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《畜牧与兽医》2017,(9):88-91
选择商品化的3种细胞裂解液(RNAiso Plus、TRNzol Plus和RNAOUT)和2种DNA/RNA共提试剂盒(RNA-DNA双提试剂盒、快速DNA/RNA共提试剂盒),分别提取猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JXA1-R株、猪瘟病毒(CSFV)HCLV株和乙型脑炎病毒(JEV)SA-14-14-2株的RNA,通过RNA直接定量和Real-time PCR间接评价了抽提的RNA的质量。RNA直接检测结果表明,RNAiso Plus、TRNzol Plus和RNAOUT 3种细胞裂解液抽提获得的RNA浓度相对较高;Real-time PCR间接检测结果表明,快速DNA/RNA共提试剂盒组RNA相对水平最高,RNAiso Plus和TRNzol Plus 2种细胞裂解液组其次。研究表明,RNAiso Plus、TRNzol Plus和RNAOUT 3种试剂可用于临床RNA病毒检测以及定量分析。 相似文献
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为了建立桑树根围土壤微生物群落结构的分子生态学试验技术体系,采取不同的细胞裂解方法及DNA沉淀方法直接提取桑树根围土壤微生物总DNA,并以采用试剂盒提取的桑树根围土壤微生物总DNA为参照,筛选出一种能有效提取高纯度、多样性土壤微生物总DNA的方法:以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、溶菌酶、蛋白酶K、十二烷基磺酸钠(SDS)为裂解液,经反复冻融裂解细胞,在DNA提取液中添加聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP K30)、牛血清蛋白(BSA)、CaCl2去除腐殖酸,并结合聚乙二醇8000(PEG8000)沉淀和纯化DNA。该方法简便、快速,获得的桑树根围土壤微生物基因组DNA分子长度在23 kb以上,土壤鲜样的微生物DNA产率为11.2μg/g,且纯度较高,D(260 nm)/D(230 nm)=1.42,D(260 nm)/D(280 nm)=1.37,可直接用于PCR扩增及变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析。 相似文献
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对血液中提取基因组DNA的方法加以改进,获得了一种提取猪肾组织中DNA的有效方法.试验表明,利用SDS裂解,氯仿、异戊醇抽提母猪肝脏中基因组DNA,得到的DNA纯度较高,可用来进一步进行RAPD分析和PCR扩增,用于各种分子生物学实验. 相似文献
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本试验先后进行2轮载体构建及转染试验,对牛乳铁蛋白基因启动子元件调控效应进行了分析。首先进行第1轮载体构建及转染试验:采用PCR方法,利用4对引物从牛乳铁蛋白基因5′调控区-1 799向3′端依次缺失500bp进行调控序列扩增,将获得的扩增片段替换pEGFP-N1的CMV启动子,构建了4个重组载体,将重组载体转染牛乳腺上皮细胞(BMEC),经筛选获得稳定的单克隆细胞,测定并比较各组细胞的荧光强度。在以上试验基础上,为进一步精确确定牛乳铁蛋白基因启动子顺式调控元件序列,进行第2轮载体构建及转染试验,方法同第1轮。结果表明,牛乳铁蛋白基因上游调控序列-1 323~-1 372存在负调控元件,-1 372~-1 560存在正调控元件。 相似文献
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一种改进的方法提取白头鹤粪便DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
现有的粪便DNA提取方法通用性不好,DNA纯度不高不适用于白头鹤等水鸟,本研究探索一种改进的硫氰酸胍裂解法。通过线粒体DNA细胞色素b、控制区基因和微卫星DNA的PCR扩增及线粒体DNA控制区序列的测定,经琼脂糖凝胶电泳检测以及测定序列显示,提取的DNA模板纯度高,效果很好,证实改进方法的可靠性、有效性。为其他濒危水鸟的非损伤取样提供了新的材料和方法,为其保护遗传学的研究提供一定的新技术。 相似文献
