微生物分子生态学技术及其在食品产业中的应用前景

综述了新兴的不依赖于培养的微生物分子生态学技术,包括两类：不基于微生物总基因组DNA的分析方法,主要有单碳源利用图谱法和磷脂脂肪酸图谱法;基于微生物总基因组DNA的分子分析方法,主要有克隆文库分析法、宏基因组文库技术、G＋C含量分析法、总DNA复性动力学分析法、群落水平总基因组DNA交互杂交法、荧光原位杂交技术、DNA微阵列芯片技术、变性/温度梯度凝胶电泳、单链构象多态性分析、限制片段长度多态性/扩增核糖体DNA限制性分析、末端标记限制片段长度多态性、核糖体基因间隔区分析、随机扩增多态性DNA等.并提出了这套技术在食品产业中的应用前景：发现新菌种,生产新型酶制剂,优化改造新工艺,确保食品质量与安全等,为食品产业的继续开发提供新的技术支持.     

指纹图谱技术在动物肠道微生物多样性研究中的应用

随着分子生物技术的发展，不可培养微生物多样性研究的难题得到了解决。肠道微生物处于特殊的生态环境条件下，分子生物学技术的应用使得肠道微生物多样性的研究进入了一个崭新的阶段。本文主要介绍了基于16SrRNA基因片段的一些肠道微生物研究工作中常用的分子生物学分析方法，主要包括变性梯度凝胶电泳（DGGE）．温度梯度凝胶电泳（TGGE），单链构象多态性（SSCP），限制性片段长度多态性（RFLP），放大片断长度多态性（AFLP）和随机扩增多态性DNA（RAPD）等指纹图谱技术。     

叶围微生物宏基因组文库的构建和分析

宏基因组文库技术是开发利用未培养微生物基因资源的有效途径。采用CTAB-SDS法直接从植物叶面沉积样品中提取基因组DNA,构建了以puc19为载体的基因组文库,共获得8126个阳性克隆,文库DNA总容量约30.1MB,平均插入片段长度为3.8kb。叶围微生物基因组文库的成功构建,对于以后研究植物和叶围微生物的关系有重要意义。     

卡瓦胡椒及胡椒的AFLP分子标记探讨

扩增片段长度多态性（AFLP）技术是一项新的分子标记技术，是基于PCR技术扩增基因组DNA限制性片段，基因组DNA先用限制性内切酶切割，然后将双链接头连接到DNA片段的末端，接头序列和相邻的限制性位点序列作为引物结合位点。笔者采用AFLP分子标记技术探讨了卡瓦胡椒与胡椒及胡椒属其他几个野生种的亲缘关系。     

末端限制性片段长度多态性技术(T-RFLP)在微生物群体分析上的应用与技术优化

末端限制性片段长度多态性技术(T-RFLP)是以荧光标记引物PCR为基础,根据末端限制性片段长度区分出微生物群体组成的一种微生物群体图谱法。本文综述了该方法在群体微生物分析上的应用及DNA提取、PCR扩增、酶切和数据分析等步骤的技巧与优化,总结了科学应用该技术的要求以及和多重PCR、gyrB基因等相结合的观点。     

遗传标记及其在园艺植物研究中的应用

评述了形态学标记(morphologicalmarkers)、细胞学标记(cytologicalmarkers)、生化标记(bio鄄chemicalmarkers)、DNA分子标记(DNAmolecularmarkers)等技术的发展现状,着重介绍了近年来DNA指纹图谱技术,即限制性片段长度多态性(RestrictionFragmentLengthPolymorphism,RFLP)、随机扩增片段长度多态性(RandomAmplifiedPolymophismicDNA,RAPD)、简单重复序列(simplesequencere鄄peats,SSR)、扩增片段长度多态性(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism,AFLP)、单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)等标记技术的特点及其在园艺植物品种的分类鉴定、纯度的分析检测及品种间亲缘关系等研究中的应用。     

