无花果树苗中截获的无花果孢囊线虫形态和分子鉴定

上海口岸从旅客携带进境的树苗中分离到1种孢囊线虫属的2龄幼虫,通过形态特征和分子特征分析,鉴定为无花果孢囊线虫(Heterodera fici Kirjanova,1954)。该2龄幼虫的主要形态特征为:体长409.9~454.4μm;唇环3个;口针发达,长22.6~24.0μm,基部球圆形略向前倾斜;侧线4条;尾长圆锥形,末端细圆,尾部透明区长24.7~30.5μm,约占尾长的1/2。序列分析显示其ITS区序列与GenBank中无花果孢囊线虫的序列相似性为99.48%~99.90%,序列差异为1~5 bp。系统发育分析显示该线虫与无花果孢囊线虫处于一个聚类组内。这是我国口岸首次报道截获无花果孢囊线虫。     

日本鸡爪槭中旱稻胞囊线虫形态和分子鉴定

从宁波口岸进境的日本鸡爪槭(Acer palmatum)景观树根际介质中分离到1种胞囊线虫属的2龄幼虫,通过形态鉴定和分子特征分析,鉴定其为旱稻胞囊线虫(Heterodera elachista Ohshima,1974)。该日本群体的2龄幼虫体长374~421μm;唇区有3个唇环;口针粗壮,长16.5~19.2μm,基部球圆形或前端略凹陷;侧线3条;尾长圆锥形,末端细圆,透明尾长22.9~30.7μm,约占尾长的50%。基于核糖体DNA的28S-D2/D3区和ITS区序列构建的系统发育树以及ITS序列酶切分析证实该鉴定结论,这是我国首次截获旱稻胞囊线虫。     

格木寄生线虫中国新记录种——卡勒萨隐皮孢囊线虫Cryphodera kalesari

在对广东省主要珍贵树种上的线虫进行调查时从格木Erythrophleum fordii上分离到一种隐皮孢囊线虫,经形态特征观察和测量数据分析,将其鉴定为卡勒萨隐皮孢囊线虫Cryphodera kalesari。其诊断特征为:雌虫椭圆形至近球形,头部具有1个唇盘和2～3个唇环,口针长33.6～37.8μm,阴门唇突出,阴门与肛门之间区域凹陷,肛阴距为42～72μm;2龄幼虫头部具1个明显的唇盘和3个唇后环纹,口针长24.8～29.5μm,口针基部球前缘凹陷,侧区3条侧线,尾长圆锥形,长38～53.5μm,尾末端细圆,透明尾长17.1～25.1μm,侧尾腺孔位于肛门后2～5环;雄虫未发现。本研究首次获得了卡勒萨隐皮孢囊线虫的rDNA(LSU D2D3和ITS)序列,为此线虫的鉴定提供了可靠的分子数据。本研究还分析了卡勒萨隐皮孢囊线虫与本属其他种类的系统进化关系。卡勒萨隐皮孢囊线虫为中国的地理新记录种。格木为隐皮孢囊线虫的新寄主。     

我国小麦禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae Wollenweber)鉴定研究

 1989-1990年对湖北省天门县、潜江县、仙桃市、新洲县,河北、河南、山西等省及北京市郊等地的矮黄麦株根、根围田土的直接检查和漂浮分离检查,都查到褐或黑褐孢囊,内有大量可育卵,经用光学显微镜和扫描电镜对孢囊阴门锥膜孔特征,二龄幼虫头部细微结构等的观察及对其有关体值的测量,鉴定为禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae Wollenweber 1924,后有名Bidera avenae(Wollenweber,1924)Krall & Krall,1978)亦即燕麦孢囊线虫。其主要形态特征为孢囊较大,阔柠檬形,色深褐,长709(601-903)μm,宽523(436-612)μm,阴门锥顶为典型双膜孔型,无下桥,阴门锥下方有许多排列不规则的泡状突;二龄幼虫长550(477-602)μm,头骨架发达,口针长24μm,唇盘伸长与亚背唇和亚腹唇融合形成一近肾形唇区结构。禾谷孢囊线虫是世界性重要病原线虫,已在32个产麦国家被发现,本研究在我国小麦上初次发现,为我国孢囊线虫一新记录种;明确了我国南北两类型麦区一些小麦矮黄不长、根系分叉多,细而乱,甚至纠结成团,开花前后,根侧露出微小如粉末的发亮颗粒状物(孢囊),产量往往骤减,即系其危害所致;从而纠正了以前多归因于施肥不匀、生理失常的错误认识;对进一步正确诊断、调查、研究其在我国的发生分布、危害规律、生物学特性及控制方法具有理论意义和实用价值。     