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鹅血液基因组DNA的简单快速提取方法研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究针对家禽血液红细胞有细胞核的特点,研究适合鹅血液基因组DNA的廉价、简便、快速的DNA提取方法,并为其它禽(鸟)类相关操作提供参考。通过裂解细胞,利用简便快速的操作方法将蛋白质和核酸分离,去除杂质,沉淀核酸,获得大量基因组DNA,并通过基因扩增检测其质量和效果。该方法提取的基因组DNA电泳检测条带明量,无拖尾,含量及纯度均较高,能够用于分子生物学实验研究。与传统的酚-氯仿DNA抽提方法相比,本实验建立的血液基因组DNA提取方法具有成本低、操作步骤简便和快速的特点,特别是对大量样品的提取更为实用。 相似文献
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为了建立一种快速鉴别AIV的HA亚型的RT-PCR方法,本研究探讨了流感病毒血凝素裂解位点基因作为DNA条形码对A型流感病毒进行亚型鉴定的可行性。通过生物信息学方法对16种A型流感病毒的血凝素基因全长进行比对,在HA裂解位点的两端高度保守区设计一对DNA条形码引物,RT-PCR扩增获得约170bp的核苷酸片段。利用MEGA5.0软件构建N-J系统树并计算亚型间及亚型内平均遗传距离。结果显示,不同A型流感病毒裂解位点氨基酸具有单系性,每一亚型可分别形成各自独立的分支。不同亚型间平均遗传距离为0.277,相同亚型内平均遗传距离0.032。研究表明,利用DNA条形码技术可在A型流感病毒分型方面进行有效的分子分类鉴定。 相似文献
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利用高渗缓冲液裂解感染鸭瘟病毒的鸭胚成纤维细胞,加入核酸酶消化细胞DNA,再抽提病毒DNA的方法提取鸭瘟病毒基因组,结果证明,这种方法可以最大限度地消除细胞DNA的污染,得到纯净的病毒基因组DNA.用10种限制性内切酶对鸭瘟病毒疫苗株和分离株的基因组进行酶切分析,酶切产物电泳结果表明,Sma Ⅰ、Sal Ⅰ、Pst Ⅰ、Not Ⅰ、Hind Ⅲ、EcoR Ⅴ和BamH Ⅰ 7种限制酶产生酶切图谱二者几乎完全一致,EcoR Ⅰ和Sac Ⅰ仅有个别条带不同,BglⅡ产生的条带迁移率差别较大,但条带数量相同. 相似文献
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多枝赖草高分子量核DNA的有效制备 总被引:3,自引:2,他引:1
以多枝赖草Leymus multicaulis黄化苗幼嫩叶片为材料,在液氮中研磨成粉末,加入冰冷的细胞核抽提缓冲液,经一系列钢制细胞筛过滤,离心分离细胞核,相差显微镜镜检后,用低熔点琼脂糖包埋,蛋白酶K原位裂解,经脉冲场电泳分离,用1%低熔点琼脂糖回收获得了较纯净的分子量大于2 Mb的核DNA,Southern杂交显示没有叶绿体和线粒体DNA的污染.利用该方法制备的高分子量核DNA,可用于后续可转化人工染色体(TAC)文库的构建和基因组分析. 相似文献
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试验旨在探寻一种无损、价廉、耗时短,可用于大批量鹌鹑早期性别鉴定的方法。采用4种不同方法(试剂盒法、加热法、碱裂解法和碱裂解-乙醇洗涤法)提取鹌鹑羽毛样品的基因组DNA,使用凝胶电泳检验DNA质量,紫外分光光度计测定其浓度和纯度;选择最佳的羽毛DNA提取方法,应用PCR法检测3日龄鹌鹑的性别。基因组DNA提取电泳结果显示,仅碱裂解-乙醇洗涤法提取的DNA与试剂盒提取的DNA出现条带的位置相同;紫外分光光度计测定结果表明,试剂盒法获得的DNA浓度值远低于其他3种方法,其中碱裂解法浓度最高;OD260/OD280比值以试剂盒法和碱裂解-乙醇洗涤法(裂解10 min)为高,OD260/OD230比值以试剂盒法最高,碱裂解-乙醇洗涤法(裂解10 min)次之。PCR结果显示,除碱裂解法原液无目的条带外,其余各组均出现目的条带;碱裂解法操作步骤少、时间最短,加热法和碱裂解-乙醇洗涤法次之。综合分析选择碱裂解-乙醇洗涤法对70只鹌鹑进行性别鉴定,羽毛PCR鉴定性别结果与性腺解剖结果的符合率为100%,卡方分析检... 相似文献
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通过对驴乳和牛乳采取4种不同的热处理研究,比较了不同的加热方法对驴乳和牛乳中蛋白质稳定性的影响。结果发现,驴乳的乳清蛋白在60℃已经完全变性,驴乳酪蛋白的变性温度介于90~100℃,变性温度比较窄,而牛乳的酪蛋白的变性温度比较高。研究表明,驴乳乳清蛋白的变性温度低于60℃,驴乳中的α-乳白蛋白相对较多,而β-乳球蛋白较少,牛乳则相反。相比较而言,驴乳的酪蛋白和乳清蛋白的变性率较高,而牛乳的热稳定性更好。说明控制温度和时间可获得不同变性程度乳制品。 相似文献