荷斯坦牛HH5遗传缺陷基因快速检测方法的建立及应用

HH5是新近发现的一种荷斯坦牛隐性遗传缺陷基因,其分子机理为9号染色体上138kb大片段缺失,造成二甲基腺苷转移酶1(TFB1M)基因丢失。TFB1M基因在核糖体小亚基合成中发挥重要功能,故缺陷纯合子胚胎在发育早期死亡,造成母牛流产。HH5基因的共同祖先为1957年出生的一头加拿大著名公牛,其因在世界范围内广泛扩散,奶业发达国家已将其列为常规检测的遗传位点。本研究首先通过Sanger测序分析HH5缺陷基因,发现除了已知的138kb大片段缺失外,还存在一个9bp插入片段(TGATTACAA);该基于此特征序列,设计等位基因特异性PCR分型方法,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳即可快速分型。笔者所在团队对北京郊区某奶牛场372头荷斯坦母牛检测,发现HH5携带者12头,携带率为3.23%。本研究为我国荷斯坦牛HH5遗传缺陷基因筛查提供了一种准确便捷的分子检测方法。     

北京地区荷斯坦牛BLAD遗传缺陷基因的分子筛查

牛白细胞黏附缺陷症(BLAD)是由常染色体上CD18基因单碱基突变(A→G)引起的隐性遗传疾病,隐性基因纯合时导致白细胞表面的β2整合素表达明显减少或缺乏而引起临床发病,患病牛的主要特征是机体免疫力降低、易患病,从而影响生产性能的表现,可严重影响奶牛场的经济效益。本研究利用PCR-SSCP方法对北京地区246头公牛样本和409头母牛样本进行了检测分析,研究结果表明,在所检测的样本中,荷斯坦种公牛(含后备公牛)和母牛BLAD携带率分别为0.81%和3.91%,BLAD基因频率分别为0.21%和1.95%,并通过系谱追踪发现,BLAD遗传缺陷可追溯到美国一头非常优秀的公牛Osborndale Ivanhoe(USA.1189870,BL),其后代在我国有一定的影响。通过剔除BLAD携带者公牛可以有效控制该遗传缺陷的传播,但是,我国部分BLAD携带者公牛冻精依然在商业化使用,所以,有效监控BLAD携带者在奶牛群中的状况对BLAD剔除计划是有益的。     

影响荷斯坦牛繁殖力及犊牛健康的遗传缺陷基因研究进展

荷斯坦牛经高强度选育,其产奶性能不断提升,但近交导致遗传缺陷问题凸显。近年来,基因组SNP芯片广泛应用于奶牛基因组选择育种,随着大规模的基因组标记数据积累,新的遗传缺陷基因定位策略被提出,利用全基因组测序技术在荷斯坦牛中鉴定出多种遗传缺陷单倍型和基因,均导致胚胎早期死亡或犊牛出生缺陷。本文概述了荷斯坦牛遗传缺陷的种类、基因定位、分子检测和经济影响的研究进展,同时展望了缺陷基因研究及育种应用的前景。     

荷斯坦牛

1荷斯坦牛的起源荷斯坦牛起源于欧洲,这个品种的形成和培育发展主要是在现在的荷兰,更准确地说,是在位于荷兰北部ZuiderZee两边的北荷兰省和弗里斯兰省。其种源可追溯到约2000年前移居欧洲生活在莱茵河三角洲的部落民族带来的黑色巴达维亚牛和白色弗里斯兰牛。经历了好多年的精心培育和选择,荷斯坦牛已成为最适宜丰美草原地区饲养的品种,这一杂交品种已进化为优质高产的黑白花奶牛。2引入美洲随着人们在美洲新大陆定居,这里牛奶的市场需求越来越大,育种人员不得不辗转到荷兰购买荷斯坦牛种。1852年,一名叫温斯罗普的麻省农场主向一位在波士…     

中国荷斯坦牛HH4遗传缺陷单倍型分子筛查

HH4(Holstein Haplotype 4)是在荷斯坦牛群中发现的一种隐性遗传缺陷单倍型,由1号染色体上GART基因g.1277227AC单碱基错义突变引起,隐性基因纯合时引起胚胎早期流产,严重威胁着奶牛养殖者的经济效益。本研究利用飞行时间质谱技术对北京地区332头荷斯坦公牛样品和1 151头母牛样品进行了检测分析,结果表明,在所检测的荷斯坦牛群体中,未发现HH4携带者个体,即均为正常个体。提示HH4单倍型对我国荷斯坦牛群影响较小,在奶牛场的选种选配中可以不予考虑,但在遗传物质引进的时候应重点关注,避免引入有害基因。     