甘肃河西地区番茄根结线虫病病原鉴定

利用形态特征对甘肃省河西地区番茄根结线虫病病原线虫进行鉴定,其重要的形态特征如下：雌虫体长L=599.0（510.0～690.0）μm,体宽W=439.0（409.0～473.0）μm,口针长ST=15.4(15.0～16.0)μm,背食道腺开口到口针基部球的距离DGO=3.6(2.0～4.3)μm。雌虫梨形,排泄孔位于口针基球处,会阴花纹背弓明显高,线纹由平滑到波浪状,有些线纹向侧面分叉,但无明显的侧线;2龄幼虫L=376.0（360.0～393.0）μm,W=14.8（14.2～15.2）μm,ST=11.7(11.2～12.5)μm,DGO=3.6(2.1～4.0)μm,头部前端平,口针基部球明显,半月体邻近分泌和排泄孔,尾透明且纤细,尾尖尖圆;雄虫L=1 411.0（532.0～1 720.0）μm,W=32.0（28.0～38.0）μm,ST=24.5(23.0～26.0)μm,DGO=3.2(2.0～4.1)μm,头区不缢缩,有不完全的头环,没有侧唇,口针基球圆形至扁圆形。综合以上雌虫、2龄幼虫和雄虫的形态特征,确定了该地区的番茄根结线虫病病原线虫为南方根结线虫（Meloidogyne incognita）。     

寄生在柑桔根上的根结线虫新种——简阳根结线虫

 简阳根结线虫Meloidogyne jianyangensis n.sp.采自四川简阳县柑桔园的柑桔根上。雌虫的会阴花纹近圆形,线纹平滑、纤细,背腹线纹通常连贯。以尾尖处向两侧有脊状放射形条纹,条纹数目不定、在阴肛区的背侧有半圈脊状条纹。在放射状的条纹间,线纹有时不连贯,有如许多小刻点。尾觉器距离很近。雄虫头冠高,唇盘和中唇融合,无侧唇。口针长19.1-26.0(21.8μm)。口针基球和杆部界限明显。背食道腺开口距口针基部2.5-3.5(3.0μm)。侧带处有4条侧线,两边两条间有横纹,中间两条侧线间无横纹。二龄幼虫长387.6-483.3(423.2)μm。头冠高,唇盘和中唇融合成哑铃状。口针长13.0-16.8(15.1)μm。背食道腺开口距口针基部2.1-3.7(2.5)μm。尾部渐细,尾尖钝圆。简阳根结线虫雌虫的主要酯酶带Rf=0.41、0.45和0.48。     

食菌伞滑刃线虫和阿苏里伞滑刃线虫的比较鉴定

宁波口岸在进境木质包装检疫中经常截获食菌伞滑刃线虫和阿苏里伞滑刃线虫,这2种线虫都属于fungivorus组,形态上十分近似。主要区别在于:前者唇区缢缩十分明显,而后者缢缩不明显;前者排泄孔与半月体平均距离较远(约11μm),而后者较近(约5μm);前者雄虫热杀死后尾部强烈向腹面弯曲(超过180°),后者尾部略腹弯(约90°);前者基顶与喙突相距约9.8μm,喙突高约2.7～3.5μm,后者则分别为8.4μm和1.5～2.8μm;前者雌虫尾多数腹弯十分明显,尾较短(长约50μm),后者尾一般略腹弯(长约68μm)。此外,ITS区的PCR-RFLP方法可区分上述2种线虫。     

