA和NAA的激素组合的培养基上诱导产生胚状体。取不同发育阶段的组织块制作石蜡切片,进行组织学观察。[结果]成熟子叶块接种于诱导培养基MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT,15d左右开始出现胚性愈伤组织。胚性愈伤组织转接至培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA时胚状体诱导率最高,为87.78%;无激素培养基也能诱导胚性愈伤组织产生胚状体,但诱导率极低,仅为6.67%。组织学观察表明,胚性细胞由愈伤组织表面及其内部邻近的若干细胞分化而来,经过球形胚、心形胚、子叶形胚等不同发育阶段直至成熟胚状体。[结论]诱导胚性愈伤组织分化为胚状体的最佳培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA。     

海南地区油茶未成熟胚分生结节的植株再生

[目的]建立海南地区油茶未成熟胚再生体系,为油茶组培快繁和遗传转化研究提供技术支持.[方法]以海南本地油茶合子胚为外植体,对其进行初代诱导、分化和增殖培养,筛选出最适于诱导分化的外植体胚发育时期,明确植株再生途径,从而建立分生结节组织植株再生体系.[结果](1)盛花期后240~300 d的油茶幼胚在改良MS+激动素(KT)2.0 mg/L+萘乙酸(NAA)0.2 mg/L+玉米素(ZT)5.0 mg/L培养基上,初代诱导率在90.0%以上,以分生结节组织为主;(2)分生结节组织的适宜增殖培养基为改良MS+KT 1.0~2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,增殖系数约4.6;(3)未成熟胚分生结节组织的分化培养基为改良MS+6-苄氨基嘌呤(6-BA)2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+吲哚-3-乙酸(IAA)0.2 mg/L+ZT 5.0 mg/L+酸水解酪蛋白(CH)400.0 mg/L,平均每块分生结节组织诱导不定芽11.3个,不定芽以无糖暴露培养生根方式生根,移栽成活率为91.6%;(4)分生结节组织在改良MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+ZT 5.0 mg/L+CH 400.0 mg/L上以分化体细胞胚状体为主,每块分生结节分化6.5个体细胞胚状体,具双子叶的体细胞胚状体在改良MS+6-BA 0.2 mg/L+IAA 2.0 mg/L+赤霉酸(GA3)0.5 mg/L+CH 200.0 mg/L培养基上有效成熟和萌发,萌发率为72.1%,胚芽和胚根有效伸长形成体胚再生植株,移栽成活率为94.7%.[结论]以油茶未成熟合子胚为外植体,通过分生结节组织方式增殖,可经体细胞胚状体发生和不定芽发生两种途径成功建立海南油茶未成熟胚分生结节植株再生体系.     

杂交构树体细胞胚诱导研究

以杂交构树叶片为材料,建立通过愈伤组织制备体细胞胚的技术途径。结果表明,光照强度750 lx、构树幼叶面积4~5 cm~2有利于诱导愈伤组织。最佳诱导培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D,pH值6.0,其愈伤组织诱导率达94.6%。构树愈伤组织最佳继代培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT,p H值6.2,愈伤组织增殖速度快。选择表面颗粒多、质地松软、浅黄色或白色的愈伤组织进行体细胞胚诱导,最佳诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,p H值6.4,体细胞胚的发生频率达到96.0%。     

小桐子胚愈伤组织耐盐性研究

[目的]筛选耐盐性较强的小桐子新品种。[方法]以小桐子种胚为材料,采用含不同浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)和吲哚丁酸(IBA)组合的培养基对其进行愈伤组织诱导,筛选出最佳诱导培养基;在最佳诱导培养基中分别加入0、20、40、60、80、100 mmol/L NaCl对小桐子胚愈伤组织进行诱导,研究胚愈伤组织的耐盐性。[结果]小桐子胚愈伤组织的最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+0.1mg/LIBA;胚愈伤组织在含40、60 mmol/LNaCl的培养基上生长状况最佳,当培养基中NaCl浓度达到100 mmol/L时,小桐子胚愈伤组织无法存活。[结论]在MS+1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/LIBA培养基中,小桐子胚愈伤组织具有较好的耐NaCl性。     