中国荷斯坦公牛CN和DUMPS遗传缺陷检测及系谱分析

旨在研究中国荷斯坦牛中瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)和尿苷酸核酶缺乏症(Deficiency of uridinemonophosphate synthase,DUMPS)2种遗传缺陷的携带者比率及系谱来源,并构建更简便的检测方法。本研究通过PCR-RFLP方法对参加我国联合青年公牛后裔测定和良种补贴项目的591头荷斯坦公牛进行了大规模CN和DUMPS的遗传缺陷检测,并构建了奶牛CN隐性有害基因的AS-PCR检测技术。结果,共发现2头CN和1头DUMPS隐性有害基因携带者公牛,携带者比例分别为0.34%和0.17%。经过系谱追溯,2头CN携带者公牛均为澳大利亚公牛Linmack Kriss King-CN后代,DUMPS携带者公牛为美国公牛Skokie sensation Ned后代。基于此,我国有必要尽快建立荷斯坦牛隐性遗传缺陷监控体系并进行系谱标注,通过青年公牛预选和选种选配,避免携带者公牛进入后裔测定和良种补贴项目,以逐步降低我国奶牛群体中隐性有害等位基因频率。     

荷斯坦牛新遗传缺陷单倍型HH7分子筛查

HH7(Holstein Haplotype 7)是在荷斯坦牛群中新发现的一种隐性遗传缺陷单倍型,由27号染色体上CENPU基因4个碱基缺失突变引起,隐性基因纯合时能引起胚胎早期流产,严重影响着奶牛养殖者的经济效益.本研究利用竞争性等位基因特异性PCR(KASP法)对随机抽取的166头荷斯坦公牛样本进行了检测分析,结果...     

我国荷斯坦种公牛CVM遗传缺陷基因的分子检测

研究运用引入酶切位点聚合酶链式反应(PIRA-PCR)方法检测牛脊柱畸形综合症(CVM)在我国荷斯坦种公牛中的携带情况。共检测了来自全国14个公牛站的587头种公牛,结果表明:携带者56头,携带率为9.54%。系谱分析确认40头携带者公牛是Carlin-M Ivanhoe Bell的后代。对公牛信息统计显示,2001—2007年各年度出生的种公牛都保持较高的CVM携带率(8.22%～15.56%)。美国、加拿大和澳大利亚是我国引进公牛的主要来源国,进口公牛的CVM携带率分别为11.37%、3.73%和14.29%。此外,本研究还对我国荷斯坦牛CVM遗传缺陷的控制和CVM携带公牛的利用提出建议。     

荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的巢式PCR检测方法的建立和应用

为建立荷斯坦奶牛瓜氨酸血症和尿苷酸核酶缺乏症两种遗传缺陷病的检测方法,根据文献报道的精氨酸琥珀酸合成酶、UMPS基因核苷酸序列,设计引物,通过条件的优化,建立了巢式PCR反应体系。结合PCR产物测序,建立了检测CN和DUMPS方法。取243份临床牛血清样品用巢式PCR检测并测序,发现CN野生型238份,CN杂合子型5份,CN突变型0份;DUMPS野生型236份,DUMPS杂合子型5份,DUMPS突变型2份。所建立的巢式PCR方法灵敏、特异,还兼具高通量的特点,适合口岸对荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的大样品量检测。     

天津地区荷斯坦公牛CVM、DUMPS和CN遗传缺陷检测

本文旨在研究天津地区中国荷斯坦公牛脊椎畸形综合征（Complex vertebral malformation,CVM）、尿苷酸合酶缺乏症（Deftciencv of uridine monophospham synchase,DUMPS）和瓜氨酸血症（Citrullinemia,CN）3种遗传缺陷的携带者比率及系谱来源。通过PIRA—PCR和PCR—RFLP方法分别对天津奶牛发展中心参加全国青年公牛联合后裔测定和国家良种补贴项目的110头荷斯坦公牛进行了CVM、DUMPS和CN三种遗传缺陷检测。共发现6头CVM隐性有害基因携带公牛,携带者比例为5．45％,隐性有害等位基因频率为2．72％。经过系谱分析,其中4头CVM携带者均为美国公牛Carlin—MIvanhoeBell的后代,另外2头因系谱不完整而无法查询。未检测到DuMPs和CN隐性有害基因携带者。基于此,我国有必要尽快建立荷斯坦牛隐性遗传缺陷监控体系并进行系谱标注,避免携带公牛进入后裔测定和良种补贴项目,以逐步降低我国奶牛群体中遗传缺陷隐性等位基因频率。     

中国荷斯坦牛

正中华人民共和国国家标准GB/T 3157-2008代替GB/T 3157-1982前言本标准代替GB/T 3157—1982《中国黑白花奶牛》。本标准与GB/T 3157—1982相比,主要变化如下:——品种名称修改为中国荷斯坦牛;——增加和修改了生长发育各主要阶段,即出生18月龄和24月龄的体尺体重指标(见4.2);——修改了产奶性能指标(原标准2.1和2.2,见本标准第5章),并增加了乳蛋白率指标(见第5章);     