日本鸡爪槭中苹果根结线虫的鉴定

宁波口岸连续从来自日本的鸡爪槭根和根围介质中截获一种根结线虫,经形态学和分子生物学方法鉴定为苹果根结线虫。其主要鉴定特征是:雌虫会阴花纹卵圆形,线纹平滑细密,背弓和腹弓均低平,侧尾腺口大,侧尾腺间距大于阴门裂宽;雄虫背食道腺开口到口针基部球的距离较大,平均8μm;2龄幼虫体长和尾长均较短,分别为362～466μm和29.2～39.3μm,c=11.6～15.3。所截获的苹果根结线虫18S rDNA序列与已在GenBank登录的2个苹果根结线虫株系(登录号为EU669948和EU669949)最接近,相似度达99.4%和99.6%。这是我国首次报道截获该种线虫。     

旱稻孢囊线虫（Heterodera elachista）孵化特性研究

为了解旱稻孢囊线虫的孵化特性,从水稻根系及根系附近土壤分离孢囊,在室内离体条件下研究不同温度及水稻根系分泌物、土壤浸液、水稻根汁等因子对2龄幼虫孵化的影响,并观察不同温度下2龄幼虫的存活能力.结果表明:旱稻孢囊线虫孵化的适宜温度范围为28～32℃,且在该温度范围初孵2龄幼虫的存活率高、存活时间相对较长,35℃下孵化率及初孵2龄幼虫的存活率、存活时间均明显下降,40℃下无线虫孵化,20℃下孢囊线虫孵化率仅为0.9％,4℃下可延长2龄幼虫的存活时间.水稻分泌物、水稻土壤浸液和水稻20倍根汁对旱稻孢囊线虫孵化具有刺激作用,5倍根汁和4 mmol/L氯化锌溶液对线虫的孵化有抑制作用.上述结果可为制定旱稻孢囊线虫防治措施提供依据.     

海洋放线菌M1D14代谢产物对几种重要植物寄生线虫的抑制作用

采用梯度稀释法室内测定了海洋放线菌M1D14发酵液代谢产物对南方根结线虫(Meloidogyne incognita)2龄幼虫及其卵、松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)、大豆孢囊线虫(Heterodera glycines)2龄幼虫的毒力,同时还测定了经过高温高压灭菌和0.22μm微孔滤膜过滤的M1D14发酵液对南方根结线虫的毒力。结果表明,海洋放线菌M1D14发酵液代谢产物对南方根结线虫卵的孵化无明显的抑制作用,对南方根结线虫幼虫毒力最强,对松材线虫幼虫毒力次之,对大豆孢囊线虫幼虫的毒力最弱。经过高温高压灭菌和微孔滤膜过滤的M1D14发酵液对南方根结线虫仍有毒力。M1D14杀线虫谱广、效果好、使用成本低,在生产上具有很好的应用前景。     

两种小麦孢囊线虫在河南省郑州的侵染动态比较研究

 近年来, 小麦孢囊线虫病已成为我国小麦生产上的重要病害之一。掌握病原线虫的侵染动态是病害防控基础。本文在田间条件下, 对两种孢囊线虫—禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)和菲利普孢囊线虫(H.filipjevi)在河南郑州的侵染动态进行了比较研究, 结果显示:小麦出苗后2周即可发现孢囊线虫的二龄幼虫侵入到小麦根内, 4周后少量二龄幼虫发育为三龄, 6周后根内幼虫数量达到第一次高峰, 同时发现少量四龄幼虫。小麦出苗60 d后, 由于温度较低, 根内各虫态数量基本维持稳定;在120 d后, 温度逐渐回升, 根内二龄幼虫数量逐渐增加, 幼虫数量的第二次高峰出现在小麦出苗后150 d左右, 但入侵幼虫数量明显少于第一次。此后根内幼虫陆续发育为白雌虫和孢囊, 白雌虫数量高峰出现在小麦出苗后180 d后。H.filipjevi三龄、四龄幼虫及白雌虫出现的时间均比H.avenae的早一周。     