地中海蓝钟花(Scilla peruviana)的叶片胚状体诱导及不定芽发生

[目的]建立地中海蓝钟花(Scilla peruviana)的离体快繁体系.[方法]以地中海蓝钟花的叶片为外植体进行离体培养,研究不同培养基对叶片诱导胚状体及不定芽发生的影响.[结果]适于地中海蓝钟花叶片愈伤组织诱导及胚状体发生的培养基为MS+ 6-BA 1.0mg/L+ NAA 0.1 mg/L,不定芽分化培养基为MS+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA0.5mg/L.[结论]该研究为地中海蓝钟花的快速稳定繁殖提供较好的技术支持.     

环草石斛种子萌发培养的研究

研究结果表明：环草石斛成熟种子播种在培养基上．无论在光照或黑暗条件下,种胚均能萌发产生原球茎,既可直接成苗．又能继续增殖．诱导产生完整植株。种胚萌发的适宜培养基为MS NAA 0．2mg／L 6-BA 0．2mg／L;原球茎增殖适宜的培养基为MS NAA 0．5mg/L 6-BA 0．2mg/L;试管苗壮苗培养基为MS NAA 1mg／L 6-BA 0.5mg／L。     

牡丹种子胚培养研究

对牡丹种子进行不同材料处理后,在不同光照及不同培养基条件下,对牡丹胚进行离体培养。结果表明,牡丹种子经4℃砂藏后胚培养萌芽快,且萌芽率高达82.5%;在先黑暗后光照的培养条件下,牡丹胚的萌芽率最高;胚培养最佳培养基为M S 6-BA 0.5m g/L NAA 0.2m g/L;胚苗继代培养最适培养基为M S 6-BA 1.0m g/L NAA 0.1m g/L;胚诱导愈伤组织最适培养基为M S 6-BA 0.5m g/L 2,4-D 2.0m g/L;胚诱导苗生根最佳培养基为M S IAA 0.5m g/L。     

伊贝母种胚的离体培养

【目的】研究了不同温度、光照时间和激素组合对伊贝母种胚诱导及植株再生的影响.【方法】试验以伊贝母种胚为试验材料,接种于添加了不同激素种类及质量浓度的培养基上,置于不同条件下培养,筛选出伊贝母最佳培养基组合及培养条件.【结果】20℃,12h/d的光照时间为伊贝母种胚诱导的最适条件,诱导率可达72.22%.适合伊贝母种胚不定芽诱导的最佳培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+2.0mg/L NAA,出芽率达到75%,分化出的不定芽生长健壮;继代增殖培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA,增值系数为6.15.【结论】1/2MS+0.5mg/L NAA为生根的最适宜培养基.     

东北刺人参愈伤组织诱导和继代的研究

[目的]研究东北刺人参愈伤组织的诱导和继代方法。[方法]以取自长白山的刺人参植株为材料,研究不同外植体、培养基、激素对刺人参愈伤组织诱导的影响。[结果]叶片为刺人参组织培养的最适宜外植体;5月为外植体的最佳取材时期;以MS为基本培养基,并添加1.0 mg/L 2,4-D和1.0 mg/L 6-BA的培养基中愈伤组织诱导率最高;最佳继代培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2mg/L。[结论]东北刺人参的最适愈伤诱导培养基和继代培养基分别是:MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L和MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L。     

新铁炮百合品种沈香一号的幼胚培养研究

以新铁炮百合沈香一号(Lilium formolongi cv.Shenxiang No.1)的幼胚为试材,筛选适宜百合幼胚萌发的诱导培养基,结果表明,适宜的诱导培养基为1/2MS,萌发时间在接种后的22～43d之间。6-BA和NAA的浓度比与新铁炮百合幼胚的发芽率之间呈现出显著的相关性,在一定范围内,6-BA和NAA的浓度比越大,胚的萌发率越低。试验筛选出适宜新铁炮百合胚分化不定芽的诱导培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L,继代增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L及MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.4mg/L。新铁炮百合试管苗易出现玻璃化现象,玻璃化程度与培养基的水势、环境湿度和外源激素的浓度有关。     