AFLP分子标记技术及应用研究进展

扩增片段长度多态性技术A(FLP)是一项新发展的分子标记技术,它基于选择性扩增完全酶切消化后的基因组D NA片段,包括酶切与连接、选择性扩增和检测分析3个步骤。该技术综合了RFLP的可靠性和RA PD的高效性,可适用于任何来源和各种复杂度的DNA。在此论述了该技术的基本原理、特点和技术流程,及近年来的发展与应用研究。     

分子标记技术在植物学研究中的应用

分子标记与形态标记，细胞学标记和生化标记三类遗传标记技术相比，具有因直接以DNA的形式表现而在植物的任何生长阶段都可检测，遍布整个基因组，多态性高，检测手段简单迅速，无基因多效性，能够明确辨别等位基因，实验重复性好等优点。目前最常用的分子标记技术主要有限制性片段长度多态性技术（resriction fragment length polymor-phism，简称RFLP），随机扩增多态性DNA技术（random amplified polymorphic DNA,简称RAPD），微卫星DNA技术（Simple Sequence Repeat,简称SSR）,扩增片段长度多态性技术（Amplified Fragment Length Poymorphism，简称AFLP）等。分子标记技术在植物学研究中得到了广泛的应用，在植物分类学及遗传多样性，种质资源保护，遗传图谱的建立，基因定位与辅助选择育种，指纹图谱应用于作物品种鉴定等研究方面均取得较好的应用效果。这项技术的发展具有巨大的应用潜力和广阔的应用前景。     

RAPD技术在志贺菌及沙门菌鉴别中的应用

以鸡鲍氏志贺菌、鸡白痢沙门菌和痢疾志贺菌为研究对象,分别提取基因组DNA,利用6条随机引物以随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组DNA进行了分析.结果表明,4条随机引物能较好地在这3种菌中检测到多态性分子标记.共扩增出了59个DNA片段,其中3个菌株共有的谱带有7条,而显示多态性的片段有52条,占88.1%.引物P6的扩增图谱可用于3株细菌的鉴别.在对3株细菌扩增中发现,鸡鲍氏志贺菌与人痢疾志贺菌的扩增条带相同率达67%,但各有自己的特征性谱带.鸡沙门菌与志贺菌的扩增谱带相差甚远.     

蒙古黄芪总DNA提取方法的改进研究

[目的]改进蒙古黄芪（Astragalus membranaceus var.mongholicus）总DNA的CTAB提取法。[方法]以蒙古黄芪为试验材料,通过提取试验研究了利用改进CTAB法从植物组织中提取总DNA的效果。[结果]提取DNA的凝胶电泳图谱上呈现出清晰、整齐的条带且拖带较少,说明所提DNA的纯度较高,质量较好。利用改进CTAB法提取的DNA进行trnS-trnG扩增的产量高,说明提取的DNA可用于测序等后续分析。用提取的基因组DNA为模板,用多对特异性ISSR引物对其进行PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱表明各基因组DNA均扩增出多态性谱带,且带型清晰,易区分,说明利用提取的基因组DNA进行ISSR分子标记检测的效果良好。[结论]改进CTAB法可有效消除次生物质对DNA的干扰,提取的基因组DNA可用于叶绿体trnS-trnG测序分析和ISSR分子标记分析。     

番茄分子标记研究进展

本文综述了近年来RFLP，RAPD，SSR及AFLP等几种DNA分子标记技术在番茄育种上的应用，以及分子标记在辅助选择育种，构建连锁图谱，分离目的基因和QTL分析上的发展前景。     

分子生物学新方法在根瘤菌分类中的应用

随着分子生物学技术的发展,一些全新的方法应用于根瘤菌分类,使根瘤菌分类的研究得到了迅速发展,从过去的传统分类过渡到了以遗传特征和系统发育为主要依据的现代系统分类。研究在参考大量文献的基础上,概述了全细胞可溶性蛋白电泳、多位点酶电泳、ＤＮＡＧ＋Ｃ摩尔百分含量测定及ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交、限制性片段长度多态性分析、随机扩增ＤＮＡ片段的多态性、基因外回文重复序列ＰＣＲ扩增技术及１６ＳｒＤＮＡ序列分析确定根瘤菌系统发育等７种分子生物学方法的原理、特点,以及在根瘤菌分类研究中的应用现状和前景。     