青岛口岸截获的马铃薯白线虫

从来自俄罗斯籍轮船携带的带土马铃薯样本中分离线虫,通过胞囊的阴门区和2龄幼虫的形态特征和测量数据,将截获线虫鉴定为马铃薯白线虫(Globodera pallida Behren,1975)。分离到的线虫胞囊内部为奶油色,雌虫阴门和肛门间角质脊数目为10～12,Granek’s ratio为1.95±0.8;2龄幼虫口针长度为23±1.2μm,口针基球剖面的前表面尖,口针锥部占整个口针长度的52.5%;头区深度骨化,六角放射状,口盘及唇部轮廓为矩形,轻微缢缩,有4～6个环纹。马铃薯白线虫是中国一类进口植物检疫对象,该线虫为青岛口岸首次截获。     

新疆甜菜地落选短体线虫新纪录

从采自新疆伊犁哈萨克自治州新源县那拉提草原和博尔塔拉蒙古自治州博乐市青德里乡甜菜根围的土样中分离到一种短体线虫,通过形态学特征以及基于核糖体28S D2/D3区序列比较,证实其为落选短体线虫(Pratylenchus neglectus(Rensch,1924)FilipjevSchuurmans Stekhoven,1941)。该线虫的主要形态鉴别特征为:唇区有2个唇环;平均V=80.4%～82.7%;后阴子宫囊小于阴门处体宽;口针长17.5～18.3μm;受精囊退化;尾末端通常宽圆,但有时也呈平截状或指状。这是我国新疆首次发现该种线虫。鉴于该种线虫目前已在我国普遍发生,建议将该种线虫确认为中国种。     

北京地区小麦禾谷孢囊线虫病发生动态调查

小麦禾谷孢囊线虫病是小麦生产上的重要病害.2010-2011年对北京地区小麦禾谷孢囊线虫的发生规律进行了定期定点调查.结果表明,禾谷孢囊线虫在北京地区全年只发生1代,夏季滞育,卵孵化高峰为4月初;2龄幼虫侵染高峰为4月上旬,3龄幼虫发育高峰为4月下旬至5月初,4龄幼虫发育高峰为5月上旬,白雌虫发育高峰为5月下旬至6月上旬,10月份播种后部分2龄幼虫就可以发生侵染并且冬前发育至3龄幼虫.本研究结果可为北京地区禾谷孢囊线虫的防治提供理论依据.     

山西短颈剑线虫(Xiphinema brevicollum)形态与rDNA分子特征

采用浅盘分离法在山西太谷松树根际土壤中分离得到一种剑线虫,通过Seinhorst脱水制片后利用显微镜观察其形态特征并进行测量,其主要特征为:雌性虫体经热杀死后呈腹面弯曲的"C"形,体长1.71~2.26mm,两端渐细;齿针全长127.3~140.8μm;a(体长/体宽)为35.9~51.4μm,b(体长/食道外宽)为5.8~8.7μm,c(体长/尾长)为50.7~103μm。前卵巢与后卵巢长短相近,尾形近似圆锥形。未见雄虫。对该线虫的rDNA-ITS1,rDNAITS2和28SRNA序列进行扩增、测序及系统进化分析,结合形态学特征进行鉴定,将分离到的剑线虫鉴定为短颈剑线虫(Xiphinema brevicollum),这是山西首次发现报道剑线虫属的一个种。     

河北省禾谷孢囊线虫种群密度和冬小麦产量损失的关系

为明确禾谷孢囊线虫Heterodera avenae对小麦的危害,于2011年10月—2012年6月在自然环境条件下采用定量接种方法测定了其在不同接种密度下对冬小麦产量和线虫繁殖的影响。结果表明,随着禾谷孢囊线虫接种密度的增加,小麦的株高、穗长、小穗数、分蘖数和籽粒重均呈下降趋势。小麦产量随着接种密度的增加损失率增加,在接种密度大于29个卵和2龄幼虫/g土时,小麦产量损失率均达50%以上,接种密度为465个卵和2龄幼虫/g土时损失率最大,达到77.7%;当接种密度小于116个卵和2龄幼虫/g土时,禾谷孢囊线虫的最终密度随着接种密度的增加而增加,但接种密度大于该值时,最终线虫密度则随着接种密度的增加而减少;且其繁殖系数随着接种密度的增加而降低。以小麦单株籽粒重为参数,利用Seinhorst模型拟合孢囊线虫密度与产量的关系,可知小麦对禾谷孢囊线虫的最低忍耐值为5个卵和2龄幼虫/g土,相对最低产量为0.23。     