番茄组织培养与试管苗繁育

[目的]建立番茄的高效再生体系,为下一步进行番茄叶绿体遗传转化研究奠定基础。[方法]通过培养经无菌处理的番茄种子获得无菌苗,切取无菌苗的叶片置于附加有激素组合为3.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA的MS培养基中诱导愈伤组织产生,再利用愈伤组织,比较不同浓度激素组合对番茄愈伤组织分化不定芽与不定芽生根的影响。[结果]MS+2.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA+30 mg/L蔗糖培养基对诱导愈伤组织分化不定芽的效果最佳;1/2MS+1.0 mg/L IAA培养基对生根最好。[结论]适宜激素浓度的选择是番茄高效再生体系建立的关键。     

朝鲜蓟外植体诱导研究

[目的]筛选诱导朝鲜蓟愈伤组织的最佳培养基和培养条件。[方法]用朝鲜蓟的种子、根、叶柄、第三展开叶、第二展开叶、第一展开叶、心叶为外植体,以MS培养基为基本培养基,研究不同激素种类、不同浓度组合的4种培养基对朝鲜蓟愈伤组织的诱导及分化的影响以及不同外植体形成愈伤组织的能力。[结果]按朝鲜蓟愈伤组织诱导率大小,4种培养基组合的排序为:MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L>MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L>MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L>MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 2.5mg/L;外植体的排序为:第一展开叶>心叶>第二展开叶>叶柄>第三展开叶>根>种子。综合分析表明,诱导朝鲜蓟愈伤组织的最佳条件为:以第一展开叶和心叶为外植体,在MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L培养基上,诱导率可达90.5%。[结论]该研究为朝鲜蓟的组织培养和快速繁殖提供技术依据。     

金边北海道黄杨再生体系的建立及其快繁初探

[目的]探索金边北海道黄杨再生体系建立的方法和条件。[方法]以MS为基本培养基,配置不同种类和不同浓度激素的培养基,对金边北海道黄杨幼嫩叶片和腋芽进行不定芽诱导培养、增殖培养和生根培养。[结果]MS可作为金边北海道黄杨再生体系的基本培养基。6-BA配合NAA有利于叶片、腋芽愈伤组织和不定芽的诱导,以MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培养基效果最佳,腋芽诱导率高达66.67%。较高浓度的6-BA配合较低浓度的NAA有利于丛生芽的增殖,以MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L培养基增殖效果较理想,增殖率高达328.57%。MS+IAA0.5 mg/L+蔗糖3%或1/4MS+IAA0.5 mg/L+蔗糖2%可获得最佳生根效果。[结论]该体系的建立为金边北海道黄杨种苗快速繁殖提供参考依据。     

仙茅地下茎段组织培养研究

[目的]为仙茅的快速繁殖提供借鉴和依据。[方法]以仙茅无菌地下茎段为外植体,在蔗糖浓度为20 g/L,琼脂用量为6.5 g/L,pH值为5.8,温度为25℃的光照条件下,设3组培养基（A愈伤组织诱导培养基MS＋6-BA 0-1.0 mg/L＋NAA 0-1.0 mg/L,B丛生芽诱导培养基MS＋6-BA 0.5-1.5 mg/L＋NAA 0.2-0.8 mg/L,C生根培养基MS＋IAA 0-0.5 mg/L）进行组培试验。[结果]最适合仙茅的愈伤组织诱导培养基为MS＋6-BA 0.2-1.0 mg/L＋NAA 0.1-0.6 mg/L;丛生芽分化培养基为MS＋6-BA 0.8-1.5 mg/L＋NAA0.2-0.5 mg/L;生根培养基为MS＋IAA 0.1-0.3 mg/L。仙茅的愈伤组织诱导率为88%-93%,丛生芽诱导率为93%-96%,生根诱导率为92%-96%。[结论]该研究为仙茅地下茎段的组织培养提供了试验参考和理论依据。     