中国荷斯坦种公牛BLAD遗传缺陷的分子检测及系谱分析

本试验运用限制性片段长度多态性聚合酶链式反应（RFLP-PCR）方法,检测我国荷斯坦种公牛白细胞粘附缺陷（bovine leukocyte adhesion deficiency,BLAD）基因的携带频率。共检测了来自全国14个公牛站的587头种公牛,发现BLAD携带者8头,携带率为1.36%。对现有公牛系谱信息分析显示,携带者公牛来自美国、加拿大和中国,其中6头携带者公牛可以追溯到共同祖先Osborndale Ivanhoe。此外,本研究还对我国荷斯坦牛遗传缺陷的控制和携带者公牛的利用提出建议。     

加拿大荷斯坦牛与中国荷斯坦牛生产性能对比

黑龙江省八五二农场１９９０年底从加拿大引进１１０头荷斯坦育成母牛,平均１２月龄,现已全部投产。为了解加拿大荷斯坦牛在中国北方地区的适应性及其生长发育情况和生产性能,与当地中国荷斯坦母牛进行了对比饲养试验。１材料和方法１．１供试牛选择：试验组为加拿大荷...     

荷斯坦牛亲子鉴定检测方法的建立与应用

为了构建北京奶牛中心荷斯坦种公牛个体及亲子鉴定DNA数据库,本研究从联合国粮农组织(FAO)和国际动物遗传学会(ISAG)推荐的具有高度多态性的微卫星标记中选取11个常染色体微卫星标记(BM1824、BM2113、ETH3、ETH10、ETH225、INRA023、SPS115、TGLA53、TGLA122、TGLA126和TGLA227),采用荧光引物PCR和ABI3730XL遗传分析仪,对229头荷斯坦种公牛个体基因型进行了检测,并探讨其用于牛个体识别和亲子鉴定的可行性。研究结果表明,11个微卫星标记平均杂合度为0.733,平均多态信息含量为0.695,其中TGLA122标记平均多态信息含量最高为0.866,SPS115标记最低为0.506,均属于高多态性标记。11个标记累积个体识别能力为99.99%,累积非父排除率达到99.99%,随机个体一致性概率为1.59×10-17。研究结果表明上述11个微卫星标记进行个体识别和亲子鉴定的效力与可靠性均很高,同时初步建立了北京奶牛中心荷斯坦种公牛DNA数据库。     

荷斯坦牛巴贝斯虫病的诊治

牛巴贝斯虫病,俗称焦虫病,现也称牛梨形虫病.主要是由蜱传播而引起的一种血液原虫病,临床上以高热,贫血,眼结膜苍白,黄疸及血尿,精神不振,明显消瘦为主要特征.2005年5月上旬,盈江县奶牛养殖场饲养的奶牛先后发病24头,根据流行病学调查,临床症状,尸体剖检变化和实验室检验,诊断为牛巴贝斯虫病.     

荷斯坦牛隐性乳房炎主要病原菌的耐药性试验

对新疆石河子市某奶牛场进口的澳大利亚荷斯坦牛隐性乳房炎的发病情况进行调查，同时采集部分乳样进行细菌的分离鉴定，结果发现其中主要致病菌为链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等，并分别选取了15种常用抗生素进行了药物敏感试验。结果表明：致病菌对临床上常用的青、链霉素及磺胺类等药物均已产生不同程度的耐药性,而喹诺酮类药物则相对表现出较好的抑菌效果。     

内蒙古自治区荷斯坦牛调查报告

中国荷斯坦牛（Chinese Holstein）,原名中国黑白花奶牛,属大型乳用型品种,为了与国际接轨,1992年,《关于“中国黑白花奶牛”更名为“中国荷斯坦牛”及颁发有关法规的通知》（农业部（1992）农（垦）宇第43号）中,批准更名为“中国荷斯坦牛”。     

青海省荷斯坦牛胚胎移植

青海省民和县种畜场2001年引进了48头秦川牛,于2001年4月～2002年6月进行了荷斯坦奶牛胚胎移植,结果12头秦川牛移植成功,所产荷斯坦牛犊生长发育良好。1材料与方法1．1供体胚胎荷斯坦奶牛7日龄冷冻胚胎,由新疆生物科技研究所提供。     

中国荷斯坦牛白细胞粘附缺陷病遗传分析

荷斯坦牛白细胞粘附缺陷病（BLAD）是一种遗传性免疫缺陷病，患病牛出生后，生长发育差，绝大多数在1年内死亡，且不具繁殖和哺育能力。该病的遗传基础为CD18基因编码区383位的A／G点突变导致白细胞表面的β2整合素表达缺陷。目前欧美等奶牛业发达国家都已经建立了完善的BLAD分子检测方法和跟踪监控体系。中国长期从国外进口荷斯坦公牛精液、胚胎或活体，由此可能引进了BLAD基因。本研究采用PCR—RFLP方法对116头可疑中国荷斯坦牛进行了检测．确定了2头BLAD携带者公牛和8头携带者母牛．未发现隐性纯合个体．