分子标记及其在芸薹属植物育种中的应用

随着生物技术的迅猛发展,分子标记技术的应用越来越受到生物学家及育种家的重视,应用也日趋广泛。文章综述了近年来RFLP、RAPD、SSR、CAPS、AFLP等几种DNA分子技术及其在芸薹属植物育种中的应用。     

10株白僵菌菌株ITS序列测定和系统发育分析

通过对10株白僵菌菌株进行培养和提取基因组DNA,并利用真菌ITS序列通用引物ITS4和ITS5进行PCR扩增,均得到了1条长约500 bp DNA产物。分别对该产物进行序列测定和分析表明,这10株白僵菌菌株的ITS序列长为490~494 bp;利用ITS序列构建系统发育树表明,菌株YD-1、YD-2、JN-1、QC-1、SY-1、YC-1、YC-2、GA-1和FJ-2均为球孢白僵菌（Beauveria bassania）,而菌株FJ-1很可能为白僵菌属的一个新成员。     

A sequence in M13 phage detects hypervariable minisatellites in human and animal DNA

The term "DNA fingerprint" has been used to describe the extensive restriction fragment length polymorphism associated with hypervariable minisatellites present in the human genome. Until now, it was necessary to hybridize Southern blots to specific probes cloned from human genomic DNA in order to obtain individual-specific restriction patterns. The present study describes the surprising finding that the insert-free, wild-type M13 bacteriophage detects hypervariable minisatellites in human and in animal DNA, provided no competitor DNA is used during hybridization. The effective sequence in M13 was traced to two clusters of 15-base pair repeats within the protein III gene of the bacteriophage. This unexpected use of M13 renders the DNA fingerprinting technology more readily available to molecular biology laboratories.     

家蚕丝蛋白基因分子标记的建立

利用已知丝素基因和丝胶基因的克隆片段（ｐＦｂ１００，ｐＳｒ１００）为探针和１２ 个限制内切酶，对家蚕基因组ＤＮＡ进行了限制性片段长度多态性分析，结果表明，其ＤＮＡ多态性可用作家蚕基因图谱的分子标记。     

葡萄金黄化植原体16SrDNA检测与RFLP分析

[目的]对多种植原体16SrDNA基因序列进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析比较,以期区分葡萄金黄化植原体不同亚种,从而为葡萄金黄化植原体的鉴定提供新依据.[方法]用植原体通用引物R16mF2/R16mR1扩增7种不同植原体16SrDNA基因序列,得到约1.5 kb的DNA片段,将此片段克隆到PGM-T载体,并通过酶切鉴定,对重组阳性克隆进行核酸序列测定及同源性分析,利用限制性内切酶XmnⅠ、XspⅠ、TaqⅠ和Rsa Ⅰ对目的片段进行酶切电泳分析.[结果]所扩增2个不同亚种的葡萄金黄化植原体D型和C型序列同源性最高,达99.72;,但利用限制性内切酶可以将上述2个亚种从植原体榆树黄化组中区分.[结论]利用限制性内切酶分析通用引物R16mF2/R16mR1所扩增的基因片段,可以将葡萄金黄化植原体区分.     

Direct cloning and sequence analysis of enzymatically amplified genomic sequences

A method is described for directly cloning enzymatically amplified segments of genomic DNA into an M13 vector for sequence analysis. A 110-base pair fragment of the human beta-globin gene and a 242-base pair fragment of the human leukocyte antigen DQ alpha locus were amplified by the polymerase chain reaction method, a procedure based on repeated cycles of denaturation, primer annealing, and extension by DNA polymerase I. Oligonucleotide primers with restriction endonuclease sites added to their 5' ends were used to facilitate the cloning of the amplified DNA. The analysis of cloned products allowed the quantitative evaluation of the amplification method's specificity and fidelity. Given the low frequency of sequence errors observed, this approach promises to be a rapid method for obtaining reliable genomic sequences from nanogram amounts of DNA.