植物激素对大蒜愈伤组织诱导及继代培养的影响

[目的]研究不同的植物生长素和细胞分裂素配比对大蒜愈伤组织的诱导和继代培养的影响。[方法]以韭菜种子胚根和鳞茎尖为外植体,在附加不同激素的培养基上诱导愈伤组织并继代培养。[结果]MS+2,4-D2.0mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA2.0mg/L适宜胚根诱导愈伤组织,而MS+2,4-D2.0mg/L+NAA2.0mg/L+6-BA1.0mg/L适合茎尖诱导愈伤组织,而MS+2,4-D1.0mg/L+NAA2.0mg/L+6-BA0.5mg/L适合愈伤组织的继代培养。[结论]生长素和细胞分裂素合理搭配有利于大蒜愈伤组织的诱导和继代培养。     

三叶半夏组织培养研究

[目的]为三叶半夏组培扩繁寻求最佳培养基配比。[方法]研究正交试验下不同激素浓度和配比对三叶半夏不同外植体诱导分化的影响。[结果]MS4-1．5mg／L6-BA＋0．1mg／LIAA＋0．3mg／LNAA为叶片诱导丛生芽的最佳激素浓度配比,MS＋1．0mg／L6-BA＋0．2mg／LIAA＋0．3mg／LNAA为叶柄诱导丛生芽的最佳激素浓度配比。生根培养基以1／2MS＋0．3mg／LIBA效果较好。[结论]建立了三叶半夏的组培快繁体系。     

药用植物草麻黄细胞的悬浮培养

[目的]对草麻黄的子叶诱导出的愈伤组织,进行悬浮培养。[方法]采用组织培养的方法进行了愈伤组织诱导、愈伤组织继代和悬浮培养研究。[结果]MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA为诱导子叶形成愈伤组织的理想培养基;MS+1.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L6-BA是愈伤组织的适宜继代培养基;2.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+300 mg/L水解酪蛋白(CH)是愈伤组织悬浮培养的适宜培养基,愈伤组织干重增加量为0.80 g。[结论]初步选择出草麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养条件,为麻黄细胞扩大培养及有效成分提取奠定基础。     

植物激素对无籽西瓜丛生芽诱导的影响

[目的]对无籽西瓜的组织培养技术进行探索。[方法]以墨童无籽西瓜子叶作为外植体,分别置于添加不同浓度6-BA、NAA、IBA、KT的MS培养基中诱导愈伤组织、丛生芽及丛芽的伸长。[结果]浓度0.3~1.2 mg/L6-BA、NAA均能诱导愈伤组织;浓度0.6~2.5 mg/L6-BA、IBA均能诱导丛生芽;浓度0.2~1.0 mg/LKT均能诱导丛生芽伸长。[结论]诱导无籽西瓜愈伤组织的最佳培养基为MS＋NAA1.0 mg/L＋6-BA0.5 mg/L,诱导丛生芽的最佳培养基为MS＋6-BA2.0 mg/L＋IBA0.8 mg/L;诱导丛生芽伸长的最佳培养基为MS＋KT0.2 mg/L。     

甜瓜离体再生体系优化研究

[目的]对甜瓜离体再生体系进行优化研究。[方法]以优良甜瓜品种南湘91023为试验材料,以其子叶、下胚轴为外植体,在不同组织培养阶段添加不同种类和不同浓度的生长调节剂,以筛选出简单有效的甜瓜再生培养基配方。[结果]愈伤组织的诱导及增殖以MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA为最佳培养基;不定芽的诱导分化以MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D为最佳培养基;幼苗的诱导生根以MS+1.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA为最佳培养基,在此培养基下培养,幼苗的生根率高且根粗壮。[结论]为进一步开展甜瓜的遗传转化改良品种研究提供了保障。