河北省大豆孢囊线虫分子鉴定及其分布

2003年,在河北省邯郸、邢台、石家庄、保定、秦皇岛、唐山、张家口等地采集大豆根际土壤样品65份,应用大豆孢囊线虫特异性引物对采集的孢囊线虫进行了分子鉴定,结果表明从邯郸的永年、磁县、峰峰,邢台的南和、广宗、清河,保定的南大园、西马池、望都、定州,石家庄的栾城、鹿泉、平山及石家庄市郊,秦皇岛的抚宁、昌黎,唐山的迁西、迁安、丰润的大豆和张家口的红云豆上采集的孢囊线虫的孢囊及其二龄幼虫均为大豆孢囊线虫;卢龙和滦县的样品中没有发现大豆孢囊线虫的孢囊及其二龄幼虫,且孢囊的检出率与二龄幼虫的检出率的趋势一致。     

从荷兰番红花种球中截获的次薄滑刃线虫的检疫鉴定

宁波口岸从荷兰番红花种球中分离到大量滑刃属线虫活虫,该荷兰群体的主要形态特征为:雌虫尾呈亚圆柱形,尾端半圆形,尾端腹侧有尾尖突长1.5~3.0μm;后阴子宫囊显著,长89.3~118μmm;侧线3条。基于28S、ITS和18S基因DNA序列构建NJ系统发育进化树显示该荷兰群体与次薄滑刃线虫亲缘关系极近且在同一进化分支中。通过形态特征和DNA序列分析,鉴定该荷兰群体为次薄滑刃线虫(Aphelenchoides subtenuis Cobb,1926)。     

山东泰安地区小麦禾谷孢囊线虫幼虫孵化特性初步研究

为大量获得研究所需的小麦禾谷孢囊线虫2龄幼虫,在室内离体条件下研究了预处理条件、孵化温度、低温预处理时间以及田间采样时期对山东泰安地区小麦禾谷孢囊线虫幼虫孵出量的影响.结果表明:5℃低温预处理条件下,孢囊浸水处理有利于幼虫孵出;低温预处理后,孵化温度为15℃处理的2龄幼虫孵出率高于20℃处理的孵出率;低温预处理时间为8周的2龄幼虫孵出率最高;6月和8月田间采集的孢囊幼虫孵出率显著高于7月和9月,其中8月采集的孢囊幼虫孵出率最高,为最佳采集时间.     

山东省寄生烟草的孢囊线虫种类鉴定及种内群体间rDNA-ITS-RFLP分析

 在山东省5个植烟县/市采集烟草线虫土壤样本24份,其中10份土样中分离到孢囊线虫的孢囊,对之进行系统的形态学观测。孢囊阴门锥突出,双半膜孔,下桥和泡囊发达,阴门裂长（44.1±3.5） μm,阴门窗长（50.4±4.8） μm、宽（36.6±4.1） μm,下桥长（83.8±4.7） μm、宽（11.0±0.9） μm。利用大豆孢囊线虫特异性引物对分离到的孢囊线虫群体进行了分子鉴定。形态学和分子鉴定结果表明,山东省寄生烟草的孢囊线虫为大豆孢囊线虫Heterodera glycines Ichinohe,1952。对这10个孢囊线虫群体rDNA-ITS区进行了PCR扩增产物用7种限制性内切酶进行酶切和测序比对。发现,所有孢囊线虫群体均能扩增出一条大约1 000 bp大小的片段;用Alu Ⅰ、Bsh 1236 Ⅰ、Hae Ⅲ、Hha Ⅰ 、Mva Ⅰ 、Rsa Ⅰ酶切后,产生的酶切表型均相同;用Ava I酶切后,产生了2种酶切表型。所测孢囊线虫群体与GenBank收录的大豆孢囊线虫序列相似度高达99%以上。